頂空 氣相色譜法測定藥酒中的甲醇量

王 芍，牛宇東，魏 萍（西安市食品藥品檢驗所，西安 710054）

頂空 氣相色譜法測定藥酒中的甲醇量

王 芍，牛宇東＊，魏 萍（西安市食品藥品檢驗所，西安 710054）

目的 建立藥酒中甲醇量的測定方法。方法 采用頂空－氣相色譜法，色譜柱為Agilent Technologies DB－WAX（30m× 0.32mm×0.25μm），FID檢測器；進樣口溫度：140℃；檢測器溫度220℃；載氣流速：0.3mL·min－1；梯度升溫：29℃保持1min，以0.5℃·min－1速率升至31℃，保持10min，以5℃·min－1速率升至65℃，保持1min，以50℃·min－1速率升至200℃，保持2min；時間周期：38min。結果 甲醇在0.000 1～0.005mL·mL－1范圍內線性關系良好，r＝0.999 4，平均回收率為99.6%，RSD 2.5%（n＝6）。結論 該方法檢測結果準確、專屬性強、靈敏度高、重復性好，可用于藥酒中甲醇量的控制。

甲醇；藥酒；頂空－氣相色譜法

藥酒是常用的中藥制劑，具有舒經活血、溫通發散、引藥歸經等獨特的功效，在臨床上被廣泛應用。但其生產過程中會產生微量的甲醇［1］，也有不法分子采用工業乙醇勾兌藥酒，其甲醇含量較高，會引起頭痛、惡心、失明甚至死亡，嚴重危害人民群眾的身體健康。因此在《中國藥典》2010年版一部中嚴格規定了甲醇量的限度，不得超過萬分之五［2］。

目前檢測藥酒中甲醇量的方法主要有光度法［3］、氣相色譜法［4］、極譜法［5］，其中應用最多的是氣相色譜法。而頂空－氣相色譜法［6］可以免除冗長繁瑣的樣品前處理過程，避免有機溶劑帶入的雜質對分析造成干擾，減少對色譜柱及進樣口的污染，有利于對小分子揮發性有機成分進行準確測定。本文采用頂空－氣相色譜法對蟲草雙參酒中的甲醇進行測定，結果表明該方法簡單，專屬性強、靈敏度高、重復性好，可用于藥酒中甲醇量的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent Technologies 7890A氣相色譜儀（包括Agilent Technologies G1888頂空進樣儀；FID檢測器）；Agilent Chemstation色譜工作站；20 mL頂空進樣瓶，聚四氟乙烯薄膜包裹的硅橡膠塞，鋁封套。

1.2 試藥 蟲草雙參酒（批號20120319，20120320，20120401，西安阿房宮制藥有限公司）。實驗用水為超純水（Millipore公司）；甲醇（Fisher Scientific色譜純）；高純氮氣；高純氫氣；干燥空氣。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 毛細管柱：Agilent Technologies DB－WAX（30m×0.32mm×0.25μm）；進樣口溫度：140℃；檢測器溫度220℃；載氣流速：0.3mL·min－1；梯度升溫：29℃保持1min，以0.5℃·min－1速率升至31℃，保持10min，5℃·min－1速率升至65℃，保持1 min，以50℃·min－1速率升至200℃，保持2min；時間周期：38min。頂空條件：平衡溫度80℃；平衡時間20min，傳輸管線溫度100℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密量取甲醇，加水制成0.01mL·mL－1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取蟲草雙參酒作為供試品溶液。

2.4 空白溶液的制備 取配制甲醇用的去離子水作為空白溶液。

2.5 線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.5，1，2，5，12.5和25mL，分別置于50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，各取3mL按上述色譜條件測定，以峰面積的積分值（Y）與對照品的體積分數（X）進行回歸，得回歸方程：Y＝36.997 X－1.772 6，r＝0.999 4，結果表明，甲醇在0.000 1～0.005mL·mL－1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 精密度實驗 精密吸取體積分數1‰甲醇對照品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，測得甲醇峰面積的積分值的RSD為0.96%。

2.7 穩定性實驗 取同一批次的供試品溶液，分別于0，6，12，24，48和72h按上述色譜條件進樣，測得甲醇峰面積的積分值的RSD為1.70%。結果表明在72h內穩定。

2.8 重復性實驗 取同一批次的供試品溶液5份，按上述色譜條件測得甲醇的含量的RSD為0.90%。結果表明該方法重復性良好。

2.9 回收率實驗 精密吸取甲醇7.5，15和30μL，置于200mL量瓶中，加已知含量（0.076‰）的供試品溶液至刻度，每一體積分數平行配制兩份，作為回收率實驗溶液，分別測定其甲醇含量，結果回收率為99.6%，RSD為2.5%，見表1。

表1 加樣回收率實驗結果Tab.1 The results of recovery test （n＝6）

2.10 樣品測定 取3批供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，按外標法計算，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果Tab.2 Determination of sample contents

3 討論

3.1 氣相色譜條件的篩選 筆者采用《中國藥典》規定的方法，在現有的實驗室條件下，對樣品進行了甲醇量的反復測定，結果無法達到基線分離，理論板數達不到藥典要求，不能準確測定甲醇含量。故對氣相條件進行了摸索，分別考察了以下條件：0.1，0.3和0.5mL·min－1的載氣流速；25，27，29，31，35，40和65℃初始溫度；0.5，1，3，5和10℃·min－1速率。最后摸索出本實驗方法，結果分離度大于1.5，理論板數大于50 000，見圖1。

圖1 甲醇氣相色譜圖Fig.1 GC chromatogram of methanol

3.2 頂空條件的篩選

3.2.1 平衡時間 精密量取甲醇溶液5份，分別考察5，10，15，20和30min平衡后甲醇峰面積。結果顯示，平衡時間在0～15和20～30min時變化不大，而在15～20min有明顯的上升趨勢，且在20min達到頂點，故選擇20min作為樣品的平衡時間。

3.2.2 平衡溫度 精密量取甲醇溶液5份，考慮到甲醇的沸點為64.5℃，故選擇70，75，80，85和90℃的平衡溫度進行考察。結果表明隨著溫度的升高，甲醇峰面積的響應值逐漸增大，但是考慮到中藥酒劑含有的成分比較復雜，采用較高平衡溫度，一方面可以使樣品表面形成薄膜，阻擋揮發性成分的氣化，另一方面蒸發出的雜質也增多，影響結果，故選用80℃作為樣品的平衡溫度。

3.3 檢出限與定量限 由于儀器的靈敏度較高，很微量的甲醇就可以出現信號峰，但較小的峰誤差比較大，不能滿足定量的要求，因此需確定檢出限和定量限，使結果準確。實驗中取標準曲線的最低體積分數0.1‰連續進樣5次，測得信噪比S／N＝3時的最低體積分數為0.003‰，作為檢出限；S／N＝10時的最低體積分數為0.01‰，作為定量限。

［1］王麗，徐長根，高海，等.GC法測定藥酒中甲醇量［J］.西北藥學雜志，1998，13（6）：283.

［2］國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄60－61

［3］李晶，鄭立慶，張甜甜，等.賴氨酸－甲醇－1，2－萘醌－4－磺酸鈉體系褪色光度法測定甲醇［J］.應用化學，2010， 27（4）：484－487.

［4］米爾芳，王彩云.氣相色譜測定酒中甲醇含量的不確定度分析［J］.實用醫技雜志，2008，15（10）：1318－1320.

［5］付華鋒，孫林，過瑋，等.基于甲醇自由基還原波的甲醇極譜測定［J］.分析實驗室，2002，21（10）：76－79.

［6］吉同琴，趙硯榮，魏佳，等.頂空毛細管氣相色譜法測定替加環素中的殘留溶劑［J］.西北藥學雜志，2012，27（2）：123－124.

Determination of methanol in herb wine by headspace GC with capillary column

WANG Shao，NIU Yudong＊，WEI Ping（Xi′an Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710054，China）

Objective To establish a method for determination of methanol in the herb wine.Methods Head space GC with capillary column Agilent Technologies DB－WAX（30m×0.32mm×0.25μm）was used，and the detector was FID.The injector temperature was 140℃，the detector temperature was 220℃，and the velocity of carrier gas was 0.3mL·min－1.The column temperature was changed according to the following program：initial temperature was kept at 29℃for 1min，then raised to 31℃at the rate of 0.5℃·min－1，maintained for 10min，then raised to 65℃at the rate of 5℃·min－1，maintained for 1min，then raised to 200℃at the rate of 50℃·min－1，maintained for 2min.The cycle time was 38min.Results Methanol showed a good linear relationship in the range of 0.000 1－0.005mL·mL－1（r＝0.999 4），and the average recovery was 99.6%with RSD 2.5%（n＝6）.Conclusion This method is simple and accurate，has a strong specificity，high sensitivity and fine reproducibility.It could be used to determine methanol in herb wine.

methanol；herb wine；head－space gas－chromatography

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.012

R927.2

A

1004－2407（2015）04－0367－03

2014－11－19）

王芍，女，中藥師

＊通信作者：牛宇東，女，主任中藥師