保健酒中總皂苷含量測(cè)定方法研究

徐媛+白少偉+龐文生+胡娟

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂純化樣品，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)保健酒中總皂苷含量。三個(gè)批次的保健酒樣品中總皂苷平均含量為53.5mg/100mL。

【關(guān)鍵詞】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；總皂苷含量

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0030-01

總皂苷被認(rèn)為是保健食品中的主要功效成分，廣泛存在于多種藥食兩用、保健中藥和保健食品當(dāng)中，具有抗疲勞、促進(jìn)記憶、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用。本保健酒以多味中藥為主要原料，含有總皂苷和多糖等多種功效成分。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》[1]中保健食品總皂苷的測(cè)定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)行純化，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)總皂苷含量。

1 儀器與材料

UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋，10ml注射器，離心機(jī)，電子天平，水浴鍋。

受試樣品（本課題組自制）；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所），香草醛-冰乙酸溶液（稱取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂（Sigma化學(xué)公司，U.S.A.），中性氧化鋁（層析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等試劑均為分析純；

2 試驗(yàn)方法

2.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精確稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人參皂苷Re 2.0mg。

2.2 受試樣品的處理 吸取1.0mL保健酒試樣放蒸發(fā)皿中60℃水浴揮干，用水浴溶解殘?jiān)么艘哼M(jìn)行柱層析。

2.3 樣品柱層析

2.3.1 層析柱的制備 用10ml注射器作層析管，內(nèi)裝3cm Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂，上加1cm中性氧化鋁。先用25ml 70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 試樣總皂苷的吸附及洗脫 精確吸取1.0ml已處理好的試樣溶液（見(jiàn)2.2），注入已處理的注射器內(nèi)，待試樣滲透柱內(nèi)后，用25ml水洗柱，棄去洗脫液，再用25ml 70%乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干。以此作顯色用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)管的制備 吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸發(fā)皿中，水浴揮干（低于60℃），以下操作從“2.3層析柱…”起，與試樣相同。待測(cè)吸收度值。

2.5 皂苷的顯色與比色測(cè)定 在上述已揮干的接收液中準(zhǔn)確加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使殘?jiān)既芙猓偌?.8ml高氯酸，混勻后移入5ml帶塞刻度離心管中，60℃水浴上加熱10min，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0ml，搖勻后，以1cm比色池于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。

2.6 計(jì)算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：試樣中總皂苷量（以總?cè)藚⒃碥誖e計(jì)，計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字），g/100g（ml）；A1—被測(cè)液的吸光度值；A2—標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值；C—標(biāo)準(zhǔn)管人參皂苷Re的量，μg；V—試樣稀釋體積，ml；m—試樣質(zhì)量，g（ml）。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表1。

3.2 討論 層析柱中的中性氧化鋁和大孔吸附樹(shù)脂分別屬于非極性無(wú)機(jī)和有機(jī)吸附劑，大孔樹(shù)脂選擇性強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，吸附量大，對(duì)皂苷的吸附力強(qiáng)，而對(duì)其他物質(zhì)吸附力差，易被水洗滌[2-3]。保證大孔樹(shù)脂分離純化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法對(duì)甘草皂苷進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，顯色反應(yīng)過(guò)程中吸光度隨加熱時(shí)間和溫度的改變而變化，測(cè)定時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制測(cè)定時(shí)間，規(guī)范操作步驟[4]；樣品從60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷卻，精密加入醋酸，確保搖勻后進(jìn)行測(cè)定，從而保證檢測(cè)結(jié)果的高準(zhǔn)確度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用時(shí)現(xiàn)配，否則空白值的顏色會(huì)加深，影響測(cè)定的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 蘭霞，王洪新.比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（4）：886-887.

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂純化樣品，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)保健酒中總皂苷含量。三個(gè)批次的保健酒樣品中總皂苷平均含量為53.5mg/100mL。

【關(guān)鍵詞】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；總皂苷含量

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0030-01

總皂苷被認(rèn)為是保健食品中的主要功效成分，廣泛存在于多種藥食兩用、保健中藥和保健食品當(dāng)中，具有抗疲勞、促進(jìn)記憶、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用。本保健酒以多味中藥為主要原料，含有總皂苷和多糖等多種功效成分。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》[1]中保健食品總皂苷的測(cè)定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)行純化，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)總皂苷含量。

1 儀器與材料

UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋，10ml注射器，離心機(jī)，電子天平，水浴鍋。

受試樣品（本課題組自制）；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所），香草醛-冰乙酸溶液（稱取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂（Sigma化學(xué)公司，U.S.A.），中性氧化鋁（層析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等試劑均為分析純；

2 試驗(yàn)方法

2.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精確稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人參皂苷Re 2.0mg。

2.2 受試樣品的處理 吸取1.0mL保健酒試樣放蒸發(fā)皿中60℃水浴揮干，用水浴溶解殘?jiān)么艘哼M(jìn)行柱層析。

2.3 樣品柱層析

2.3.1 層析柱的制備 用10ml注射器作層析管，內(nèi)裝3cm Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂，上加1cm中性氧化鋁。先用25ml 70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 試樣總皂苷的吸附及洗脫 精確吸取1.0ml已處理好的試樣溶液（見(jiàn)2.2），注入已處理的注射器內(nèi)，待試樣滲透柱內(nèi)后，用25ml水洗柱，棄去洗脫液，再用25ml 70%乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干。以此作顯色用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)管的制備 吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸發(fā)皿中，水浴揮干（低于60℃），以下操作從“2.3層析柱…”起，與試樣相同。待測(cè)吸收度值。

2.5 皂苷的顯色與比色測(cè)定 在上述已揮干的接收液中準(zhǔn)確加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使殘?jiān)既芙猓偌?.8ml高氯酸，混勻后移入5ml帶塞刻度離心管中，60℃水浴上加熱10min，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0ml，搖勻后，以1cm比色池于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。

2.6 計(jì)算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：試樣中總皂苷量（以總?cè)藚⒃碥誖e計(jì)，計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字），g/100g（ml）；A1—被測(cè)液的吸光度值；A2—標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值；C—標(biāo)準(zhǔn)管人參皂苷Re的量，μg；V—試樣稀釋體積，ml；m—試樣質(zhì)量，g（ml）。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表1。

3.2 討論 層析柱中的中性氧化鋁和大孔吸附樹(shù)脂分別屬于非極性無(wú)機(jī)和有機(jī)吸附劑，大孔樹(shù)脂選擇性強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，吸附量大，對(duì)皂苷的吸附力強(qiáng)，而對(duì)其他物質(zhì)吸附力差，易被水洗滌[2-3]。保證大孔樹(shù)脂分離純化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法對(duì)甘草皂苷進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，顯色反應(yīng)過(guò)程中吸光度隨加熱時(shí)間和溫度的改變而變化，測(cè)定時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制測(cè)定時(shí)間，規(guī)范操作步驟[4]；樣品從60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷卻，精密加入醋酸，確保搖勻后進(jìn)行測(cè)定，從而保證檢測(cè)結(jié)果的高準(zhǔn)確度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用時(shí)現(xiàn)配，否則空白值的顏色會(huì)加深，影響測(cè)定的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 蘭霞，王洪新.比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（4）：886-887.

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂純化樣品，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)保健酒中總皂苷含量。三個(gè)批次的保健酒樣品中總皂苷平均含量為53.5mg/100mL。

【關(guān)鍵詞】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；總皂苷含量

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0030-01

總皂苷被認(rèn)為是保健食品中的主要功效成分，廣泛存在于多種藥食兩用、保健中藥和保健食品當(dāng)中，具有抗疲勞、促進(jìn)記憶、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用。本保健酒以多味中藥為主要原料，含有總皂苷和多糖等多種功效成分。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》[1]中保健食品總皂苷的測(cè)定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)行純化，以人參皂苷Re為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測(cè)總皂苷含量。

1 儀器與材料

UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋，10ml注射器，離心機(jī)，電子天平，水浴鍋。

受試樣品（本課題組自制）；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所），香草醛-冰乙酸溶液（稱取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂（Sigma化學(xué)公司，U.S.A.），中性氧化鋁（層析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等試劑均為分析純；

2 試驗(yàn)方法

2.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精確稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人參皂苷Re 2.0mg。

2.2 受試樣品的處理 吸取1.0mL保健酒試樣放蒸發(fā)皿中60℃水浴揮干，用水浴溶解殘?jiān)么艘哼M(jìn)行柱層析。

2.3 樣品柱層析

2.3.1 層析柱的制備 用10ml注射器作層析管，內(nèi)裝3cm Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂，上加1cm中性氧化鋁。先用25ml 70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 試樣總皂苷的吸附及洗脫 精確吸取1.0ml已處理好的試樣溶液（見(jiàn)2.2），注入已處理的注射器內(nèi)，待試樣滲透柱內(nèi)后，用25ml水洗柱，棄去洗脫液，再用25ml 70%乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干。以此作顯色用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)管的制備 吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸發(fā)皿中，水浴揮干（低于60℃），以下操作從“2.3層析柱…”起，與試樣相同。待測(cè)吸收度值。

2.5 皂苷的顯色與比色測(cè)定 在上述已揮干的接收液中準(zhǔn)確加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使殘?jiān)既芙猓偌?.8ml高氯酸，混勻后移入5ml帶塞刻度離心管中，60℃水浴上加熱10min，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0ml，搖勻后，以1cm比色池于560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。

2.6 計(jì)算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：試樣中總皂苷量（以總?cè)藚⒃碥誖e計(jì)，計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字），g/100g（ml）；A1—被測(cè)液的吸光度值；A2—標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值；C—標(biāo)準(zhǔn)管人參皂苷Re的量，μg；V—試樣稀釋體積，ml；m—試樣質(zhì)量，g（ml）。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表1。

3.2 討論 層析柱中的中性氧化鋁和大孔吸附樹(shù)脂分別屬于非極性無(wú)機(jī)和有機(jī)吸附劑，大孔樹(shù)脂選擇性強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，吸附量大，對(duì)皂苷的吸附力強(qiáng)，而對(duì)其他物質(zhì)吸附力差，易被水洗滌[2-3]。保證大孔樹(shù)脂分離純化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法對(duì)甘草皂苷進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，顯色反應(yīng)過(guò)程中吸光度隨加熱時(shí)間和溫度的改變而變化，測(cè)定時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制測(cè)定時(shí)間，規(guī)范操作步驟[4]；樣品從60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷卻，精密加入醋酸，確保搖勻后進(jìn)行測(cè)定，從而保證檢測(cè)結(jié)果的高準(zhǔn)確度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用時(shí)現(xiàn)配，否則空白值的顏色會(huì)加深，影響測(cè)定的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 蘭霞，王洪新.比色法測(cè)定甘草中總皂苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（4）：886-887.