病理HE染色制片的質量控制實踐

郭海燕 王志生 武 艷 孫 巖*

（吉林省腫瘤醫院，吉林 長春130012）

病理HE染色制片的質量控制實踐

郭海燕 王志生 武 艷 孫 巖*

（吉林省腫瘤醫院，吉林 長春130012）

目的 掌握影響病理HE染色制片質量的因素，規范且準確地制備優質HE染色制片。方法 通過對我院2012年1月至2013年1月的石蠟病理切片800例進行快速的組織病理染色，分析影響病理HE染色制片質量的關鍵因素。結果 所有的病理切片在適宜溫度和試劑濃度下染色均獲得較好的效果。結論 病理HE染色制片的質量與操作人員的技術水平、操作經驗、質量的控制方法等有關，要制備出優質的切片需要嚴格做好每一操作環節。

病理；HE染色制片；質量控制

在臨床工作中，病理診斷是一個非常重要的環節，決定著臨床治療的方法，如手術的方法、預后的治療、常規的護理等等［1］。病理醫師的診斷技術水平和組織病理切片制作的質量直接影響病例診斷的結果，其中HE染色技術是制片質量的核心內容，只有保證制片的質量，才能提高診斷的準確率，目前，病理科最關心的問題就是如何提高制片的質量，對于臨床工作中常常出現質量不穩定的問題，如切片組織破碎、病理染色模糊等等，工作人員進行了控制病理HE染色制片的質量的實踐，現對其總結分析如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：選擇2012年1月至2013年1月期間來我院就治患者的石蠟病理切片800例，其中子宮內膜180例、活檢組織120例、骨組織 234例、脂肪組織 266 例。

1.2實踐操作方法

1.2.1標本的取材要求和固定：標本在取材時要選用合適的且鋒利的刀具，切割時一定不要拖拉，避免在取材時用力夾、鋸、壓使組織變形，組織大小要適宜一般為：長22 mm、寬22 mm、高不大于2 mm，然后進行脫水。一旦組織切的太厚，會出現脫明透明浸蠟不徹底，這樣是很難切除完整切片的，而且染色不均勻，制片的質量下降。染色不均、灰染的主要原因是組織固定不良，所以制片的關鍵是固定組織。離體后的組織要做到盡快固定，固定的效果會影響接下來的制片過程。固定液的種類有很多，一般選擇10%福爾馬林，它是常規HE切片的首選固定液，送檢的標本通常采用乙醇固定，需要再使用上述濃度的福爾馬林溶液對標本再次固定，否則，會使標本染色不良造成所謂的灰染，原因是乙醇沉淀的球蛋白和白蛋白不溶于水，但是核蛋白會溶于水。

1.2.2脫水和透明處理：脫水和透明是HE制片技術的核心，關系到后面制片的每一個環節，所以脫水和透明的處理要給予足夠的重視，如果忽視了此過程浸蠟和切片就不能很好的完成，這樣會降低切片的質量。脫水時選擇酒精作為溶劑，濃度按照梯度進行：70%、80%、90%、95%酒精最后到無水酒精完畢。其中95%酒精和無水酒精需要足量要保證濃度。無水酒精對組織的處理時間控制在2～3 h內，時間一旦過久組織脫水過多，切片的質量會下降。二甲苯是常用的透明劑，作用是使組織變脆，但過脆就會使組織易碎，所以要嚴格控制組織在二甲苯溶液中的浸泡時間，1 h左右為較好時間，需要注意的是二甲苯和酒精需要依據組織多少來更換，所以絕不可以等到切片出問題才換。

1.2.3浸蠟的方法：目的是清除掉二甲苯，通常石蠟的溫度保持在56～58 ℃，不宜太高［2］，浸蠟的時間一般為1～3 h根據組織大小薄厚而定。過高的溫度導致組織收縮，變脆也變硬，這樣得到的切片與理想的切片相差很遠了。

1.2. 4 包埋過程：包埋石蠟的選擇影響切片質量，包埋石蠟的溫度60～65 ℃［3］，溫度過高時會引起組織蛋白變質，染色出現障礙對染料拒染。如果操作在低溫進行，動作一定要快，組織的溫度要與石蠟的溫度相融合，也要與使用的鑷子溫度保持一致，防止組織和周圍脫裂，包埋過程中病灶組織切面向下，層次清楚的腸管、囊壁組織進行豎立包埋。對于皮膚組織表面必須與包面垂直，有益于較好的觀察到皮膚的各層結構。

1.2.5石蠟切片技術：制作出一張薄厚均勻，完整的組織病理切片最為關鍵的是切片機的優質，所以醫院應選用進口的切片機，切片時要一次性切片，不要復切，切片刀具的鋒利程度會對切片是否產生缺口有決定作用，切片刀具選擇20°～30°角度大小放置，使用時要嚴格檢查切片機各部位零件螺絲是否已經旋緊，避免產生橫皺紋。通常切片的厚度在3～5 μm為宜［4］，如果切片時用力過猛或者用力不均勻，這樣會造成切出的薄片薄厚不等，對像皮膚組織的表皮，胃腸組織的漿膜較硬難切的組織放在上端，這樣切片切出的很完整。對認為是癌癥患者的病理，要做連續切片和深切片，通過鏡下的仔細觀察查找病變的原因。

1.2.6染色過程：病理工作中最基本的染色方法是蘇木精-伊紅染色方法，它能很好地展現組織的結構和細胞的形態，染色后的切片非常漂亮，細胞核呈現藍色，細胞質是粉紅色，不同部位對比較明顯，如果想讓該良好的染色效果保持長久，可將配好的染色溶液用濾紙過濾一次，然后根據染色液的量每100 mL染液加5 mL冰醋酸，再次過濾。石蠟切片需要脫掉石蠟后方能顯色，如果二甲苯放置的環境是低溫或者已經擱置了很久（適宜時間5～10 min），在切片脫蠟是要適時加長時間，同時石蠟切片通過在Harris蘇木精染色后，不可以長時間在鹽酸酒精溶液中停留，需要在鏡下控制切片的分化程度，如果過度，必須經水洗進行第二次染色，染色后的切片再通過不同濃度的酒精脫水，酒精的濃度選擇由低到高，切片在低濃度酒精中停留時間短，隨著酒精濃度的變化，時間也逐漸延長，無水酒精要保證絕對無水，如果不放心可以加入無水CuSO4，溶液要是變成藍色說明無水酒精里面含水，這是要更換無水酒精。蘇木素、伊紅的配制與其染色方式以及所處的溫度、染色溶液的酸堿程度和染色時間都會影響染色的質量，在病理HE染色制片時，最常用的染液就是Harris蘇木素和伊紅染液［5］，而關鍵的一步是蘇木素染好后的分化及藍化。

優質的病理組織切片猶如一張美觀的藝術圖片，紅與藍的圖痕與紋理，看到如此完美的工作成果更加激起工作人員積極上進的決心，為病理診斷提供更好的條件，為患者的治療提供準確的結果。

1.2.7操作中注意事項：石蠟切片的過程中出現切片脫落或者部分脫落是常見的問題，主要原因有組織中含有血液組成成分、膠質成分，對此可以先在干凈的載玻片上涂一些蛋白甘油之后再進行貼片；組織較硬、組織取材太大太厚也會引起脫落，所以要注意取材大小。用無水乙醇和二甲苯脫水過程中，時間過長，太低的浸蠟溫度，造成石蠟不溶解，而石蠟長時間沒有更換或者浸蠟時間太久，還有溫度太高這些因素會造成病理組織因收縮過大變脆變硬，不易進行切片。

2　結 果

通過在適宜環境溫度和試劑濃度下對選取的800例病理切片進行快速染色，均獲得了較好的染色效果。

3　討 論

目前病理HE染色制片已經大量用于臨床診斷與科研中，這種技術在醫療診斷中占有重要地位，是最重要也是最基礎的，對臨床的治療具有指導作用，其切片質量直接決定著病理診斷的準確性，病理HE染色切片的優劣，在電鏡下顯示各種各樣的圖像，甚至出現相反的結果。由此可見，病理HE染色切片質量的重要性，醫療技術人員完全認識到了這一點，不斷提高自身素質和技術水平，追求高質量的HE切片，為其他免疫組化染色等工作做基礎，當然制備出優質的病理切片不是一件容易的事情，需要工作人員在平時的工作中注意觀察，細心總結，不斷提高自身的動手能力，這樣熟練技巧和實踐的經驗將會進一步提高病理診斷的準確性。通過上述實踐，組織細胞的取材過程、脫水過程、切片過程都對病理HE染色質量具有很大的影響，染色的質量又直接影響病理科室的診斷準確率，如果HE染色的質量不好，診斷的結果就不明確，進而影響臨床上對患者疾病的治療，所以不同的標本采用不同的取材方式。細胞核的著色決定著HE染色的質量，可以說這項工作是物理和化學共同的作用，主要由于組織內部有很多細小的孔，通過滲透作用染料溶液與組織結合，這時組織會吸收染料溶液發生擴散和溶解作用，再次使二者緊密結合；染料溶液含有部分陽離子和部分陰離子，在與組織細胞接觸時會分別結合組織中的酸性物質和堿性物質［6］，生成固定的分子，非常的牢固。病理HE染色的質量與操作過程中的各個環節都息息相關，所以每一步驟都不容忽視，一定做到要提高制片質量，為臨床診斷提供準確的病理資料。

［1］ 武巧伶.淺談HE染色方法在臨床病理診斷中的作用［J］.中外醫學研究，2013，11（29）:591.

［2］ 劉定忠.病理HE制片中易出現問題的解決方略［J］.吉林醫學，2011，32（20）:4205.

［3］ 陳宣世.HE染色兩次分化法在病理制片技術中的應用與探索［J］.重慶醫學雜志，2010，39（22）:3109.

［4］ 袁艷華.改良冰凍切片HE染色方法在神經病理診斷工作中的應用［J］.中華神經外科雜志，2009，20（3）:261.

［5］ 張曦.冰凍切片HE染色對腎臟疾病的快速診斷［J］.中國基層醫藥，2008，12（4）:506.

［6］ 王興波.HE染色褪色后免疫染色的病理觀察［J］.中國醫藥導報，2009，4（22）:124.

R446.6

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1671-8194（2015）24-0041-02