刺五加注射液對人乳腺癌細胞體外抑制的實驗研究

武均宜肖 鋒王恩軍靳 祎*

1.中南大學湘雅醫學院，湖南 長沙 410000；2.河北大學基礎醫學院，河北 保定 071000

刺五加注射液對人乳腺癌細胞體外抑制的實驗研究

武均宜1肖 鋒2王恩軍2靳 祎2*

1.中南大學湘雅醫學院，湖南 長沙 410000；2.河北大學基礎醫學院，河北 保定 071000

目的：探討刺五加注射液對人乳腺癌細胞MCF－7的體外增殖的影響。方法：采用MTT法測定了不同劑量的刺五加注射液對MCF－7細胞的體外增殖的抑制作用，并通過倒置顯微鏡觀察其細胞形態的變化。結果：刺五加注射液可以抑制MCF－7細胞的增殖，量效關系良好；形態學觀察到細胞凋亡。結論：刺五加注射液對MCF－7細胞增殖具有較強的抑制作用。

刺五加注射液；人乳腺癌細胞；MCF－7；增殖作用；抑制作用

刺五加又名五加參，為五加科植物刺五加的根和莖。現代醫學研究表明刺五加具有抗腫瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用［1－2］。據報道，刺五加及其提取物對肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多種腫瘤均有較強抑制作用，還可改善腫瘤化療患者的免疫狀況，提高機體的抗腫瘤功效［3－4］。本試驗測定不同劑量的刺五加注射液對人乳腺癌MCF－7細胞的抑制作用，為刺五加抗腫瘤作用的研究及今后的臨床應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料 刺五加注射液（批號：2007111411，黑龍江省完達山制藥廠）；順鉑（批號：04080212，齊魯制藥有限公司）；MCF－7細胞 （由河北大學生命科學學院提供）；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、RPMI 1640培養液（美國Sigma公司）；0.25%胰蛋白酶消化液（美國HyClone公司）。二甲亞砜（DMSO，上海紫一試劑廠）；胎牛血清 （中國醫學科學院生物工程研究所）。

1.2方法

1.2.1 細胞的培養 MCF－7細胞復蘇后，貼壁生長于含10%胎牛血清，青霉素和鏈霉素各100U／ml的RPMI 1640完全培養液中，并置于37℃，5%CO2的培養箱中培養。

1.2.2 刺五加注射液對細胞增殖抑制率的影響 采用MTT法，將MCF－7細胞按照5×104個／ml的密度接種到96孔培養板中，試驗分為以下幾組：刺五加注射液組 （10、20、40μl），陰性對照組加相同劑量的生理鹽水，陽性對照組加50μg／m l的順鉑，終體積為200μl／孔。培養24 h后加入5μg／μl的MTT液，繼續培養4h，棄上清液，加入DMSO后磁力震蕩15min，用酶標儀測定各孔吸光度A值，測定波長λ＝570nm，參考波長λ＝630nm，計算細胞增殖的抑制率：抑制率 （%）＝（對照組A值－實驗組A值）／對照組A值×100%

1.2.3 細胞形態學觀察 取生長狀態良好的MCF－7細胞接種于48孔細胞培養板內，培養24h，實驗組加入40μl／孔的刺五加注射液，對照組加入生理鹽水，培養24h后在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態。

1.2.4 統計學分析 數據采用The SAS system 6.12統計軟件進行分析。計量數據以均數±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示有統計學意義。

2 結果

2.1 對MCF－7細胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF－7細胞經不同劑量的刺五加注射液作用24h后，細胞增殖抑制率顯著增加，顯示較明顯的細胞毒性反應，且隨著藥物劑量的增加，抑制率逐漸增強，顯示良好的量效關系。與陰性對照組比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2細胞形態學變化刺五加注射液作用MCF－7細胞后，形態學發生了顯著變化（見圖1）。陰性對照組MCF－7細胞貼壁良好，呈不規則長梭形或多角形，排列無方向性，細胞邊緣清晰。實驗組細胞經刺五加注射液作用后，細胞多數呈圓形，胞膜起皺，培養基內懸浮著較多的細胞和碎片。

3 討論

刺五加注射液為經水醇法提取制成的滅菌制劑，含黃酮、刺五加多糖和刺五加苷等多種有效成分，已廣泛應于臨床多種疾病的治療［5］。有研究顯示，刺五加注射液對體外培養HeLa細胞、A549細胞的增殖均有較強的抑制作用，并能促進細胞凋亡［6、7］。本試驗研究表明，刺五加注射液對體外培養的人乳腺癌MCF－7細胞增殖有較強的抑制作用，10μl／孔、20μl／孔、40μl／孔的刺五加注射液作用細胞24h后，細胞抑制率分別48.18%、60.23%和84.67%，呈現良好的劑量效應關系。說明刺五加注射液對MCF－7細胞的抑制作用在此范圍內與其劑量呈正相關，即隨著藥物劑量的增加，抑制作用明顯增強。而刺五加注射液對MCF－7細胞的抑制作用及詳細機制還有待于今后深入研究。

［1］董梅，李廷利.刺五加化學成分及藥理作用研究進展 ［J］.中醫藥學報，2011，39（3）：98－100.

［2］許妍姬.刺五加對癡呆模型小鼠記憶障礙及MDA含量、SOD和乙酰膽堿脂酶活性的影響［J］.中國老年學雜志，2010，9（30）：1238－1240.

［3］豐俊東，林代華，劉希琴，等.刺五加皂苷對人肝癌細胞株血管內皮生長因子表達的抑制作用［J］.中藥新藥與臨床藥理，2007，18（5）：339－341.

［4］Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti－metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunologicalmechanism of action［J］. JEthnopharmacol，2004，93（2）：247.

［5］杜秀芳，劉偉娜，詹文紅.刺五加注射液的臨床應用進展 ［J］.現代中西醫結合雜志，2007，16（24）：3603－3604.

［6］王倩，趙剛.刺五加注射液誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡機理的研究［J］.公共衛生與預防醫學，2013，24（2）：13－17.

［7］靳祎，王恩軍，朱寶成.刺五加注射液對人肺腺癌A549細胞增殖的抑制作用［J］.軍醫進修學院學報，2009，30（5）：729－730.

R285.5

A

1007－8517（2015）11－0014－02

2015.03.26）

河北省中醫藥管理局科研計劃項目（2009061）。

武均宜（1995－），女，大學本科，醫學檢驗專業，E-mail：wujunyi1688＠163.com。

靳祎（1977－），女，副教授，從事抗腫瘤中藥及化學生物學研究。E-mail：jinyi2009＠163.com。