地蜂子化學成分的研究

陳會玲， 閆 斌， 覃 祝， 吳和珍，2，3， 楊艷芳，2，3*

（1.湖北中醫藥大學藥學院，湖北武漢430065；2.湖北省中藥資源與中藥化學重點實驗室，湖北武漢430061；3.老年病中藥新產品湖北省協同創新中心，湖北武漢430065）

地蜂子化學成分的研究

陳會玲1， 閆 斌1， 覃 祝1， 吳和珍1，2，3， 楊艷芳1，2，3*

（1.湖北中醫藥大學藥學院，湖北武漢430065；2.湖北省中藥資源與中藥化學重點實驗室，湖北武漢430061；3.老年病中藥新產品湖北省協同創新中心，湖北武漢430065）

目的 研究地蜂子Potentilla freyniana Bornm的化學成分。方法 采用硅膠和Toyopearl柱層析法對地蜂子乙酸乙酯提取部位進行分離純化，再通過理化性質和波譜數據對所得化合物進行結構鑒定。結果 從中分離得到8個化合物，分別鑒定為phloridzosid（1）、4′-0-乙基-兒茶素（2）、3-甲基鞣花酸-4-0-β-D-木榶苷（3）、clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl ester（4）、niga-ichigoside F2（5）、兒茶素（6）、β-胡蘿卜苷（7）、β-谷甾醇（8）。結論 化合物1和2為首次從委陵菜屬植物中分離得到，化合物3、4、6為首次從該植物中分離得到。

地蜂子；化學成分；分離鑒定

地蜂子為薔薇科委陵菜屬植物三葉委陵菜Potentilla freyniana Bornm.及其變種中華三葉委陵菜Potentilla freyniana Bornm.var.sinica Migo的干燥根莖，因外形酷似蜜蜂，故有此名［1］。該植物在全國大部分地區均有分布，主產于湖北、安徽、江西、江蘇等地，資源較為豐富，民間主要用于治療痢疾、腸炎、胃痛等疾病，療效確切。現代藥理研究表明，地蜂子具有抗炎鎮痛［2］、抗病毒［3］、抗氧化［4］等功效，但其物質基礎尚不明確，人們前期從中得到少量三萜、黃酮及甾體類化合物［5-8］。為了更全面地考察地蜂子的物質基礎，本實驗對其進行了深入研究，結果從該植物乙酸乙酯部位中分離得到8個化合物1～8，包括二氫查爾酮 （1）、二氫黃酮醇 （2、6）、鞣花酸 （3）、三萜 （4、5）以及甾體 （7、8）。

1 儀器與材料

KQ3200E超聲波清洗儀 （昆山市超聲儀器有限公司）；RE2000旋轉蒸發儀 （上海亞榮生化儀

器廠）。柱層析、薄層層析硅膠 （青島海洋化工有限公司）；Toyopearl HW-40F（日本東曹株式會社）；D101大孔吸附樹脂 （天津歐瑞生物科技有限公司）；Agilent1200 HPLC色譜儀（美國Agilent公司）；核磁共振儀 （美國Varian公司）。所用試劑均為分析純或化學純。

地蜂子藥材采自湖北省恩施市，經湖北中醫藥大學藥學院生藥學教研室吳和珍教授鑒定為薔薇科委陵菜屬植物地蜂子Potentilla freyniana的干燥根莖，樣本保存于湖北中醫藥大學湖北省中藥資源與中藥化學重點實驗室。

2 提取分離

取地蜂子5 kg，粉碎后用10倍量80%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮至無醇味，依次以乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液減壓回收溶劑，得到相應部分浸膏。其中，乙酸乙酯部分浸膏 （1 600 g）用60～70℃蒸餾水溶解，抽濾，得濾液部分 （A部分）和未濾過部分 （B部分）。A部分上D101大孔吸附樹脂柱，依次以蒸餾水、20%、40%、60%、95%乙醇洗脫，TLC檢識合并相似流份，濃縮，得到A1～A5五個部分。A3部分經硅膠、MCI、Diaion HP-20柱色譜反復分離純化，得到化合物1（11 mg）、2（12 mg）、6（16 mg）；A4部分經反復硅膠、Toyopearl凝膠柱色譜分離純化，得到化合物3（30 mg）、4（15 mg）；A5部分經反復硅膠柱色譜分離提純，得到化合物7（20 mg）、8（1 g）。B部分經反復硅膠、Toyopearl凝膠柱色譜分離純化后，再采用HPLC法制備，得到化合物5（6.2 mg）。

3 結構鑒定

化合物 1：黃色粉末 （甲醇）。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.12（1H，d，J=8.8 Hz，H-2），6.60（1H，d，J=8.8 Hz，H-3），6.58（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），7.12（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），2.76（2H，t，J=7.2 Hz，H-β），6.24（1H，d，J=2.3 Hz，H-3′），5.87（1H，d，J=2.3 Hz，H-5′），5.12（1H，d，J= 6.8 Hz，H-1″），3.92（1H，dd，J=12.0，1.6 Hz，Ha-6″）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：133.6（C-1），130.4（C-2），116.1（C-3），156.4（C-4），116.1（C-5），130.4（C-6），47.0（C-α），30.9（C-β），206.6（C=O），106.5（C-1′），167.0（C-2′），94.8（C-3′），166.3（C-4′），99.3（C-5′），161.7（C-6′），102.0（C-1″），74.7（C-2″），78.4（C-3″），71.1（C-4″），78.5（C-5″），62.4（C-6″）。上述波譜數據與文獻［9-10］報道基本一致，因此鑒定此化合物為phloridzosid。

化合物2：紅褐色粉末 （甲醇），1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：6.76（1H，s，H-2′），6.83（1H，d，J=1.8 Hz，H-5′），1.27（3H，t，J=4.1 Hz，H-2″），2.51（1H，dd，J=8.2，15.7 Hz，H-4），2.84（1H，dd，J=5.8，16.4 Hz，H-4），3.97（1H，m，H-3），4.12（2H，q，J=9.2 Hz，H-1′），4.61（1H，d，J=7.0 Hz，H-2），5.79（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），5.88（1H，d，J=1.6 Hz，H-8）。13C-NMR（CD3OD，146 MHz）δ：82.7（C-2），68.8（C-3），28.4（C-4），156.8（C-5），96.3（C-6），95.5（C-8），100.8（C-4α），157.5（C-8α），131.8（C-1′），114.8（C-2′），145.6（C-3′），145.6（C-4′），115.7（C-5′），121.8（C-6′），65.0（C-1″），15.3（C-2″）。以上碳譜數據文獻 ［11］報道基本一致，但該化合物多出兩個碳原子，同時分析氫譜中4.05（2H，q，J=9.3 Hz，H-1′），1.27（3H，t，J=4.1 Hz，H-2″），可知該基團為乙基，通過綜合分析得知該化合物為4′-0-乙基-兒茶素。

化合物3：淡黃色粉末（甲醇），FeCl3、Molish反應均呈陽性。1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：7.58（1H，s，H-5），7.64（1 H，s，H-5），4.06（1H，s，H-3），4.99（1H，d，J=7.2 Hz，H of Sugar-C1）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：114.2（C-1），143.1（C-2），141.3（C-3），154.0（C-4），112.3（C-5），112.0（C-6），159.4（C-7），114.2（C-1′），141.9（C-2′），137.2（C-3′），146.8（C-4′），108.3（C-5′），112.4（C-6′），159.4（C-7′），61.5（C-3-OMe），103.1（C-1″），72.8（C-2″），75.4（C-3″），70.5（C-4″），65.4（C-5″）。上述波譜數據與文獻 ［12］報道基本一致，因此鑒定該化合物為3-甲基鞣花酸-4-0-β-D-木榶苷。

化合物4：白色無定型粉末（甲醇）。1H-NMR（CD3OD，584 MHz）δ：1.23（1H，m，H-1α），1.36（1 H，m，H-1β），1.61（1 H，m，H-2α），2.61（1H，m，H-2β），3.99（1H，m，H-3），1.61（1H，m，H-5），1.48（2H，m，H-6），1.38（1H，m，H-7α），1.58（1H，m，H-7β），1.84（1H，m，H-9），1.30（1 H，m，H-11α），2.05

（1H，m，H-11β），5.33（1H，br t，H-12），0.99（1H，m，H-15α），1.84（1H，m，H-15β），1.19（1H，m，H-16α），1.72（1H，m，H-16β），2.51（1H，s，H-18），1.36（1H，m，H-20），1.54（1H，m，H-21），1.84（1H，m，H-22），1.60（1H，m，H-22α），1.76（1H，m，H-22β），3.68（1H，d，J=11.1 Hz，H-23α），3.80（1 H，d，J=11.1 Hz，H-23β），3.66（1H，d，J=4.1 Hz，H-24α），3.78（1H，d，J=4.1 Hz，H-24β），0.92（3H，s，H-25），0.77（3H，s，H-26），1.35（3H，s，H-27），1.19（3H，s，H-29），0.93（3H，d，J=6.4 Hz，H-30），5.32（1H，d，J=8.2 Hz，H-1），3.34（1 H，dd，J=9.3，8.7 Hz，H-2），3.36（1H，m，H-3），3.37（1H，m，H-4），3.40（1 H，dd，J=4.5，2.4 Hz，H-5），3.68（1H，dd，J=11.1，4.5 Hz，H-6α），3.80（1H，dd，J=11.1，2.4 Hz，H-6β）。13C-NMR（CD3OD，146 MHz）δ：33.8（C-1），26.4（C-2），70.2（C-3），46.5（C-4），43.9（C-5），21.2（C-6），34.3（C-7），42.5（C-8），49.2（C-9），37.9（C-10），25.1（C-11），128.8（C-12），138.0（C-13），43.4（C-14），28.8（C-15），26.9（C-16），50.6（C-17），54.9（C-18），74.2（C-19），42.4（C-20），25.9（C-21），37.6（C-22），71.2（C-23），63.2（C-24），15.9（C-25），18.2（C-26），25.5（C-27），179.2（C-28），26.7（C-29），16.6（C-30），95.8（C-1′），73.8（C-2′），78.6（C-3′），72.1（C-4′），77.9（C-5′），63.2（C-6′）。上述波譜數據與文獻［13］報道基本一致，因此鑒定該化合物為Clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl-ester。

化合物5：白色無定形粉末 （氯仿-甲醇）。1HNMR（CD3OD，584MHz）δ：6.30（1H，d，J= 8.0 Hz，H-1′），5.35（1 H，br s，H-12），3.95（1H，m，H-2），3.85（1H，br s，H-3），3.30-3.44（6H，overlapped，H-2′，3′，4′，5′，6′a，6′b），3.83（1H，d，J=10.4 Hz，H-23a），3.72（1H，d，J=10.4 Hz，H-23 b），1.59（3H，s，H-27），1.27（3H，s，H-29），1.18（3H，s，H-24），1.14（3H，s，H-25），1.12（3H，d，J= 6.8 Hz，H-30），0.85（3H，s，H-26）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：48.9（C-1），70.6（C-2），78.3（C-3），43.4（C-4），48.7（C-5），18.2（C-6），32.7（C-7），41.1（C-8），48.2（C-9），38.3（C-10），24.3（C-11），128.6（C-12），138.2（C-13），42.0（C-14），28.0（C-15），27.3（C-16），48.8（C-17），55.0（C-18），73.6（C-19），42.6（C-20），25.9（C-21），38.7（C-22），72.0（C-23），16.9（C-24），18.2（C-25），18.3（C-26），25.3（C-27），177.9（C-28），27.3（C-29），17.1（C-30），96.4（C-1′），74.0（C-2′），78.9（C-3′），70.3（C-4′），77.9（C-5′），64.1（C-6′）。上述波譜數據與文獻［14］報道基本一致，因此鑒定該化合物為nigaichigoside F2。

化合物6：黃色粉末 （甲醇），FeCl3反應呈陽性。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：5.90（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），5.89（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.79（1H，d，J=1.9 Hz，H-2′），6.80（1H，d，J=7.2 Hz，H-5′），6.69（1H，dd，J= 7.2，1.9 Hz，H-6′），2.87（1 H，dd，J=5.2，16.0 Hz，H-4），2.53（1H，dd，J=8.0，16.0 Hz，H-4），4.56（1H，d，J=7.2 Hz，H-2），3.99（1H，m，H-3）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：82.7（C-2），68.9（C-3），28.6（C-4），100.8（C-4α），156.9（C-5），95.4（C-6′），157.8（C-7），96.2（C-8），157.5（C-8α），131.9（C-1′），114.8（C-2′），146.0（C-3′），145.7（C-4′），115.2（C-5′），121.4（C-6′）。上述波譜數據與文獻 ［11，15］報道基本一致，因此鑒定該化合物為兒茶素。

化合物7：白色粉末（甲醇），Liebermann-Burchard、Molish反應均呈陽性。與β-胡蘿卜苷對照品展開，發現兩者TLC行為一致，因此鑒定該化合物為β-胡蘿卜苷［16］。

化合物8：白色針晶（氯仿），Liebermann-Burchard反應呈陽性［16］。與β-谷甾醇對照品在同一塊硅膠G薄層板上展開，5%硫酸乙醇顯色，105℃下烘烤3 min，在與對照品相應的地方顯示出相同顏色的色譜斑點，因此鑒定該化合物為β-谷甾醇。

4 結論

前期研究中，從地蜂子中分離得到的化合物包括黃酮、三萜及甾體類化合物。本實驗從中分離鑒定出8個化合物 （1～8），其中化合物1和2均為首次從委陵菜屬植物中分離得到的黃酮類化合物，化合物3～6為首次從該植物中分離得到的化合物。地蜂子資源豐富，其化學成分和藥理作用有待進一

步發掘，發展前景廣闊。

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Chem ical constituents from Potentilla freyniana

CHEN Hui-ling1， YAN Bin1， QIN Zhu1， WU He-zhen1，2，3， YANG Yan-fang1，2，3*

（1.College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 43OO65，China；2.Hubei Provincial Key Laboratory of Resource Scidence and Chemistry in Chinese Medicine，Wuhan 43OO61，China；3.Collaborative Innovation Center of Traditional ChineseMedicineof New Products for Geriatrics Hubei Province，Wuhan 43OO65，China）

AIM To study the chemical constituents from Potentilla freyniana.METHODS The compounds were isolated from the ethyl acetate extract of P.freyniana by silica and Toyopearl gel column chromatography. Their structures were then elucidated by physicochemical properties and spectroscopic data.RESULTS Eight compoundswere isolated and identified as phloridzosid（1），4′-0-ethyl-catechin（2），3-methyle ellagic acid-4-0-β-D-xylopyranoside（3），clethric acid-28-0-β-D-glucopyranosyl ester（4），niga-ichigoside F2（5），catechins（6），daucostarine（7），β-sitosterol（8）.CONCLUSION Compounds 1 and 2 are firstly obtained from genus Potentilla.Compounds 3，4 and 6 are isolated from this plant for the first time.

Potentilla freyniana；chemical constituents；isolation and identification

R284.1

A

1001-1528（2015）12-2674-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.022

2014-12-23

湖北省衛生和計劃生育委員會科學研究項目 （2012Z-B21）

陳會玲 （1988—），女，碩士，從事中藥品種、質量及資源開發研究。E-mail：936796383@qq.com

*通信作者：楊艷芳（1971—），女，博士，副研究員，從事中藥及其制劑有效成分的研究。E-mail：yyf0204@aliyun.com