T細胞斑點試驗技術在結核性胸膜炎診斷中的臨床價值

T細胞斑點試驗技術在結核性胸膜炎診斷中的臨床價值

闞 威

目的分析T細胞斑點試驗技術診斷結核性胸膜炎的臨床價值。方法選擇初診結核性胸膜炎患者、惡性胸腔積液患者、非結核性胸膜炎患者以及同期健康體檢者，經T細胞斑點試驗技術檢測各組受試者外周血單個核細胞中對結核分枝桿菌早期分泌靶向抗原6和培養液蛋白10致敏的T細胞。結果結核性胸膜炎組T細胞斑點試驗技術檢測陽性率較其他各組均有所升高（P＜0．05）；T細胞斑點試驗技術對結核性胸膜炎診斷的敏感性、特異性以及準確性均較腺苷脫氨酶高（P＜0．05）。結論T細胞斑點試驗技術在結核性胸膜炎輔助診斷中具有臨床價值。

T細胞斑點試驗技術；結核性胸膜炎；診斷

本次研究出于分析T細胞斑點試驗技術診斷結核性胸膜炎價值的目的，選取我院收治的初診結核性胸膜炎、惡性胸腔積液、非結核性胸膜炎以及同期健康體檢者，經T細胞斑點試驗技術檢測上述各組受試者的外周血單個核細胞中對結核分枝桿菌早期分泌靶向抗原6和培養液蛋白10致敏的T細胞，匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究中資料來源于2012年5月～2015年7月收治的初診結核性胸膜炎患者32例、惡性胸腔積液患者27例、非結核性胸膜炎患者30例以及同期健康體檢者45例，各組基本資料比較無較大差異（P＞0.05），可比較。

1.2 方法

采集各組受試者外周血標本4 ml，將其置于抗凝試管中，試管中應置入適量肝素鋰，并及時進行混合，混合后及時進行PBMC分離，且應提前將RPMI1640液置于離心管內，RPMI1640液應控制在4 ml，然后將處理后的抗凝全血置于離心管中，并進行混合處理，同時將3 ml淋巴細胞分離液置于另外一個離心管內，然后將混勻的8 ml細胞懸液置于淋巴細胞分離液上方，進行離心運動，離心時間應控制在20 min左右，離心后采用加樣器進行處理，吸取白細胞層并置于15 ml的離心管當中，而后加入11 ml的RPMI1640，離心7 min，分離出上清液。然后置入1 m AIMV，混勻細胞，并逐漸增加至10 ml，混勻。吸取適量細胞計數，通常應控制為10 ul，然后根據細胞計數計算AIMV量。選取合適的離心管沉淀細胞，去除上清液，并置于預算好的AIMV量，制成細胞工作液。取出板條，并對各個標本進行處理，每個標本制四個孔，并將AIMV、抗原和陽性對照置于孔內，而后均加入細胞工作液100 ul，在二氧化碳培養箱中培養16～20 h，培育完成后取出板條，將液體棄去，每孔經PBS反復清洗4次，而后繼續加入50 ul的間隙磷酸酶標記的小鼠抗人INF-γ單克隆抗體，在4～8℃條件下溫育1 h，溫育后取出，清除液體，并利用PBS對各孔進行清洗，通常每孔應清洗四遍，清洗后置入50 ul顯色底物，并將其置于溫室內庇蔭處溫育，溫育時間為7 min，溫育后利用清水沖洗，晾干，2～3 h后查看結果。

1.3 結果判斷標準

所有操作均嚴格按照試劑盒使用說明書進行，若是因對照孔斑點形成細胞不足6，（檢測孔斑點形成細胞-陰性對照孔形成細胞）×4不低于24，則可視為檢測結果陽性；若是陰性對照孔斑點形成細胞不低于6，檢測孔斑點形成細胞為陰性對照孔的2倍，則視為檢測結果陽性。

1.4 數據處理

2 結果

2.1 各組檢測陽性率比較

健康對照組無陽性，結核性胸膜炎組陽性29例，陽性率90.63%，惡性胸腔積液組陽性2例，陽性率7.41%，非結核性胸膜炎組陽性2例，陽性率6.67%。結核性胸膜炎組陽性率較其他各組均有所升高，具有統計學意義（P ＜ 0.05）。。

2.2 T細胞斑點試驗對結核性胸膜炎診斷中的性能

經統計發現，經T細胞斑點試驗對結核性胸膜炎診斷的敏感性為87.50%，特異性為93.7%，準確率為87.50%。腺苷脫氨酶法對結核性胸膜炎診斷的敏感性為68.75%，特異性為84.38%，準確性為71.88%。前者高于后者（P＜0.05）。

3 討論

結核性胸膜炎是引起胸腔積液的主要因素之一，研究顯示我國結核性胸膜炎患者所占比例在49.5%～54.5%［1］，因這一類疾病缺乏臨床特異性表現，經細胞學方法進行檢測的陽性率相對較低，胸膜活檢的創傷性使其應用具有較大的限制性，分子生物學雖屬于快速診斷技術的一種，然而其仍存在較大問題，比如假陽性較高等，因此對一種敏感、特異的實驗室診斷技術進行尋找為當務之急［2］。

T細胞斑點試驗時經酶聯免疫斑點技術發展而來，本次研究中采取結核分枝桿菌特異性T淋巴細胞的應答反應來對結核分枝桿菌感染狀態進行判斷，在結核性胸膜炎診斷中進行應用［3］。通過試驗發現，結核性胸膜炎組T細胞斑點試驗技術檢測陽性率較其他各組均升高；T細胞斑點試驗技術對結核性胸膜炎診斷的敏感性、特異性以及準確性均較腺苷脫氨酶、結核抗體檢測方法高。這一結果與相關文獻報道結果相似，由此證實，T細胞斑點試驗技術在結核性胸膜炎輔助診斷中具有較大的臨床價值，意義重大，值得關注。

［1］馬瑞新．結核性胸膜炎105例臨床分析［J］．中國繼續醫學教育，2015，7（12）：69-70．

［2］王永生，徐小雅，楊華，等．T-SPOT．TB試劑盒在結核性胸膜炎臨床診斷中的應用價值［J］．四川醫學，2011，32（12）：1854-1856．

［3］劉琛琛，高興林，羅澤如．慢性阻塞性肺疾病患者誘導痰T細胞巨噬細胞移動抑制因子的表達及其意義［J］．實用醫學雜志，2014，30（8）：1238-1241．

The Clinical Value of T Cell Spot Test Technology in the Diagnosis of Tuberculous Pleurisy

KAN Wei Baicheng Hospital of Traditional Chinese Medicine in Jilin，Baicheng 137000，China

ObjectiveTo analyze the T cell spot test technology the clinical value of diagnosis of tuberculous pleurisy．MethodsFirst diagnosis of tuberculous pleurisy patients, patients with malignant pleural effusion and tuberculous pleurisy patients and healthy physical examination was selected to study during this period, T Spot TB test subjects in each group，test the targeting antigens 6 early secreted from mycobacterium tuberculosis and Protein 10- sensitized T cells in culture fluid in peripheral blood mononuclear cells．ResultsTuberculous pleurisy group T cells spot test technology test positive rate than other groups were significantly higher （P＜0．05）; T cells spot test technique for diagnosis of tuberculous pleurisy sensitivity， specificity and accuracy were relatively high adenosine deaminase （P＜0．05）．ConclusionT-cell spot test technique in assistant diagnosis of the tuberculous pleurisy has significant clinical value．

T cells spot test technology，Tuberculous pleurisy，The diagnosis

R521．7

B

1674-9316（2015）29-0153-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．29．113

137000 吉林省白城中醫院