尖銳濕疣患者HPV感染類型和細胞免疫功能的分析

馬曉慧

尖銳濕疣患者HPV感染類型和細胞免疫功能的分析

馬曉慧

【摘要】目的 研究尖銳濕疣（Condyloma Acuminatum，CA）患者感染的人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）基因型的狀況和分布特點，以及HPV亞型和外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的表達情況，分析尖銳濕疣患者感染人乳頭瘤病毒亞型與細胞免疫功能的關聯性，為臨床治療CA提供實驗依據。方法 根據納入標準，選擇81例明確診斷CA患者，治療前取患者皮疹皮屑通過聚合酶鏈式反應（PCR）方法檢測HPV亞型；在治療和隨訪3個月的截止點采血，應用流式細胞儀分析淋巴細胞免疫功能，并與正常人群對照組進行比較。結果單一亞型感染40例（49.38%），混合亞型感染41例（50.62%）。感染患者外周血T細胞與正常人群對照組比較，CD 4+細胞百分比降低，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 8+細胞百分比升高，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 4+/CD 8+比值低于正常人群，P＜0.05，差異具有統計學意義。結論 HPV亞型混合感染和細胞免疫功能異常是促使尖銳濕疣患者感染人乳頭瘤病毒的重要因素。

【關鍵詞】尖銳濕疣；人乳頭瘤病毒；細胞免疫

作者單位：450003鄭州，河南省人民醫院檢驗科

Analysis of HPV Infection Types and Cellular Immune Function in Patients With Condyloma

MA Xiaohui He’nan Province The People's Hospital Department of Laboratory, 450003 Zhengzhou, China

[Abstract]Objective To investigate condyloma acuminatum(common sexually transmitted disease, CA)in patients with human papilloma virus(human papillomavirus, HPV)genotype infection status and the characteristics of distribution and HPV subtypes, and peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cell expression and clinical treatment of ca provide experimental basis. Methods According to the inclusion criteria, the choice of 81 cases of diagnosed patients with Ca, before treatment take rash dander by polymerase chain reaction(PCR)method for detection of HPV subtype; in treatment and followed up for 3 months to cut-off point of blood by flow cytometry analysis of lymphocyte immune function and with the normal population control groups were compared. Results 40 cases(49.38%)were infected by single subtype and 41 cases(50.62%)were mixed subtype. Infection in patients with peripheral blood T cells and

normal control group comparison, the percentage of CD 4+cells decreased, P<0.05, had difference statistically significance, CD 8+cell percentage increased, P<0.05, had difference statistically significance, ratio of CD 4+/CD 8+decreased, P<0.05, had difference statistically significance. Conclusion HPV subtype mixed infection and immune cell function anomaly is prompted condyloma acuminatum patients Infected with human papilloma virus is an important factor.

[Key words]Condyloma, Human papillomavirus, Cellular immunity

尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染所致的，以肛門生殖器部位增生性損害為主要表現的性傳播疾病。其發病率逐漸增高，在我國居性傳播疾病第2位[1]。尖銳濕疣的發病原因與HPV基因型的感染狀況和分布特點及HPV型別、細胞免疫功能異常等有關。本研究通過檢測81例尖銳濕疣初診患者人乳頭瘤病毒 （HPV）基因型的狀況和分布特點及HPV亞型和外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的表達情況，探討尖銳濕疣患者HPV亞型感染與細胞免疫功能異常的關系，為臨床治療CA提供實驗依據。

1　資料與方法

1.1一般資料

所有81例尖銳濕疣初診患者均來自2013年1月～2014年1月我院皮膚科門診，診斷符合衛生部防疫司制定的CA標準。入選的81例CA患者為感染組，其中男48例，女33例，平均年齡（31±9.2）歲；對照組20例，均為本院健康志愿者，男12例，女8例，兩組之間在性別、年齡等方面對比，P＞0.05，差異不具有統計學意義。

1.2儀器和試劑

DA 7 600型擴增儀（廣州中山大學達安基因有限公司），流式細胞儀（FACS Canto II，美國BD公司）；HPV基因分型檢測試劑盒（廣州中山大學達安基因有限公司），T/B/NK四色淋巴細胞免疫分型檢測試劑盒（美國BD公司）。

1.3方法

1.3.1標本采集 治療前用拭子在贅生物表面稍用力刮拭少量組織液滲出或者剪切少量贅生物，取出后放入裝有2 ml細胞保存液的保存管中，沿刷柄折痕折斷，旋緊管蓋，-20℃保存待測HPV亞型。兩組均在入選后采集靜脈血2 ml，經EDTA-K 2抗凝后待檢T淋巴細胞亞群。

1.3.2CA的治療方法 使用微波或電離子將肉眼可見生殖器贅生物清除，治療過程中盡可能保護正常皮膚，減少創面，局部糜爛創面外搽復方黃柏液或我院制劑3%聚維酮碘溶液。待7～10天皮損創面愈合后減少疣體復發，外涂干擾素凝膠或3%咪喹莫特乳膏。1.3.3實驗方法 HPV亞型檢測參照試劑盒規定采用行PCR法檢測標本。共檢測19種HPV基因亞型，包括16個高危型：16、18、3l、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亞型CP 8 304型，和3個低危型：6，ll，43型。淋巴細胞（T/B/NK）免疫分型參照試劑說明書制作細胞懸液，用FACS Canto II檢測CD 3+總T細胞、CD 3+CD 4+輔助性T細胞、CD 3+CD 8+細胞毒T細胞、CD 16+56+NK細胞百分率等，計算CD 4/CD 8比值。1.4統計學方法

研究采用SPSS16.0統計軟件進行分析，組間比較采用單方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05，差異具有統計學意義。

2　結果

2.1CA的HPV基因亞型檢測

人乳頭瘤病毒（HPV）亞型感染構成中，單一亞型感染40例（49.38%），混合亞型感染41例（50.62%），其中高危亞型＋低危亞型的類型占混合感染的73.17%（30/41），其余為單純高危亞型（4/41）和單純低危亞型（7/41）的混合感染；以低危型HPV 6/11感染為主，而單一或混合感染的高危亞型除HPV 16/18外，還出現51、52、53、31、33、39和CP 8 304。

2.2感染組和正常對照組外周血T淋巴細胞（百分率）比較

對比兩組外周血T淋巴細胞（百分率）檢測均值結果，見表2。感染組與正常對照組比較，CD 4+細胞百分率降低，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 8+細胞百分率升高，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差異具有統計學意義。

2.2感染組和正常對照組外周血T淋巴細胞（百分率）比較

對比兩組外周血T淋巴細胞（百分率）檢測均值結果，正常人群對照組CD 3+（%）、CD 4+（%）、CD 8+（%）、CD 4+/CD 8+分別為（70.64±9.32）、（39.80±5.63）、（30.63±3.99）、（1.40±0.25）；HPV感染組分別為（68.10±8.02）、（32.41±4.89）、（38.61±4.18、（0.93±0.31）。感染組與正常對照組比較，CD 4+細胞百分率降低，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 8+細胞百分率升高，P＜0.05，差異具有統計學意義，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差異具有統計學意義。

3　討論

尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒（HPV）引起的一種常見性傳播疾病。該病復發率高，HPV有不同的亞型。最常引起尖銳濕疣的HPV有6、11等。HPV在人體溫暖潮濕的條件下易生存繁殖，故外生殖器和肛周是最易發生感染的部位。臨床上CA患者，特別是難治性或復發性CA的出現，常與HPV基因型的感染狀況和分布特點，以及HPV型及宿主的免疫狀態等因素有關，尖銳濕疣患者細胞免疫功能異常導致HPV發生免疫逃逸，易引起尖銳濕疣的復發[2]。本次研究發現HPV感染型別和細胞免疫功能的變化在尖銳濕疣發病因素起著重要作用。本研究對81例臨床初次確診為尖銳濕疣的患者在治療前進行HPV亞型檢測，最常見19種亞型檢測發現，HPV感染組患者混合感染的比例較高，感染類型以高危型＋低危型為主，提示混合高HPV感染是導致CA發生尤其是復發的重要因素之一。文獻表明[3]，單純或混合高危型HPV 16/18 型CA患者的復發率高于低危型HPV 6/11型患者，使病毒復制擴大和感染時間延長。此外，E 6還可以結合干擾素調控因子，降低干擾素β表達功能，使HPV病毒逃逸正常免疫反應。進一步說明HPV高危亞型參與的混合感染能夠加強HPV病毒復制的協同作用，并且有利于HPV逃脫宿主免疫應答。CA患者與正常人群對照組比較，CA患者CD 8+淋巴細胞百分比增加，CD 4+淋巴細胞百分比減少，CD 4+/CD 8+比值下降，表明機體細胞免疫功能下降（Th 2占優），抑制病毒增殖和誘發細胞毒CD 8+T細胞抗病毒的作用都降低，不能有效清除HPV。經卡介菌多糖核酸等免疫

調節劑治療尖銳濕疣，可有效提高患者的免疫功能，外周血CD 4+T淋巴細胞以及CD 4+/CD 8+比值與治療前相比升高，而CD 8+T淋巴細胞降低，P＜0.05，差異具有統計學意義。如何規范有效治療尖銳濕疣，預防和減少尖銳濕疣患者復發，是皮膚性病科包括婦科、泌尿外科醫生在日常門診中較為麻煩的問題。尖銳濕疣患者致病，特別是難治性或復發性CA的出現，常與HPV感染亞型，包括機體的細胞免疫功能密切相關。本研究需要引起我們日常門診工作足夠重視的是尖銳濕疣患者感染亞型，尤其是由高危亞型或合并高危亞型的混合感染引起時，尖銳濕疣患病及復發的機率明顯增加，而檢測尖銳濕疣患者與正常人群比較CD 8+淋巴細胞百分比增加，CD 4+淋巴細胞百分比減少，CD 4+/CD 8+比值下降，提示與患者機體的細胞免疫功能密切相關，而增強機體的細胞免疫功能，則是可能減少CA發生，規范治療減少復發的關鍵。

參考文獻

[1] 趙辨. 臨床皮膚病學[M]. 南京：江蘇科學技術出版社，2001：514-519.

[2] 肖子娥，黃捷. 尖銳濕疣患者人乳頭瘤病毒基因分型檢測[J]. 實用皮膚病學雜志，2014（2）：99-101.

[3] 李彥，張守民，李振魯. 尖銳濕疣患者人乳頭狀瘤病毒感染細胞免疫功能的相關性研究[J]. 中華醫院感染學雜志，2014（12）：2874-2876.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.26.055

【文章編號】1674-9308（2015）26-0078-03

【文獻標識碼】B

【中圖分類號】R725.5+3