丹皮酚對人舌癌Tca8113細胞增殖的影響

劉柏林

丹皮酚對人舌癌Tca8113細胞增殖的影響

劉柏林

【摘要】目的 探討丹皮酚（paeonol）對人舌癌TCA8113細胞生物學行為的影響。方法 用MTT法檢測不同濃度的丹皮酚對TCA8113細胞增殖的抑制的作用；用ELISA實驗檢測細胞血管內皮生長因子（VEGF）蛋白的表達水平。結果 MTT實驗表明丹皮酚對TCA8113 細胞的增殖有抑制作用，并隨濃度增加抑制作用增強；ELISA實驗提示丹皮酚抑制TCA8113 細胞分泌VEGF蛋白。結論 丹皮酚可以抑制TCA8113 細胞增殖，抑制VEGF蛋白的分泌。

【關鍵詞】舌癌；TCA8113；丹皮酚

舌癌是最常見的口腔惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的1%～3%[1]。雖然發病率相對低于其他惡性腫瘤，但它影響人的頰，舌，腭，下嘴唇，口腔，牙齒等，患者由于外貌被破壞，其心理影響巨大。舌癌的常規治療是手術切除，輔助化療，放射治療，但預后不良，迫切需要尋找新的能有效治療舌鱗癌的化療藥物。近期我們用丹皮酚作用于人舌癌TCA8113 細胞系，研究其在舌癌中的治療作用。

1　材料和方法

1.1實驗材料

人舌癌TCA8113 細胞系購自美國ATCC公司。TCA8113 細胞生長于含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM（100 IU/ml青霉素，100 mg/L鏈霉素）培養液中，并置于飽和濕度，37℃、5% CO2的細胞培養箱中。

1.2藥品與試劑

丹皮酚購自上海第一制藥廠（10 mg：2 ml）。 MTT購于Serva公司，DMEM培養基購自美國Gibico公司。VEGF ELISA試劑盒為德國IBL公司產品。MODE1680酶聯免疫分析儀購自Bio-RAD公司。

1.3方法

1.3.1MTT法測定去丹皮酚對TCA8113 細胞增殖的影響 TCA8113細胞接種于96孔板，其密度為2～4×104細胞/孔，常規設3個復孔，每孔細胞總量100 μL，然后常規培養24 h，后開始添加入不同濃度的丹皮酚，添加等量的DMEM培養液到空白對照組中，等量的1% DMSO添加到溶劑對照組中。溫箱中繼續培養48 h后，每孔加入MTT（10 mg/Ml）20 μl，再培養4 h后，吸棄上清液，每孔加入DMSO，震蕩器混勻，上酶標儀檢測490 nm波長處的光密度（OD）值。腫瘤細胞生長抑制率=[1-（實驗組OD值組/空白對照組OD值）]×100%。

1.3.2ELISA法測定丹皮酚對TCA8113細胞分泌VEGF的影響 將細胞接種在6孔板內，置入37℃、5% CO2、飽和濕度培養箱中培養24 h，然后添加32 mg/L，128 mg/L丹皮酚到相應孔中，空白對照添加同體積培養液體。繼續常規培養48 h，收集細胞上清，離心5 min（400 g），然后吸取上清，保存于-80℃，待上機檢測取出用。上機檢測時嚴格按照操作說明進行操作。

1.4統計學方法

采用SPAS 17.0統計軟件進行分析，各組測量所得數據用（±s）表示，組間數據比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

2.1MTT法測定丹皮酚作用48 h后對TCA8113 細胞增殖的影響

分別用4、8、16、32、64、128、256 mg/L濃度的丹皮酚作用于TCA8113細胞，48 h后，MTT法測得丹皮酚對TCA8113細胞的抑制率為（3.17±0.4）%，（7.28±1.23）%，（15.36±1.59）%，（25.16±2.68）%，（39.34±3.12）%，（51.35±2.18）%，（89.24±2.53）%，其分別與空白對照組（0%）相比，P＜0.05。

2.2ELISA法測定丹皮酚對VEGF的影響

根據MTT結果，選取空白對照組，32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組（實驗組）進行后續實驗，ELISA實驗測到VEGF表達量分別為（13.76±1.52）μg/L，（3.52±1.34）μg/L，（2.44 ±1.2）μg/L。32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組低于空白組細胞，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3　討論

丹皮酚是從中藥材牡丹根皮及徐長卿全草中提取的一種活性成分，分子式為C9H10O3，分子量為166.18。近年來，多名學者研究表明丹皮酚具有良好的抗癌活性，其對軟骨肉瘤，纖維肉瘤，卵巢癌等多種腫瘤有治療作用[2-5]。 研究發現，丹皮酚可誘導細胞凋亡，抑制腫瘤細胞生長[4]。

血管內皮生長因子是公認的促進血管生長的因子，其參與腫瘤的侵襲轉移，其高表達的患者示預后不良[5]。Lee等[3]研究表明丹皮酚可以抑制纖維肉瘤細胞VEGF的分泌，從而抑制腫瘤新生血管的生長，來抑制腫瘤生長，遷移。筆者的研究中，ELISA實驗提示空白組細胞VEGF表達量，明顯高于32 mg/L和128 mg/L丹皮酚組細胞，表明丹皮酚能夠抑制TCA8113細胞分泌VEGF。VEGF促進腫瘤新生血管形成，當VEGF分泌下降時，腫瘤新生血管形成減少，TCA8113細胞遷移，侵襲力必然降低。MTT結果提示丹皮酚對TCA8113 細胞有明顯增殖抑制作用，而且隨丹皮酚濃度升高，抑制率也相應增加，呈明顯的劑量效應關系。

綜上所述，丹皮酚能明顯抑制TCA8113細胞的增殖和腫瘤新生血管的能力，對其進一步研究，可為舌癌治療提供新的方法。

參考文獻

[1] Warnakulasuriya S. Global epidemiology of oral and oropharyngeal cancer [J]. Oral Oncol.，2009，45（4-5）：309-316.

[2] Horng CT，Shieh PC，Tan TW，et al. Paeonol suppresses chondrosarcoma metastasis through up-regulation of miR-141 by modulating PKCδ and c-Src signaling pathway[J]. Int J Mol Sci.，2014，15（7）：11760-11772.

[3] Lee HJ，Kim SA，Jeong SJ，et al. Paeonol Oxime Inhibits bFGFInduced Angiogenesis and Reduces VEGF Levels in Fibrosarcoma Cells[J]. PLoS One，2010，5（8）：e12358.

[4] Yin J，Wu N，Zeng F，et al. Paeonol induces apoptosis in human ovarian cancer cells[J]. Acta Histochem，2013，115（8）：835-839.

[5] 王阿曼，蔡欣，周濤，等. MMP-2、VEGF、CD105和Ki-67在小細胞肺癌中的表達及預后相關性研究[J]. 臨床腫瘤學雜志，2012，17（11）：988-993.

作者單位：223300淮安，江蘇護理職業學院檢驗藥學系

Effect of Paeonol on Proliferation of Human Tongue Carcinoma in Tca8113 Cell

LIU Bolin, Department of Laboratory and Pharmacy, Jiangshu Vocational College of Nursing, Huai’an 223300, China

[Abstract]Objective It is to research the effect of paeonol on the biological behavior of human tongue carcinoma in TCA8113 cells. Methods MTT was used to detect the inhibition of paeonol on the proliferation of TCA8113 cells, with different concentration. Expression level of VEGF was detected by ELISA assay. Results MTT results showed that paeonol has inhibition effects on the proliferation of TCA8113 cell. The inhibition effects are enhanced with the increase of its concentration. ELISA assay indicates that paeonol has inhibited TCA8113 cells secrete VEGF. Conclusion The proliferation of TCA8113 cells can be inhibited by paeonol, and paeonol can inhibi TCA8113 cells secrete VEGF.

[Key words]Tongue carcinoma, TCA8113, Paeonol

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.20.147

【文章編號】1674-9308（2015）20-0200-02

【文獻標識碼】B

【中圖分類號】R285