改進RP-HPLC法測定牛黃及安宮牛黃丸中的游離膽紅素以保證牛黃類藥材及安宮牛黃丸的質量與用藥安全

李承明

改進RP-HPLC法測定牛黃及安宮牛黃丸中的游離膽紅素以保證牛黃類藥材及安宮牛黃丸的質量與用藥安全

李承明

目的 探究改進RP-HPLC法測定牛黃及安宮牛黃丸中的游離膽紅素以保證牛黃類藥材及安宮牛黃丸的質量與用藥安全。方法 樣品用二氯甲烷提取, 用HPLC法測定游離膽紅素的含量。考察牛黃及安宮牛黃丸中不同分散介質如碳酸鈣和硅藻土對游離膽紅素測定的影響。色譜條件, C18色譜柱, 檢測波長分別為Kromasil 100, (5 μm, 0.46 cm×15 cm), 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動相。結果 膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內線性良好, 加樣回收率最高。結論 對于牛黃及安宮牛黃丸,采用碳酸鈣作為分散介質的測定結果優于硅藻土等介質。值得臨床推廣使用。

RP-HPLC法；安宮牛黃丸；游離膽紅素；碳酸鈣；介質

脊索動物門哺乳綱牛科動物牛干燥的膽結石, 牛黃完整者多呈卵形, 質輕, 表面金黃至黃褐色, 細膩而有光澤［1］。中醫學認為牛黃氣清香, 味微苦而后甜, 性涼。可用于解熱、解毒、定驚。內服治高熱神志昏迷、小兒驚風、抽搐等癥,外用治、口瘡癰腫、療毒癥。由于天然牛黃很珍貴, 國際上的價格要高于黃金, 現在大部分使用的是人工牛黃［2］。人工牛黃中游離膽紅素含量如果偏高則會引起神經毒性反應, 危機生命。因此, 檢測牛黃及安宮牛黃丸中游離膽紅素的含量對藥品的質量至關重要。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取安宮牛黃丸作為檢測材料, 該藥品具有清熱解毒、鎮驚開竅等功效。可用于熱病、邪入心包、高熱驚厥, 神志譫語；中風昏迷及腦炎、腦膜炎、中毒性腦病,腦出血、敗血癥見上述證候者。該藥的化學成分有牛黃、水牛角濃縮粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黃、黃連、黃芩、梔子、郁金、冰片。

1.2 方法 采用RP-HPLC法測定安宮牛黃丸。樣品用二氯甲烷提取, 用HPLC法測定游離膽紅素的含量。考察牛黃及安宮牛黃丸中不同分散介質如碳酸鈣和硅藻土對游離膽紅素測定的影響。色譜條件, C18色譜柱, 檢測波長分別為Kromasil 100, (5 μm, 0.46 cm×15 cm), 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動相。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

游離膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內線性良好, 加樣回收率在95%～100%。對于安宮牛黃丸, 采用碳酸鈣作為分散介質的測定結果優于硅藻土等介質。采用碳酸鈣替代硅藻土作為牛黃類藥材及安宮牛黃丸樣品中游離膽紅素分析的分散介質, RP-HPLC方法準確度高, 操作簡便易行。

3 討論

牛黃又叫西黃, 是脊椎動物牛科牛的膽囊結石。干燥的

牛黃呈卵圓形或橢圓形, 或其他不規則形狀, 外表淡黃褐色,或金黃色, 平滑光澤, 質輕而脆, 容易破碎, 在碎斷面可以看出它是由薄層重迭積累而形成的。性味苦、甘、涼, 入心肝經。解毒化碳定驚。具有清熱、解毒、鎮驚等功效, 適用于急性熱病的高熱、手足抽搐痙攣、昏迷不醒等癥；又可用于熱癤、疔瘡、咽喉腫痛、口瘡等癥。目前, 市場上多采用人工牛黃,而人工牛黃由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、牛磺酸、膽紅素、膽固醇、微量元素等加工制成［3］。人工牛黃中游離膽紅素若過高會引起神經毒作用。游離膽紅素是指血液中紅細胞的降解產物血紅素沒有在肝臟與葡糖醛酸結合生成葡糖醛酸膽紅素。正常情況下游離膽紅素濃度極低, 少于1%。當游離膽紅素超過一定濃度時它可以通過血腦屏障進入中樞神經細胞引起核黃疸。核黃疸在嬰幼兒則表現為嗜睡、拒奶、反應差、呻吟、尖叫, 病情進一步加重者凝視, 頭向后仰、角弓反張、抽搐、呼吸不規則, 出現病理性呼吸［4］。因此, 測定藥品中游離膽紅素的含量十分重要, 本實驗采用的RP-HPLC法簡單易行, 準確性高［5］。用HPLC法測定游離膽紅素的含量。同時考察牛黃及安宮牛黃丸中不同分散介質如碳酸鈣和硅藻土對游離膽紅素測定的影響。色譜條件為Kromasil 100-C18色譜柱(5 μm, 0.46 cm×15 cm), 以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動相, 檢測波長為450 nm。結果膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內線性良好, 加樣回收率在95%～105%。結果表明對于牛黃及安宮牛黃丸, 采用碳酸鈣作為分散介質的測定結果優于硅藻土等介質。值得臨床推廣使用。

［1］ 王春來.牛黃及其代用品概述.實用中醫藥雜志, 2010, 26(10): 732.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民兵和國藥典(一部).2010版.北京:中國醫藥科技出版社, 2010:66, 162.

［3］ 楊展瀾, 孫穎, 田文, 等.紅外光滑法研究膽紅索在溶液中的結構.光譜學于光譜分析, 2000, 20(5):635-637.

［4］ 李愛玲, 趙建英, 壽文虹.現行藥品標準中亟待規范的一些問題.中國藥業.2010(10):6.

［5］ 倪曉霓.我國藥品標準管理中存在的問題及建議.齊魯藥事, 2010, 29(7):387-388.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.05.202

2014-07-18］

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