舌鱗狀細胞癌組織Bmi1表達及意義

劉碩碩，陸宇

(泰州市第二人民醫院，江蘇泰州225599)

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舌鱗狀細胞癌組織Bmi1表達及意義

劉碩碩，陸宇

(泰州市第二人民醫院，江蘇泰州225599)

摘要：目的觀察舌鱗狀細胞癌組織B細胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點1(Bmi1)的表達情況，探討其與患者臨床病理特征的關系。方法選擇舌鱗狀細胞癌組織69份(觀察組)，同體癌旁正常組織20份(對照組)。采用免疫組化法檢測兩組Bmi1表達，并分析其與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系。結果觀察組Bmi1陽性表達56例，陽性率為81.2%；對照組Bmi1陽性表達3例，陽性率為15.0%；兩組陽性率比較，P<0.01。Bmi1陽性表達與舌鱗狀細胞癌患者的性別、年齡、分化程度無關(P均>0.05)，與浸潤深度、淋巴結轉移及術后復發轉移有關(P均<0.05)。結論舌鱗狀細胞癌組織中Bmi1蛋白表達升高，其表達變化可能參與了腫瘤的侵襲、轉移，并有助于判斷患者的預后。

關鍵詞：舌鱗狀細胞癌；侵襲；轉移；預后；B細胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點1

舌鱗狀細胞癌是發病率最高的口腔惡性腫瘤，容易早期轉移和復發，病死率較高，5年生存率只有50%左右[1]。研究發現，B細胞特異性莫洛尼白血病毒插入位點1(Bmi1)基因在多種腫瘤組織中表達異常，如食道癌[2]、肝癌[3]、乳腺癌[4]等。Bmi1在多種人類腫瘤中呈高表達，并可啟動與上皮-間充質轉化相關的干細胞樣性能，促進腫瘤侵襲及轉移[5]。目前，國內外關于Bmi1對舌鱗狀細胞癌發病及預后影響的報道較少。本研究采用免疫組化法檢測Bmi1在舌鱗狀細胞癌組織中的表達，并分析其與患者臨床病理特征的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2012年1月～2015年1月本院存檔的舌鱗狀細胞癌組織蠟塊69份(觀察組)，患者男41例，女28例；年齡39～72歲，平均63歲。均經術后病理確診，術前未行放化療且病例資料完整。取同體癌旁正常組織(距離癌組織3 cm以上,并經病理證實無癌細胞浸潤)20份(對照組)，患者中男10例，女10例；年齡42～65歲，平均58歲。本研究均獲得患者及其家屬的知情同意。

1.2Bmi1表達檢測采用免疫組化法。取兩組石蠟包埋切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化處理，蒸餾水漂洗5 min。0.01 mol/L枸櫞酸鹽(pH 6.0)抗原修復液中熱修復15 min，自然冷卻至室溫，PBS緩沖液沖洗4 min×3次；3%過氧化氫室溫下孵育15 min，PBS沖洗4 min×3次。滴加鼠抗人Bmi1單克隆抗體(1∶200)，4 ℃冰箱中過夜后，室溫放置1 h，PBS沖洗4 min×3次。擦干后滴加二抗，置37 ℃恒溫箱30 min后，PBS沖洗4 min×3次。DAB顯色5 min，自來水終止顯色，甩干后放入蘇木精染色10 min后過水顯藍色洗滌；分化液中浸泡4次，再浸水10 min至顯藍色。梯度乙醇、二甲苯脫水，中性樹膠封片。Bmi1陽性表達主要定位于細胞核，表現為細胞核內呈棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量細胞質內呈現棕黃色。使用普通光學顯微鏡，高倍鏡下(×200)隨機取4個不同視野，計數細胞總數及細胞核陽性細胞數，計算陽性細胞率[6]。陽性細胞率≤10%計1分，>10%~≤50%計2分，>50%~≤75%計3分，>75%計4分。同時根據染色強弱程度計分：陰性計1分，弱染色計2分，中等染色計3分，強染色計4分。陽性細胞率與染色強弱程度計分的乘積≤4為-，>4~≤8 為+，>8~≤12 為++，>12~≤16為+++。其中-和+均視為陰性表達，++和+++均視為陽性表達。以上結果由兩位病理科醫生在雙盲情況下獨立觀察判斷。檢測用鼠抗人Bmi1單克隆抗體購自美國abcam生物技術公司，免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3Bmi1表達與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理因素的關系記錄兩組的性別、年齡、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及術后復發轉移等臨床病理資料，分析其與Bmi1表達的關系。

1.4統計學方法采用SPSS13.0統計軟件。計數資料用率表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組Bmi1表達比較觀察組Bmi1陽性表達56例，陽性率為81.2%；對照組Bmi1陽性表達3例，陽性率為15.0%；兩組陽性率比較，P<0.01。

2.2Bmi1表達與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系Bmi1陽性表達與舌鱗狀細胞癌患者的性別、年齡、分化程度無關(P均>0.05)，而與浸潤深度、淋巴結轉移及術后復發轉移有關(P均<0.05)。見表1。

表1　Bmi1表達與舌鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系

3討論

舌鱗狀細胞癌病死率高，臨床治療失敗的原因之一就是腫瘤干細胞的存在。在頭頸部鱗狀細胞癌中，腫瘤干細胞在腫瘤的發生、演變、轉移和治療耐藥性等方面均發揮重要作用[7～10]。許多分子和細胞通路與干細胞的增殖和自我更新密切相關，如多梳基因(PcG)家族、Notch信號通路、Wnt信號通路以及轉化因子TGF-β信號通路等。PcG家族由多個與細胞周期和增殖相關的轉錄抑制因子組成，如Bmi1、Mel18、BLG等一系列保守蛋白，Bmi1基因是PcG家族的核心成員之一。人類Bmi1基因定位于10p11.23,其cDNA長3 202 bp，位于506～1 486 bp的開放閱讀框編碼一個含326個氨基酸，相對分子量為45 kD的蛋白質，該蛋白質中位于N末端的環指結構域和位于中心的DNA結合模序螺旋-轉角-螺旋-轉角結構域，對細胞轉化和腫瘤形成有重要作用。Bmi1作為干細胞的標志，在內源性干細胞和腫瘤干細胞中均發揮重要作用[11,12]；其主要功能是通過抑制P16基因表達來維持細胞干性并增強干細胞的自我更新能力，抑制衰老[13]；還可直接作用于C-MYC基因，參與腫瘤的發生[14]。

本研究結果顯示，Bmi1在舌鱗狀細胞癌組織中表達顯著升高，與其在其他腫瘤中的表達變化基本一致。Bmi1表達與舌鱗狀細胞癌患者的性別、年齡、腫瘤分化程度無關，而與腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移、術后復發轉移有關，表明Bmi1參與了舌鱗狀細胞癌的發生、發展，并可促進癌細胞的侵襲和遠處轉移。目前研究發現，Bmi1能夠抑制抑癌基因PTEN表達[15]，誘導端粒酶，激活Akt/GSK3β/Snail信號通路[3]，且協同Twist抑制E-cadherin[16]，增強腫瘤細胞的運動和侵襲能力。據此推斷，Bmi1可能正是通過以上作用促進上皮-間充質轉化，從而促進舌鱗狀細胞癌的侵襲和轉移，導致預后不良。

綜上所述，Bmi1在舌鱗狀細胞癌組織中表達明顯升高，并與腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移、術后復發情況轉移有關。Bmi1可作為評價舌鱗狀細胞癌患者病情進展程度和預后的指標，也可作為靶向治療的新靶點。由于本研究樣本量有限，且僅限于免疫組化法的檢測結果，因此本結論尚需進一步證實。目前，Bmi1參與舌鱗狀細胞癌侵襲轉移的作用機制尚未明確，仍需深入研究。

參考文獻：

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中圖分類號：R780.2

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)48-0080-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.48.030