IL-17在系統(tǒng)性硬皮病患者中的表達(dá)及與結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的相關(guān)性

劉孟莊，王 娟，阿克木江·阿西木

(1. 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830001；2解放軍第23醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000)

IL-17在系統(tǒng)性硬皮病患者中的表達(dá)及與結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的相關(guān)性

劉孟莊1，王 娟1，阿克木江·阿西木2

(1. 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830001；2解放軍第23醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000)

目的 探討白細(xì)胞介素-17(IL-17)在系統(tǒng)性硬皮病(SSc)患者中的表達(dá)水平，及其與結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的相關(guān)性。方法 選擇68例SSc患者和同期整形外科收治的30例非SSc患者，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血漿IL-17水平，采用免疫組化SABC法檢測(cè)皮膚CTGF含量。比較各組IL-17和CTGF表達(dá)水平的差異，及二者的相關(guān)性。結(jié)果 與對(duì)照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高，且活動(dòng)組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平顯著高于非活動(dòng)組(P<0.05)；彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平較局限型SSc組明顯增高(P<0.05)；SSc患者IL-17、CTGF蛋白與改良Rodman總皮膚厚度評(píng)分(MRSS)均呈線性正相關(guān)(r=0.712,0.738,P<0.05)；血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關(guān)(r=0.680,P<0.05)。結(jié)論 IL-17在SSc患者外周血中表達(dá)增高，與CTGF具有較好相關(guān)性，共同參與了SSc的發(fā)病過程，阻斷Th17細(xì)胞活化、分泌IL-17，有望為SSc的治療提供新的靶點(diǎn)。

系統(tǒng)性硬皮病；白細(xì)胞介素-17；結(jié)締組織生長(zhǎng)因子

系統(tǒng)性硬皮病(SSc)又稱硬化癥，是一種自身免疫性彌漫性結(jié)締組織疾病，發(fā)病高峰年齡是30～50歲，以手、足皮膚發(fā)硬為突出表現(xiàn)，嚴(yán)重者可出現(xiàn)全身皮膚僵硬和內(nèi)臟器官纖維化[1]。研究認(rèn)為，免疫性疾病患者組織和外周血中的Th17/Treg細(xì)胞體系處于失衡狀態(tài)，而由Th17分泌的白細(xì)胞介素-17(IL-17)對(duì)固有免疫及獲得性免疫炎癥均有促進(jìn)作用[2]。目前，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)對(duì)SSc的作用已得到證實(shí)[3]，但其與IL-17的相關(guān)性，是否共同作用于SSc的發(fā)病，國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。本研究通過聯(lián)合檢測(cè)SSc患者IL-17和CTGF的表達(dá)水平，并分析其相關(guān)性，旨在為SSc的發(fā)病機(jī)制研究提供新的思路。

1 臨床資料

1.1一般資料 選擇2009年1月—2013年12月新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院皮膚科收治的SSc患者共68例，均符合1980年美國(guó)風(fēng)濕協(xié)會(huì)制訂的SSc分類標(biāo)準(zhǔn)[4]，并經(jīng)組織病理檢查確診。其中男25例，女43例；年齡34～67(46.1±5.7)歲；病程3～105(39.4±8.6)個(gè)月；按照Valentini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：活動(dòng)組(≥3分)29例，非活動(dòng)組(<3分)39例；改良Rodnan總皮膚厚度評(píng)分(MRSS)為4.4～7.3(6.1±0.7)分；彌漫型SSc 37例，局限型SSc 31例。同時(shí)選擇我院整形外科收治的非SSc患者30例，其中男13例，女17例；年齡33～69(45.8±6.1)歲。本研究經(jīng)我院倫理學(xué)委員會(huì)審核通過，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)

1.2.1 IL-17 所有研究對(duì)象均于清晨抽取空腹靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，充分混勻，3 000 r/min離心10 min，留取上層血漿。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血漿IL-17水平，試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物工程有限公司，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 CTGF 破損標(biāo)本取自前臂伸側(cè)或脛前部皮損患處，未經(jīng)任何藥物治療。對(duì)照標(biāo)本取自整形外科手術(shù)切除的正常皮膚組織。將標(biāo)本組織通過10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片后進(jìn)行免疫組化SABC法染色。每例標(biāo)本組織均取相連的3張切片，常規(guī)脫蠟、水化、0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)作抗原熱修復(fù)。兔抗人CTGF免疫組化單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz生物技術(shù)公司，S-P免疫組化試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，均采用試劑盒已知陽(yáng)性組織作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗體作為陰性對(duì)照。

1.3 CTGF蛋白表達(dá)定量方法 采用Nikon Eclipss E600型全自動(dòng)圖像分析儀及Image-proplus圖像分析軟件進(jìn)行定量分析，每張切片選取四周及中央5個(gè)區(qū)域(10×40倍)，均取該區(qū)域陽(yáng)性反應(yīng)最多的視野。測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)面積比(陽(yáng)性面積/組織面積×100%)，即吸光度值(A)，再取平均值。

2 結(jié) 果

2.1SSc患者疾病活動(dòng)度與IL-17、CTGF表達(dá)的關(guān)系 與對(duì)照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平均顯著升高，且活動(dòng)組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平顯著高于非活動(dòng)組(P<0.05)。見表1。

表1 SSc患者疾病活動(dòng)度與IL-17、CTGF表達(dá)的關(guān)系

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與非活動(dòng)組比較，P<0.05。

2.2 不同亞型的SSc患者IL-17、CTGF表達(dá)比較 與對(duì)照組比較，彌漫型和局限型SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)，且彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平明顯高于局限型SSc組(P<0.05)。見表2。

表2 不同亞型SSc患者IL-17、CTGF表達(dá)比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與非活動(dòng)組比較，P<0.05。

2.3SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平與MRSS的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，SSc患者IL-17、CTGF蛋白與MRSS均呈線性正相關(guān)(r=0.712,0.738,P<0.05)；血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關(guān)(r=0.680,P<0.05)。

3 討 論

SSc的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚不十分清楚，臨床上缺乏有效的藥物，但免疫功能紊亂作為發(fā)病的重要原因已達(dá)成共識(shí)[5]。大量文獻(xiàn)證實(shí)CTGF作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)的下游效應(yīng)因子，具有極強(qiáng)的致纖維化作用，在多種肺、肝等器官的纖維化疾病中高表達(dá)。近年來，研究發(fā)現(xiàn)SSc組織纖維化與CD4+T細(xì)胞的活化密切相關(guān)[6]，且血漿IL-17水平和TGF-β在不同亞型的SSc患者體內(nèi)選擇性增高，但關(guān)于IL-17與CTGF之間的相互關(guān)系，以及二者在SSc發(fā)病機(jī)制中的作用尚未見相關(guān)報(bào)道。

IL-17作為新近發(fā)現(xiàn)的一種致炎細(xì)胞因子，是由不同于Th1、Th2的CD4+T細(xì)胞亞群所分泌，該亞群細(xì)胞被命名為Th17細(xì)胞[7]。本組研究顯示，與對(duì)照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組有不同程度顯著升高，且活動(dòng)組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平顯著高于非活動(dòng)組(P<0.05)，推測(cè)IL-17在SSc發(fā)病機(jī)制中起一定的作用，一方面IL-17可誘導(dǎo)其他炎癥細(xì)胞的活化、聚集，促進(jìn)炎癥反應(yīng)；另一方面IL-17還可促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增生，影響機(jī)體纖維化的形成。同時(shí)彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達(dá)水平較局限型SSc組明顯增高(P<0.05)，說明IL-17水平與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，高水平IL-17提示病情較重，預(yù)后較差。

皮膚增厚是SSc纖維化進(jìn)展的重要表現(xiàn)，MRSS是目前最常用的臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，SSc患者IL-17、CTGF蛋白與MRSS均呈線性正相關(guān)，進(jìn)一步說明IL-17與CTGF在SSc參與了SSc致病的整個(gè)過程，而并非只在炎癥反應(yīng)階段發(fā)揮作用。有學(xué)者研究認(rèn)為，在SSc疾病的后期，隨著炎癥反應(yīng)逐漸被抑制，干擾素-γ(IFN-γ)、IL-4等因子水平不斷降低，對(duì)Th17細(xì)胞的抑制作用也隨之減弱，從而促進(jìn)IL-17對(duì)成纖維細(xì)胞的活化，加速纖維化的進(jìn)展[8-9]。此外，血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關(guān)，說明存在較好的相關(guān)性和協(xié)同性，但二者在SSc發(fā)病中的相互作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，IL-17在SSc患者外周血中表達(dá)增高，與CTGF具有較好相關(guān)性，共同參與了SSc的發(fā)病過程，且可作為SSc病情嚴(yán)重程度的判斷指標(biāo)之一。阻斷Th17細(xì)胞活化、分泌IL-17有望為SSc的治療提供新的靶點(diǎn)。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.24.032

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1008-8849(2015)24-2703-02

2014-06-15