Cella vision DM96血細胞形態自動成像儀在低值血小板計數中的應用＊

賀軍濤 張彥平 何娜 張磊 耿燕

（西安交通大學第二附屬醫院，陜西 西安 710004）

血小板計數的準確性在臨床工作中有著重要意義。當血小板計數＜20×109／L 時，可引起較嚴重的出血，有自發出血傾向；當血小板＜5×109／L 時，可導致嚴重的出血［1］。SYSMEX－XE2100 血細胞分析儀可以用兩種方法計數血小板，即“電阻抗法”和“光散射法”。臨床常用的為電阻抗法，但是電阻抗法計數血小板和紅細胞在同一通道內，其結果易受干擾。光散射法利用散射光角度對血液成份進行分析，能更準確的分辨紅細胞和血小板，但是仍然無法準確識別大血小板和血小板聚集的標本。CellavisionDM96 可以提供清晰的數碼照片，形象的反映血小板形態、大小和分布。因此，采集了門診76 例血小板減少的不同標本，分別采用SYSMEX－XE2100的電阻抗法、光學法和CellavisionDM96分析儀進行檢測計數血小板，并就結果進行對比觀察。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年12月5日至7日門診患者經sysmex－xe2100血細胞分析儀檢測的76例血小板計數＜100×109／L的EDTA－K2抗凝靜脈血，76例標本中包括男性31例，女性45例，年齡2～75歲，采血后2h內完成各種檢測。采用日本希森美康公司XE－2100血細胞分析儀及其配套試劑，瑞典Cella vision DM96成像儀，日本希森美康公司sp－1000i自動化涂片染色儀及其配套試劑，質控品為希森美康公司提供的e－check。

1.2 方法 日本希森美康公司XE－2100血細胞分析儀經廠方校準后，每天用3個濃度（高、中、低）水平原裝質控品平進行室內質控，全部數據在控。其中低濃度質控品血小板計數采用封閉方式用電阻抗和光學法分別檢測，CV 值均小于5%，見表1。

對76例標本嚴格按照操作規程同時進行電阻抗法和光學法對同一標本進行血小板計數。利用sp－1000i自動涂片染色儀對標本進行涂片染色后，將涂片放入CellavisionDM96分析儀中進行檢測分析，通過對血小板的計數得出估算值。

1.3 統計學分析 利用SPSS 18.0統計學軟件對所測得的原始數據進行配對t檢驗和相關線性回歸分析。

表1 低濃度血小板室內質控結果Table 1 The quality control results of low value platelet laboratory

2 結果

2.1 對76例低值血小板標本采用3種方法計數血小板的結果進行相關分析和線性回歸分析，其中血小板計數三種方法分是為電阻抗法（58.1±1.07）×109／L，光學法（60.01±31.06）×109／L，DM96（58.1±32.7）×109／L，電阻抗法和光學法回歸方程為y＝0.9454x＋5.3522，光學法和DM96 回歸方程為y＝0.9834x－0.9591，電阻抗法和DM96回歸方程為y＝0.966x＋2.0889，見圖1。

圖1 三種方法對血小板計數結果的相關和回歸分析Figure.1 The correlation analysis and regression analysis of the three methods of platelet count

2.2 通過Cella vision DM96對76例低值血小板計數，發現一例血小板聚集，造成SYSMEX－XE2100光學法和電阻抗法計數假性減低，見圖2。

3 討論

一般情況下如需判斷患者有無出血傾向及其有無止血能力，需要做血小板檢查，其中最為常見的是做血小板計數。近期有一些學者提出血小板計數在急性顱腦損傷預后中的意義［2］，血小板計數在肝硬化脾亢中的意義［3］。當血小板低于20×109／L 時，傳統上認為必須給予患者輸注血小板［4］。所以血小板計數準確性尤為重要，關系到疾病的診斷和必要的治療。

圖2 DM96鏡檢發現大量血小板聚集Figure 2 Microscopic examination revealed a large group of platelet aggregation by Cella vision DM96

世界衛生組織（WHO）推薦的血小板計數方法，容易受到充池，血小板在計數板上的分布，計數人員的主觀判斷等誤差因素影響，重復性較差且費時，已不適用于臨床工作的需求［5，6］。血小板計數的參考方法是國際血液學標準委員會（ICSH）推薦的使用抗CD61抗體和抗CD41抗體的流式細胞術［7］。但有些人血小板表面不表達CD61，而表達CD62或CD42b，這種病人就不宜用免疫學方法檢測血小板，因免疫學方法很難在常規工作中推廣應用。

目前大多數臨床實驗室對血小板的計數優先采用全自動血細胞分析儀的電阻抗法和光學法。電阻抗法計數紅細胞和血小板常常在同一通道內進行，根據二者體積的不同，采用浮動界標技術界定血小板和紅細胞，即血細胞分析儀在進行血小板計數時只收集2～20fl的原始數據，利用擬合曲線技術通過對數曲線正態分布的擬合方法計算出0～2fl及20～70fl的極小血小板和大血小板的數量，進而給出血小板的總數量。這種方法對血小板的計數受其它因素干擾較大，而且無法識別血小板聚集的情況，造成血小板的假性減低；易將小紅細胞和紅細胞碎片等作為血小板而計數，造成血小板的假性增高。

光學法對血小板的計數是通過對血小板核酸染色激光散射法。將稀釋、化學染色或核酸染色的球形化細胞懸液注入鞘流中央使單個細胞沿著懸液和鞘流兩股液流整齊排列成單行，并以恒定流速定向通過石英毛玻璃，即形成流體力學聚焦技術。當細胞或顆粒通過檢測區被激光束照射時因其體積、染色程度、細胞內容物大小及含量、細胞核密度等本身特性，可阻擋或改變激光束方向，產生與其特征相應的不同角度的散射光，低角度散射光測定細胞大小及表面特性，高角度散射光測定細胞內部結構特征信息。這種方法可避免細胞重疊，利用高、低角度散射光提高對血小板的鑒別能力。但對于存在血小板聚集以及大血小板標本，此方法無法準確識別并計數血小板。

血常規儀器提示血小板聚集報警信息后，必須復查血樣，推片復檢，而傳統手工推片受人工和時間限制，在大量樣本面前往往沒有優勢，DM96彌補了這一缺憾，因為CellavisionDM96系統由涂片掃描裝置和和裝有配套血細胞分析軟件的計算機組成。采用與血細胞分析儀的流式細胞術完全不同的技術，是一種結合傳統顯微鏡檢查和現代神經網絡技術的新型細胞分析技術。血涂片裝載到該系統后儀器開始掃描涂片，先在10×物鏡下以城垛跟蹤方式找到血小板，再于100×物鏡下通過自動對焦進行細胞分割和提取，拍攝數碼照片。用人工神經網絡系統軟件進行分析識別血小板。尤其對大血小板和血小板聚集的標本，所提供的清晰的圖片，能夠使對該標本的血小板減少原因和分布有更加準確的分析。操作人員只需對已分類結果做屏幕檢查，客觀的完成常規形態學分析，降低了人為介入，實現良好重復性，在實踐時間上，大大節省了檢驗人員花費的時間，提高了工作效率［8－10］。我們通過DM96觀察血小板形態上表現出體積不同的增大，可能和病情或藥物治療有關。電阻抗法計數血小板（80～100）×109／L 時并有大血小板的提示時，光學法計數普遍比電阻抗法高。可能與大血小板計數擬合曲線有關，造成電阻抗法血小板計數假性減低。因收集標本有限，可以進一步加大標本量并且驗證正常血小板和高值血小板在CellavisionDM96上的臨床應用價值。

4 結論

電阻抗法和光學法對血小板計數有較好的一致性，這與其他報道一致［11］。對于血小板減少的標本尤其是SYSMEX－2100檢測提示有大血小板及血小板聚集的標本，一定要用CellavisionDM96系統進行分析。以確保結果的準確性，為臨床提供更可靠的信息。

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