肺癌組織中PAX2、PAX5的表達(dá)變化及意義

任胤龍，侯俊娜，趙玉苗，徐勤福，許愛(ài)國(guó)(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州450052)

肺癌組織中PAX2、PAX5的表達(dá)變化及意義

任胤龍，侯俊娜，趙玉苗，徐勤福，許愛(ài)國(guó)(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州450052)

摘要:目的觀察肺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子PAX2、PAX5的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化染色法檢測(cè)29例份非小細(xì)胞肺癌(NSCLC，NSCLC組)、18份小細(xì)胞肺癌(SCLC，SCLC組)、13例份肺良性增生(對(duì)照組)組織PAX2、PAX5，分析PAX2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系、PAX5表達(dá)與SCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果NSCLC組、SCLC組、對(duì)照組PAX2陽(yáng)性率分別為82.8%(24/29)、0(0/18)、7.7%(1/13)，NSCLC組分別與SCLC組、對(duì)照組比較，P均＜0.01; PAX5陽(yáng)性率分別為6.7%(2/29)、83.3%(15/18)、7.7%(1/13)，SCLC組分別與NSCLC組、對(duì)照組比較，P均＜0.01。PAX2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)無(wú)相關(guān)性; PAX5表達(dá)與SCLC有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論NSCLC組織中PAX2表達(dá)升高，SCLC組織中PAX5表達(dá)升高; PAX2可能與NSCLC的發(fā)生相關(guān)，而PAX5則與SCLC的發(fā)生、轉(zhuǎn)移存在一定聯(lián)系。

關(guān)鍵詞:肺腫瘤;肺癌;轉(zhuǎn)錄因子

惡性腫瘤早已成為威脅人類健康的重大疾病，而肺癌占有較大比例。隨著工業(yè)化進(jìn)展、空氣質(zhì)量下降及煙草的蔓延，肺癌的發(fā)病率與病死率呈逐年上升趨勢(shì)。根據(jù)細(xì)胞學(xué)特征及病理類型不同，肺癌主要分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)，由于NSCLC與SCLC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移存在本質(zhì)區(qū)別，臨床上對(duì)于NSCLC與SCLC的診斷、治療有著明顯的不同，其患者預(yù)后也存在較大差異。國(guó)外已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，PAX家族成員在許多類型腫瘤發(fā)生過(guò)程中廣泛表達(dá)，并與腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移存在一定聯(lián)系［1］。轉(zhuǎn)錄因子PAX5已被發(fā)現(xiàn)在B淋巴細(xì)胞瘤中高度表達(dá)，除此之外在成神經(jīng)細(xì)胞瘤及乳腺腫瘤中發(fā)現(xiàn)PAX5有所表達(dá)。PAX2則在一些腎臟腫瘤、膀胱癌、乳腺癌、前列腺腫瘤和輸卵管腫瘤被發(fā)現(xiàn)［2］。然而，在肺癌中關(guān)于PAX2及PAX5的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。本研究觀察了肺癌組織中PAX2、PAX5的表達(dá)變化，并探討其意義。

1　材料與方法

1.1材料收集2014年12月～2015年4月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治并經(jīng)纖維支氣管鏡下取肺支氣管活檢標(biāo)本60例份，其中NSCLC標(biāo)本29例份(NSCLC組)、SCLC標(biāo)本18例份(SCLC組)及肺良性增生13例份(對(duì)照組)。NSCLC組患者男23例，

女6例;年齡35～78歲，平均60.28歲;腺癌12例，鱗癌17例;有吸煙史19例，無(wú)吸煙史10例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3例;臨床分期Ⅰ+Ⅱ期16例，Ⅲ+Ⅳ期13例。SCLC組患者男13例，女5例;年齡48～75歲，平均62.56 歲;有吸煙史10例，無(wú)吸煙史8例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移2例;臨床分型局限型9例，彌散型9例。所有肺癌患者均為首次確診，且未接受放化療及其他抗癌治療。對(duì)照組患者男9例，女4例;年齡25～75歲，平均56歲;炎性增生12例，肺錯(cuò)構(gòu)瘤1例。

1.2組織PAX2、PAX5檢測(cè)PAX2、PAX5兔抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam生物公司，Envision試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物公司。標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度5 μm，免疫組化Envision法染色，陰性對(duì)照用PBS代替一抗，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn): PAX2陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)深黃色及棕色顆粒，PAX5陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞核著色呈現(xiàn)深黃色及棕色，在高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算200個(gè)細(xì)胞的染色情況，根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:無(wú)著色(0分)、淺黃色(1分)、棕黃色(2分)、棕褐色(3分)，染色細(xì)胞比例＜10%(0分)、10%～25%(1分)、25%～50%(2分)、＞50%(3分)，染色強(qiáng)度積分與染色細(xì)胞比例積分乘積≥3分提示陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組PAX2、PAX5表達(dá)比較NSCLC組、SCLC組、對(duì)照組PAX2陽(yáng)性率分別為82.8%(24/ 29)、0(0/18)、7.7%(1/13)，NSCLC組分別與SCLC組、對(duì)照組比較，P均＜0.01; PAX5陽(yáng)性率分別為6.7%(2/29)、83.3%(15/18)、7.7%(1/13)，SCLC組分別與NSCLC組、對(duì)照組比較，P均＜0.01。

2.2 PAX2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，PAX2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)無(wú)相關(guān)性。

2.3 PAX5表達(dá)與SCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，PAX5表達(dá)與SCLC有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。

3　討論

PAX屬轉(zhuǎn)錄因子，因其結(jié)構(gòu)中有一段高度保守的pairedbox(配對(duì)盒)基因結(jié)合區(qū)而得名。以往普遍認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生與成熟細(xì)胞去分化密切關(guān)聯(lián)，PAX基因在一些組織器官的發(fā)生發(fā)展、修復(fù)再生中發(fā)揮著復(fù)雜且重要的作用，而在正常發(fā)育成熟的細(xì)胞中基本不表達(dá)，因此PAX基因被普遍認(rèn)為與眾多腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著聯(lián)系［3］。PAX2位于人類10號(hào)染色體q25上，已被證實(shí)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼、腎臟、甲狀腺等器官的發(fā)生相關(guān)，并有國(guó)內(nèi)外學(xué)者在卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌及淋巴瘤等腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)PAX2高度表達(dá)［4～10］。Muratovska等［1］分別在卵巢癌和膀胱癌中發(fā)現(xiàn)PAX2的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)存在相關(guān)性，并證實(shí)腫瘤生長(zhǎng)與PAX2調(diào)節(jié)ADAM10相關(guān)。Monte等［5］發(fā)現(xiàn)，PAX2在三苯氧胺所致子宮內(nèi)膜腫瘤中有所表達(dá)，并與腫瘤的惡性程度相關(guān)。本研究顯示，NSCLC組PAX2表達(dá)較高，而SCLC組并未發(fā)現(xiàn)PAX2表達(dá)，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因主要考慮由于NSCLC與SCLC的發(fā)生來(lái)自于不同細(xì)胞系。因此，我們認(rèn)為PAX2可能與

NSCLC的發(fā)生有關(guān)。

表1　PAX2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2　PAX5表達(dá)與SCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

PAX5作為PAX家族的另一成員，其在1989年被Barberis等［11］確認(rèn)為一種B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)B細(xì)胞的發(fā)育、增殖和分化起著關(guān)鍵作用;不久之后人們發(fā)現(xiàn)PAX5不僅作為B細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子并且能夠調(diào)節(jié)CD19(編碼B細(xì)胞特異性的表面蛋白)的表達(dá)［12］。隨著對(duì)PAX5研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)PAX5不僅表達(dá)于B淋巴細(xì)胞，同時(shí)在一些腫瘤如成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、骨髓瘤中均有表達(dá)。Baumann等［13］在關(guān)于成神經(jīng)細(xì)胞瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，與侵襲性較低的有功能型成神經(jīng)細(xì)胞瘤相比，侵襲性較高的無(wú)功能型成神經(jīng)細(xì)胞瘤中PAX5的表達(dá)更為顯著。在關(guān)于高度侵襲性的SCLC細(xì)胞株的類似研究中，同樣有文獻(xiàn)報(bào)道PAX5高表達(dá)，而在NSCLC中未見(jiàn)報(bào)道。在關(guān)于成神經(jīng)細(xì)胞瘤的研究中，敲除PAX5結(jié)果導(dǎo)致瘤細(xì)胞的侵襲性降低這一現(xiàn)象使學(xué)者考慮PAX5不僅與瘤細(xì)胞的增殖并且可能與其轉(zhuǎn)移相關(guān)［13，14］。Stuart等［15］發(fā)現(xiàn)，在成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中PAX5基因的活化可能使p53等抑癌基因的轉(zhuǎn)錄受到抑制，細(xì)胞獲得生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，保持分裂活躍，最終促成腫瘤發(fā)生或惡性進(jìn)展。除此之外，Kanteti等［16］在關(guān)于SCLC腫瘤細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，PAX5在SCLC中呈高表達(dá)，而在NSCLC中并未見(jiàn)發(fā)現(xiàn)PAX5的表達(dá)，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。Kanteti還通過(guò)敲除肺癌小細(xì)胞中的PAX5基因，發(fā)現(xiàn)失去PAX5表達(dá)的癌細(xì)胞其生存復(fù)制能力明顯低于未敲除PAX5基因的癌細(xì)胞，并且失去表達(dá)PAX5的癌細(xì)胞中伴有c-Met的表達(dá)缺失，因而他們認(rèn)為PAX5可直接調(diào)控c-Met的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、分化、運(yùn)動(dòng)及侵襲。本研究發(fā)現(xiàn)，SCLC組PAX5陽(yáng)性率高于NSCLC組與對(duì)照組，同時(shí)發(fā)現(xiàn)PAX5陽(yáng)性表達(dá)與SCLC是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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收稿日期:( 2015-06-07)

通信作者:許愛(ài)國(guó)

基金項(xiàng)目:河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(112102310180)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)35-0080-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R734.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.35.031