血管生成擬態(tài)在子宮內膜癌組織中的表達及意義

梁軍苗蕊邢慧敏

·臨床研究與應用·

血管生成擬態(tài)在子宮內膜癌組織中的表達及意義

梁軍①苗蕊①邢慧敏②

目的：探討血管生成擬態(tài)（vasculogenic mimicry，VM）在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系。方法：收集解放軍白求恩國際和平醫(yī)院2005年1月至2014年6月術后隨訪資料完整的子宮內膜癌標本267例，采用CD31/PAS雙重染色鑒定VM結構，分為VM陽性組與VM陰性組，免疫組織化學SP法檢測CD133的表達。結果：267例子宮內膜癌患者中65例（24.3%）存在VM。VM的形成與子宮內膜癌FIGO分期（χ2=9.987，P=0.002），組織學分級（χ2=11.795，P=0.001），肌層浸潤深度（χ2=5.499，P=0.019），脈管內有無癌栓（χ2=22.599，P＜0.001）及淋巴結有無轉移（χ2=7.848，P=0.005）密切相關。Kaplan-Meier法生存分析發(fā)現(xiàn)VM陽性組生存時間（中位生存時間為51個月）明顯低于VM陰性組（中位生存時間為100個月），二者比較差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=70.973，P＜0.001）。CD133在VM陽性組的表達率為75.4%（49/65），較VM陰性組58.9%（119/202）高，二者比較差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=5.720，P=0.017）。結論：VM與子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展及惡性度密切相關，是影響患者預后的重要指標，CD133表達陽性的腫瘤干細胞可能參與子宮內膜癌VM的形成。

子宮內膜癌 血管生成擬態(tài) 免疫組織化學 預后

子宮內膜癌是女性常見生殖道惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，是威脅女性生命健康的重要殺手。血管生成擬態(tài)（vasculogenic mimicry，VM）是Maniotis等［1］研究高度惡性黑色素瘤時發(fā)現(xiàn)的一種不依賴于血管內皮細胞的腫瘤內血液供應模式。VM是除血管外供應腫瘤生長的重要結構，對腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉移具有重要作用。腫瘤干細胞（tumor stem cells，TSCs）的分子標記物CD133，參與VM的形成機制［2-4］。本文旨在探討VM在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2005年1月至2014年6月解放軍白求恩國際和平醫(yī)院267例術后病理診斷為子宮內膜癌患者的組織標本為研究對象。患者年齡為26～77歲。病理類型為子宮內膜樣腺癌（Ⅰ型）237例，其他類型（Ⅱ型）包括漿液性腺癌21例、透明細胞癌6例、未分化癌3例。組織學分級中高分化（G1）為98例，中分化（G2）為130例，低分化（G3）為39例。根據2009年國際婦產科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期184例，Ⅱ期48例，Ⅲ期24例，Ⅳ期11例。有淋巴結轉移44例，無淋巴結轉移223例。腫瘤肌層浸潤深度＜1/2為172例，腫瘤肌層浸潤深度≥1/2為95例。有脈管癌栓者41例，無脈管內癌栓者226例。本研究經患者知情同意，并獲本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學法采用SP染色，以已知陽性片為陽性對照，以PBS代替一抗為陰性對照。子宮內膜癌組織經4%福爾馬林液固定、包埋、切片。切片經脫蠟、復水，0.01 M檸檬酸緩沖液（pH=6.8）抗原修復，山羊血清封閉抗體，3%H2O2孵育10 min，加入一抗CD133（美國Abcam公司）孵育過夜，二抗山羊抗IgG抗體-HRP多聚體（北京中杉金橋生物技術有限公司）處理后DAB顯色。CD31/PAS雙重染色以CD31（美國Abcam公司）SP法染色后，在高碘酸溶液中氧化10 min，洗滌后過碘酸雪夫（PAS）試劑染色15 min，蘇木素染核，脫水后二甲苯透明，中性樹脂封片。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析。采用χ2檢驗行免疫表型之間的比較，生存分析采用Kaplan-Meier法并行Logrank檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜癌中VM及CD133的表達情況

267例子宮內膜癌中VM陽性65例（24.3%）、VM陰性202例（75.7%），見圖1。CD133陽性168例（63.0%）、陰性99例（37.0%），見圖2。

圖1 子宮內膜癌中VM表達（CD31/PAS雙重染色×400）Figure 1 Vasculogenic mimicry expression in endometrial carcinoma（CD31/PAS×400）

圖2 子宮內膜癌中CD133表達（SP×400）Figure 2 CD133 expression in endometrial carcinoma（SP×400）

2.2 子宮內膜癌臨床病理特征與VM形成的關系

VM的形成與子宮內膜癌患者年齡、組織類型無關，差異無統(tǒng)計學意義；而其形成與子宮內膜癌FIGO分期、組織學分級、肌層浸潤深度、脈管內有無癌栓及淋巴結有無轉移密切相關，差異具有統(tǒng)計學意義（表1）。

2.3 子宮內膜癌中CD133的表達與VM形成的關系

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65例VM陽性的子宮內膜癌組織中，CD133占75.4%（49/65）呈陽性表達；202例VM陰性的子宮內膜癌組織中，CD133占58.9%（119/202）呈陽性表達。CD133在子宮內膜癌VM陽性組與VM陰性組表達率不同，二者比較有顯著性差異（χ2=5.720，P=0.017），子宮內膜癌組織中VM陽性者的CD133表達率比VM陰性者高（表2）。

表1 267例子宮內膜癌患者臨床病理特征與VM形成的關系Table 1 Relationship between VM in endometrial carcinoma and clinicopathologic features of 267 cases

表2 CD133在267例子宮內膜癌VM陽性組與VM陰性組的表達情況Table 2 CD133 expression in VM positive and VM negative groups of endometrial carcinoma of 267 cases

2.4 子宮內膜癌中VM的形成與患者生存率的關系

267例子宮內膜癌患者術后隨訪中死亡116例、死亡率為43.4%（116/267），失訪35例。隨訪時間為6～118個月。按照有無VM結構對267例患者繪制Kaplan-Meier曲線，VM陽性組中位生存時間為51個月，VM陰性組中位生存時間為100個月，二組生存時間比較差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=70.973，P＜0.001），VM陽性組的生存時間比VM陰性組短（圖3）。

?圖3 子宮內膜癌VM陽性組與VM陰性組患者生存時間的比較Figure 3 Comparison of survival time between VM positive and VM negative groups of en?dometrial carcinoma patients

3 討論

子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見三大惡性腫瘤之一，多見于老年婦女，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢。VM是除血管外的另一種腫瘤血液供應模式，由經塑形的腫瘤細胞及PAS染色陽性的細胞外基質成分構成，血液在這種無內皮細胞的管腔中流動，為腫瘤生長提供營養(yǎng)。在該結構被發(fā)現(xiàn)之前，血管被認為是腫瘤生長、侵襲轉移的血液供應方式。研究表明，VM與許多惡性腫瘤如結腸癌［6］、胃腸道間質瘤［7］、卵巢癌［8］等的轉移和不良預后密切相關，是實體腫瘤除血管供血外的有效補充，為腫瘤的持續(xù)生長及轉移提供營養(yǎng)支持。

本研究采用CD31/PAS雙重染色的方法鑒定VM結構，檢測發(fā)現(xiàn)267例子宮內膜癌組織中，24.3%（65/ 267）存在VM結構。進一步分析其與臨床病理特征的關系發(fā)現(xiàn)，VM與子宮內膜癌術后病理分期、惡性度、侵襲轉移密切相關。對于術后病理分期中的期別晚、組織分化程度低、腫瘤肌層浸潤深度≥1/2、脈管內有癌栓、淋巴結發(fā)生轉移的患者，VM在子宮內膜癌組織中陽性率較高。提示VM在子宮內膜癌進展中為腫瘤提供除血管以外的血液供應與營養(yǎng)支持，在侵襲、轉移的過程中發(fā)揮至關重要的作用。通過Kaplan-Meier生存曲線分析，發(fā)現(xiàn)VM陽性組患者的生存時間比VM陰性組短，二組比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。說明VM與子宮內膜癌患者預后相關，VM不但能在血管尚未形成時為腫瘤生長提供血供，而且VM與血管共存能夠促進腫瘤生長從而影響患者預后。

CD133是目前研究較深入的腫瘤干細胞的標志物之一［9］，研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤干細胞具有自我更新［10］、無限增殖和多向分化［11］的特性。本研究采用免疫組織化學染色方法，進一步分析CD133在子宮內膜癌中的表達與VM的關系，結果發(fā)現(xiàn)CD133在VM陽性組織中的表達率高于VM陰性組織（75.4%vs.58.9%），二者比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Chiao等［12］從人膠質瘤組織中分選出CD133表達陽性的膠質瘤細胞，發(fā)現(xiàn)此類細胞具有較強的腫瘤干細胞特性（無限增值、自我更新），進一步研究發(fā)現(xiàn)CD133表達陽性的膠質瘤細胞具有分化為類血管平滑肌細胞的能力，從而得出膠質瘤干細胞具有形成VM的能力的結論。在乳腺癌的研究［13］中亦有證據表明，乳腺癌腫瘤干細胞具有橫向分化為血管內皮細胞的能力。這些均表明腫瘤干細胞與VM的形成密切相關。本研究推測，在子宮內膜癌中CD133表達陽性的癌細胞可能具有腫瘤干細胞的特性，有可能通過橫向分化等方式參與血管生成擬態(tài)及血管的生成，影響子宮內膜癌惡性程度與患者預后。

綜上所述，VM與子宮內膜癌的進展、侵襲及預后關系密切。探索腫瘤干細胞在該疾病VM形成中的機制可能會為子宮內膜癌靶向治療提供新的研究方向，提高子宮內膜癌患者生存時間。

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（2015-09-23收稿）

（2015-11-12修回）

Expression and significance of vasculogenic mimicry in endometrial carcinoma tissues

Jun LIANG1,Rui MIAO1,Huimin XING2

Correspondence to：Huimin XING;E-mail:13582026972@163.com

1Department of Obstetrics and Gynecology,Bethune International Peace Hospital of the People's Liberation Army,Shijiazhuang050082,China;2Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Child Health Hospital,Shijiazhuang 050082,China.

Objective:To investigate the expression of vasculogenic mimicry(VM)in endometrial carcinoma tissues and its relationship with the clinicopathologic features and prognosis of the disease.Methods:A total of 267 paraffin-embedded endometrial carcinoma specimens of patients with complete follow-up data were collected from the Shijiazhuang Bethune International Peace Hospital between January 2005 and June 2014.CD31-PAS dual staining was performed to identify the VM structure.Tissue samples were then divided into VM-positive and VM-negative groups.CD133 expression was detected by immunohistochemical streptavidin peroxidase method.Results:Among the 267 endometrial carcinoma patients,65 cases(24.3%)were VM positive.VM formation was closely correlated with the International Federation of Gynecology and Obstetrics Staging(χ2=9.987,P=0.002),histodifferentiation grade(χ2= 11.795,P=0.001),myometrial invasion depth(χ2=5.499,P=0.019),vascular cancer embolus(χ2=22.599,P＜0.001),and lymph node metastasis(χ2=7.848,P=0.005).Kaplan-Meier survival curve analysis showed that survival time was significantly shorter in the VM-positive group(median survival time was 51 months)than in the VM-negative group(median survival time was 100 months)(χ2=70.973,P＜0.001).Moreover,CD133 expression was significantly higher in the VM-positive group[75.4%(49/65)]than in the VM-negative group [58.9%(119/202)](χ2=5.720,P=0.017).Conclusion:VM is closely correlated with the pathogenesis,development,and malignancy of endometrial carcinoma.Furthermore,VM is one of the important indexes influencing the prognosis of this disease.Therefore,CD133-positive cells may contribute to VM formation.

endometrial carcinoma,vasculogenic mimicry,immunohistochemistry,prognosis

10.3969/j.issn.1000-8179.2015.23.050

梁軍 專業(yè)方向為卵巢癌、子宮內膜癌的靶向治療等。

①解放軍白求恩國際和平醫(yī)院婦科（石家莊市050082）；②石家莊市婦幼保健院婦產科

邢慧敏 13582026972@163.com

E-mail：13582026972@163.com