復方榛花肝寧膠囊的質量標準研究

南勁松，南紅梅，季存蕊，張 鐸，南 征*

(1.吉林省食品藥品監督管理局，長春130022;2.長春中醫藥大學，長春130117)

復方榛花肝寧膠囊系由五味子、三七、龍膽和板藍根等17味藥物組成的復方制劑，具有疏肝解郁，除黃利膽，理氣和胃等功效。五味子為復方榛花肝寧膠囊中的君藥，最主要藥理活性成分為木脂素，包括五味子素、五味子醇甲等［1-2］。現采用薄層色譜法對復方榛花肝寧膠囊中三七、龍膽進行定性鑒別，同時采用高效液相色譜法對復方中五味子中五味子醇甲進行含量測定，以建立復方榛花肝寧膠囊的質量控制標準。

1 材料

日立-635高效液相色譜儀，DL-800色譜工作站(大連依利特公司)。復方榛花肝寧膠囊(由吉林正輝煌藥業有限公司提供);五味子醇甲對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(供含量測定，批號:0857-9601);甲醇為優級純，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 提取方法的選擇 1)采用甲醇超聲處理后上D101吸附樹脂柱;2)加甲醇加熱回流后上D101吸附樹脂柱。結果:1)法測定的吸收峰面積積分值明顯低于2)法，故采用2)法。

2.2 柱洗脫條件的考察 樣品經甲醇提取后，通過D101吸附樹脂柱，以水 30 mL，20%乙醇40 mL，70%乙醇50 mL即能大量洗脫雜質，有效成分完全收集。

2.3 系統適應性試驗 色譜柱Relasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為甲醇∶水(13∶8)，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 250 nm［3］。理論塔板數應不低于3 000。

2.4 方法學考察 對照品溶液的制備:稱取10 mg五味子醇甲對照品，精密稱定后置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻后精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備:精密稱定本品內容物1.25 g置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇并稱定重量，加熱回流2 h后放冷，再稱定重量并用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過。精密吸取25 mL續濾液，蒸干后加5 mL水溶解殘渣，再通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.0 cm，填充高度10 cm)。先用30 mL水洗脫并棄去水液，再用20%乙醇洗脫后棄去20%乙醇洗脫液，最后用70%乙醇洗脫，收集50 mL 70%乙醇洗脫液并蒸干，用1 mL甲醇溶解殘渣，并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻，即得。

2.4.1 線性關系考察 精密稱取適量五味子醇甲對照品，加甲醇配制成每1 mL含0.085 mg的溶液，分別精密吸取2、4、6、8、10 μL 注入液相色譜儀，測定，以五味子醇甲進樣量(μg)為橫坐標，對應峰面積結果為縱坐標繪制標準曲線。回歸方程Y=9 832 120.6X+1 282 419.5，r=0.9 999，結果表明:五味子醇甲在0.17～0.85 μg范圍內線性關系良好。

2.4.2 精密度考察 取同一批號樣品，按供試品的制備方法制備，測定，連續5次進樣。測定結果:峰面積平均值為7 708 154，RSD為0.51%，說明精密度較好。

2.4.3 穩定性考察 取同一供試品溶液，分別在不同的時間內進行重復測定。供試品溶液在0、3、6、12、24 h的測試結果:RSD為0.35%，峰面積在0～24 h內基本穩定，說明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4.4 重現性考察 對同一批號的樣品按供試品的制備方法制備，依法進行5次獨立測定，測試結果:五味子醇甲平均含量為 0.102 2 mg/粒，RSD為1.28%。結果表明本方法的重現性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取同法測定的已知含量為0.106 3 mg/粒的復方榛花肝寧膠囊樣品為基底，加入0.085 mg/mL五味子醇甲對照品溶液3 mL(即0.255 0 mg)，依含量測定方法測定加樣回收率，結果:平均加樣回收率為98.85%，RSD=1.08%(n=5)，符合規定要求。

2.5 樣品含量測定 分別精密吸取5 μL對照品溶液、5 μL供試品溶液，注入液相色譜儀，依法測定。測定10批樣品中五味子醇甲的含量，測定計算得樣品平均含量為0.094 8 mg/粒。

2.6 五味子藥材含量測定 按《中華人民共和國藥典》［3］(一部)五味子藥材含量測定方法，對生產廠家提供的3批五味子藥材進行了五味子醇甲的含量測定。測得五味子醇甲的含量均大于0.40%，結果表明藥材符合藥典規定。

2.7 限度的確定 經過對投料的五味子藥材的測定，其五味子含量為0.42%～0.50%，由于在本制劑中五味子為粉末直接入藥，故收率可達90%以上，證明本法是可行的，以樣品最低含量0.08 mg/粒的5%計算，本品含量限度暫定為:含五味子按五味子醇甲(C24H32O7)計，應不得少于0.07 mg/粒。

3 結論

本實驗結果表明，所建立的方法具有良好分離度、精密度、重現性，且回收率在規定范圍內;五味子醇甲進樣量在0.17～0.85μg范圍內線性關系良好;樣品在24 h內具有良好的穩定性;本品含量限度暫定為:五味子按五味子醇甲(C24H32O7)計，含量不得少于0.07 mg/粒，為控制該品質量提供了依據［4］。

［1］高雁，李廷利.五味子有效成分的藥理作用研究進展［J］.中醫藥學報，2011，39(6):104-106.

［2］史琳，王志成，馮敘橋.五味子化學成分及藥理作用的研究進展［J］.藥物評價研究，2011，34(3):208-212.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:化學工業出版社，2010.

［4］黃曉東，路倩，沈楠，等.五味子多糖對人結腸癌HT-29細胞體外增殖及侵襲能力的抑制作用［J］.吉林大學學報(醫學版)，2015，41(2):287-290.