DC和CIK免疫細胞及其在原發性肝癌治療中的應用進展

喻曉　(長江大學醫學院，湖北 荊州 434020)

孫振綱　(長江大學荊州臨床醫學院 荊州市中心醫院肝膽外科，湖北 荊州 434020)

?

DC和CIK免疫細胞及其在原發性肝癌治療中的應用進展

喻曉(長江大學醫學院，湖北 荊州 434020)

孫振綱(長江大學荊州臨床醫學院 荊州市中心醫院肝膽外科，湖北 荊州 434020)

[摘要]樹突狀細胞(DC)是目前功能最強的免疫提呈細胞，能將抗原信息提呈給淋巴細胞，刺激初始T淋巴細胞，完成T細胞免疫應答的初始階段。細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是一種新型的免疫活性細胞，CIK 增殖能力強，細胞毒作用強，具有一定的免疫特性。DC聯合CIK細胞體外共同培養后回輸體內療法已成為當前治療腫瘤的熱點。現綜述這一療法在原發性肝癌中的應用。

[關鍵詞]肝癌；樹突狀細胞；細胞因子誘導殺傷細胞

原發性肝癌(HCC)已成為世界第二大肝癌，是我國最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在我國相關死亡率僅次于肺癌[1]。手術切除和肝移植是目前對于早期肝癌最有效的手段，但因原發性肝癌發病隱匿，且肝癌具有多中心發生的特點，癌細胞容易肝內外轉移擴散，傳統的手術、化療、放療單一治療效果不佳。如何鞏固肝癌介入治療的效果，減少復發，延長生存期是目前治療的重點和難點。1985年Rosenberg首次報道成功應用人外周血淋巴細胞在體外經IL-2因子激活后回輸體內的治療方法[2]。經數十年曲折發展，體內回輸免疫細胞的生物免疫療法，是目前國內外繼手術、放療、化療之外的第四種重要的腫瘤治療方法，為預防腫瘤復發、消除患者體內殘留的腫瘤細胞、改善晚期腫瘤患者的生存質量提供了新的治療途徑。目前細胞免疫治療已研究應用有NK、LAK、CTL、TIL、DC等細胞療法[3]，現就DC聯合CIK細胞體外共同培養后回輸體內這一療法在原發性肝癌的治療進行一綜述。

1DC細胞

樹突狀細胞(DC)是由steimman1973年首次在小鼠的外周淋巴組織中發現的一群異形細胞[4]，因其形如樹突狀而得名，已證實是目前功能最強的免疫提呈細胞，來源于多能造血干細胞，能將抗原信息提呈給淋巴細胞，刺激初始T淋巴細胞，完成T細胞免疫應答的初始階段。但其受到MHC分子限制。正常體內DC細胞處于非成熟狀態，受到細胞因子刺激后，能分化成熟。成熟DC細胞的MHC分子、粘附分子表達明顯升高，抗原提呈和免疫誘發應答能力較強[5]。有研究表明，成熟DC細胞表型在CD80+、CD86+、CD83+明顯高于未成熟型DC細胞[6]。劉敏豐等[7]研究發現在加用DC疫苗治療胰腺癌患者的外周血中，CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+及NK細胞表達水平明顯上升(P<0.05)，檢測血清中IL-2、IL-12、IFN-r水平也顯著變化。

2CIK細胞

細胞因子誘導殺傷細胞(CIK)是由sclimidit-wolf提出[8]，其起源于外周血單核淋巴細胞，主要為CD3+CD56+T細胞，受多種細胞因子誘導，通過產生IFN-r、TNF-2、IL-2等細胞因子發揮抗癌作用。也有研究發現CIK細胞能夠分泌穿孔蛋白與靶細胞結合，誘導靶細胞溶解是CIK細胞殺傷作用途徑[9]。CIK細胞殺瘤活性高、增殖快、不良反應小等優點在臨床上應用較為成熟。杜清友等[10]應用肝癌系BEL-7402荷瘤小鼠試驗發現，CIK殺瘤活性高于LAK或PBMC(外周血單個核細胞)，同時在體外殺傷原代肝癌細胞研究中證實，在不同效靶比中，CIK殺傷活性優于PBMC。余文昌等[11]在肝癌術后補充動脈插管化療栓塞術后聯合細胞免疫治療研究發現，研究組總生存率明顯優于對照組(P<0.05)，是減少復發，延長患者生存期的有效方法之一。上海交通大學Ma等[12]對CIK治療原發性肝癌的隨機Ⅱ期和Ⅲ期臨床試驗薈萃分析顯示：CIK治療組原發性肝癌患者在中位生存率、生活質量方面明顯獲益，在降低HBV-DNA水平載量和AFP水平也明顯優于其他治療組(P<0.01)。

3DC-CIK

人們發現腫瘤細胞對機體免疫監視有逃逸現象，其機制尚不明確，可能與腫瘤細胞MHCⅠ類分子低下表達、腫瘤細胞抗原缺失有關系。成熟DC細胞抗原提呈能力強，能激活機體抗腫瘤免疫系統，增強T細胞的免疫功能。CIK 細胞與 DC 聯合培養可以提高 CIK的細胞殺傷力，也能彌補 DC細胞的MHC限制性的缺點。因此有學者將DC聯合CIK共同體外培養治療白血病，獲得滿意效果，之后DC細胞聯合CIK細胞免疫治療因殺傷腫瘤細胞強、較好清除殘留腫瘤細胞、增殖能力強等優勢成為新的腫瘤免疫治療方法。有研究[13]表明:DC-CIK聯合培養后CIK細胞增殖能力明顯高于單純CIK治療(P<0.05), CD3+CD8+、CD3+CD56+水平也明顯增加，在經過3d培養后，治療組CIK細胞分泌IFN-r、IL-12的水平也高于對照組。其他研究[14~16]也表明DC-CIK細胞聯合培養后，CIK細胞增殖能力、殺瘤活性、CD3+CD8+、CD3+CD56+表達水平優于單純的CIK細胞培養。Hui Li等[17]在非小細胞肺癌患者聯合應用DC-CIK免疫治療后，2年總生存率達到(94.7%±3.6%)。2012年發表的一項研究顯示[18],在137例腎細胞癌術后轉移患者中，雖然DC-CIK治療組在總生存率和IFN-α組無統計學意義，但副作用明顯少于干擾素治療組，DC-CIK治療方案的有效性、可行性和安全性在臨床上進一步得到證實。

4DC-CIK在HCC的應用

乙肝病毒(HBV)水平載量與原發性肝癌的發生率、生存期及死亡率有密切相關因素。MingShi等[19]在HBV感染患者外周血中發現CD4+、CD8+明顯減少，而細胞免疫治療能通過CIK細胞分泌 IFN-G、TNF-2、IL-2、IL-4等細胞因子，減少HBV-DNA水平載量。故在HBV感染HCC患者中檢測HBV變化可以作為免疫細胞治療效果判斷依據。HCC患者外周血DC表面HLA-DR、B7表達水平低于正常人，免疫活性能力也減低[20]。傳統的手術、介入治療對體內殘留的肝癌細胞作用有限，而機體對腫瘤免疫監控能力減弱，腫瘤細胞能逃脫形成遠處擴散，因此提高腫瘤患者的免疫能力應值得關注。Shi m等[21]在HCC患者進行DC-CIK治療2周后發現，患者外周血CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+水平明顯上升。Tao Yang等[22]報道在HCC患者應用DC-CIK細胞免疫治療后，外周血AFP由(236.55±48.38)ng/ml下降到(141.37±27.36)ng/ml，CEA也從(46.82±9.35)ng/ml下降到(22.54±4.06)ng/ml。東南大學陳寶安等[23]研究顯示，DC-CIK聯合培養能顯著提高CIK細胞對SMMC-7721肝癌細胞的殺傷力，在CD3+CD8+、CD3+CD56+表達水平上，DC-CIK也高于單純CIK細胞(P<0.05)。2011年Pei Zhou等[24]進行了一項臨床Ⅰ期研究，觀測經皮微波治療消融術(PMWA)聯合細胞免疫治療方案對肝癌患者病毒載量和外周T淋巴細胞安全性和影響，他們發現約57.14%的患者外周病毒載量下降，CD4+CD25hing調節性T細胞的百分比明顯下降，CD8+CD28-效應性T細胞在治療1月后明顯增加，但治療6個月后無顯著差距。

DC-CIK細胞聯合體外培養回輸方法，既有DC細胞高效抗原信息提呈作用，也有CIK細胞強殺傷腫瘤細胞能力，聯合傳統手術、化療、放療，能增強患者免疫功能，殺傷殘留腫瘤細胞，能明顯提高患者生存質量和生存率[25]。DC-CIK細胞免疫治療在安全性方面主要是發熱、皮疹，一般對癥處理后癥狀可緩解。應敏剛等[26]在145例晚期腫瘤患者中聯合應用DC-CIK細胞免疫治療，觀察共出現發熱35例、皮疹15例和一過性寒戰5例，未見其他嚴重不良反應。

DC-CIK細胞體外共同培養體內回輸的生物免疫療法，是繼傳統手術、放療、化療之外的另一種重要的腫瘤治療方法，特別在原發性肝癌的治療中，為消除患者體內殘留的腫瘤細胞、改善患者的生存質量、延長總生存率提供了新的治療途徑。但細胞免疫治療在治療標準和治療周期方面仍未達到統一標準[27]，仍值得進一步探索。

[參考文獻]

[1]馬學斌，馬驄.肝癌的CIK細胞免疫治療研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2010，26(6)：658~662.

[2]Rosenberg S A，Lotie M T，Leitman S，et al.Observation on the systemaic adminsstration of acctologous activated killer cells and recombinant infer leulaon-2 to perfients with matastadic cance[J].New Een Med J,1985，313(151)：1485.

[3]張毅，Michael Nishimora.腫瘤的細胞免疫治療[J].鄭州大學學報(醫學版)，2011，46(2)：165~169.

[4]Ralph M，Steinmans Z，Anvil A.Cohn identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice[J].The Journal of Experimental Medicine，1973，137：1142~1162.

[5]王惠成，馮毅，戴國華.CIK細胞免疫治療原發性肝癌的研究進展[J]. 國際消化病雜志，2011，31(4)：223~227.

[6]Zhou P, Liang P, Dong B W,et al .Phase I dimical study of combinoction therapy with microware ablation and cellular immunothraapy in hepatocelluler cartmoma[J].J Cancer Biolog &Therapy，2011，11(5)：450~456.

[7]劉敏豐，顧元龍，崔豐完.樹突狀細胞疫苗對胰腺癌患者免疫功能的影響[J].南京醫科大學學報(自然科學版)，2010，30(11)：1649~1652.

[8] Schmidt-Wolf I G，Negrin R S，Kiem H P,et al. Use of a SCID mouse /human lymphoma model to evaluate cytokine- induced killer cells with potent antitumor cell activity[J].Exp Med，1991，174(1) : 139~149.

[9] Ortaldo J R，Winkler R T，Yagita H,et al. Comparative studies of CD3+and CD3’CD56+celIs：examination of morphology，function，T cell receptor rearrangement and pore forming protein expression[J].Cellular Immunology，1991，136：486~495.

[10]杜清友，劉明旭，王方強，等.CIK細胞體內外抗肝癌細胞作用[J].中國癌癥雜志，2001，8(4):325~330.

[11]余文昌，葉韻彬，周東，等.肝癌術后補充動脈插管化療栓塞術聯合細胞免疫治療對復發率及生存率的影響[J].微創醫學，2009，4(5)：459~461.

[12]Ma Y,Xu Y C, Lei T,et al.Cytokine-induced killer (CIK) cell therapy for patients with hepatocellular carcinoma: efficacy and safety[J]. Exp Hematol Oncol,2012, 1：11.

[13]Wei X C, Zhai X H, Zhao W L, et al.Research on the biological activity and anti-tumor offect against lymphoma cells of DC-CIK cells[J].Chinese-German Journal of clinical oncology,2008，7(11):666~669.

[14]Zhang J P, Mao C G, Han Y P,et al.The clinical effects of DC-CIK cells combined with chemotherapy in the treatment of advanced NSCLL[J].Chinese-Geroman Journal of clinical oncology,2012，11(1):67~71.

[15]Wang Q J，Wang H，Pan K, et al.Comparatire study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer(CIK)cells，dendritic cells(DC-CIK)，and semi-allogentic DC-CIK[J].Chinese Journal of cancer，2012，29(7):641~648.

[16] Angena M,Sabing R,Marie L T,et al. Enhanced lytic activity of cytokine-induced killer cells against multiple myeloma cells after coculture withidiotype—pulseddendritic cells[J].Haematologica，2001，86(10)：1029~1037.

[17] Li H, Wang C L, Yu J P,et al.Pendritic cell-activated cytokine-induced killer cells enhance the anti-tumor effect of chemotherapy on non-small cell lung cancer in patients after surgery[J].Cytotherapy,2009，11(8):1076~1083.

[18]Zhan H L, Gao X, Pu X Y, et al. A randomized controlled trial of postoperative tumor lysate-pulsed dendritic cells and cytokine-induced killer cells immunotherapy in patients with localized and locally advanced renal cell carcinoma[J]. Chinese Medical Journal，2012，125(21):3771~3777.

[19] Shi M, Fu J, Shi F, et al.Viretl supperecssion correlates with dendritic cell restoration in chromic heptalitis B-patients with autologeus cytokine-induced killer cell transfusion[J].Liver international,2009，29(3)：466~473.

[20] 李明松，袁愛力.肝癌患者外周血樹突狀細胞免疫功能的研究[J].現代消化病及內鏡雜志，1997，2(4)：307~309.

[21]Shi M，Zhang B，Tang Z R,et al.Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma[J].Word journal of Gastroenteroloay,2004，10(8):1146~1151.

[22] Yang T, Xiang Y, Li Y H,et al.Clinical study of cotredt ment with DC-CIK cells for advanced solid carcinomas[J].Chinse-Germam Journal of clinical oncology，2011，10(6)：353~359.

[23]陳寶安，李曼，孫載陽，等.DC聯合CIK共培養對肝癌細胞殺傷活性的研究[J].中國實驗血液學雜志，2006，14(3)：543~546.

[24]Zhou P, Liang P, Dong B W, et al. Phase I clinical study of combination therapy with microwave ablation and cellular immunotherapy in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Biology & Therapy ,2011，11(5)：450~456.

[25]應敏剛，鄭秋仁，陳奕貴，等.CIK聯合DC細胞聯合治療145例晚期惡性實體瘤[J].福建醫科大學學報，2007，41(3)：218~221.

[26]高岱清，劉淑貞，趙鵬，等.惡性腫瘤術后DC聯合CIK治療的臨床觀察[J].中國腫瘤防治雜志，2009，16(3)：222~225.

[27]任秀寶.關于腫瘤免疫治療療效評價的思考[J].中國腫瘤生物治療雜志，2011，18(1)：7~10.

[編輯]何勇

[文獻標志碼]A

[文章編號]1673-1409(2015)06-0082-03

[中圖分類號]R735.7

[作者簡介]喻曉(1986-)，男，碩士生，主要從事肝膽外科研究工作；通信作者：孫振綱，669210966@qq.com。

[基金項目]湖北省醫學領軍人才培養工程專項經費資助(鄂衛生計生發[2013]4號文)。

[收稿日期]2015-01-04

[引著格式]喻曉,孫振綱.DC和CIK免疫細胞及其在原發性肝癌治療中的應用進展[J].長江大學學報(自科版) ,2015,12(6):82~84.