雞白痢平板凝集試驗(yàn)方法

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雞白痢平板凝集試驗(yàn)方法

印寶東

(遼寧省盤錦市動物疫病預(yù)防控制中心124010)

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的雛雞最常見的、危害性很大的傳染病，也稱雛白痢。本病主要通過消化道感染。病雞的排泄物污染了飼料、飲水和用具等均可傳播，患病母雞可通過種蛋將病菌傳給后代。公雞的睪丸也能帶菌，通過交配可把病菌傳給后代。各種年齡的雞都能感染雞白痢。雛雞在出殼后第三天就能致病，7日齡左右死亡率最高。

1實(shí)驗(yàn)原理

在有電解質(zhì)存在的條件下，細(xì)菌等顆粒性抗原和特異性抗體相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒(塊)，稱為凝集反應(yīng)。根據(jù)顆粒的大小與出現(xiàn)的快慢判定試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果。參與反應(yīng)的抗原與抗體分別稱為凝集原和凝集素。平板凝集試驗(yàn)具有由于簡易、快速、敏感、特異的特點(diǎn)，長期以來廣泛用于人畜多種傳染病的快速診斷，在家禽最常用的是雞白痢雞與敗血支原體感染的檢驗(yàn)。

2實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備及材料

雞白痢抗原是用雞白痢沙門氏桿菌培養(yǎng)物加入0.3%的甲醛溶液滅活后，制成每毫升含菌100億的懸浮液，并加入抗凝劑和色素制成，由獸醫(yī)生物制品廠提供。雞白痢標(biāo)準(zhǔn)陽性血清由獸醫(yī)生物制品廠提供。被檢血清或全血采自被檢雞群。實(shí)驗(yàn)儀器有潔凈玻璃板、微量移液器或滴管、采血針頭、不銹鋼絲環(huán)、混合棒及被檢雞若干只。

3實(shí)驗(yàn)步驟

操作程序。取一潔凈玻片，用蠟筆劃成若干方格，并編號，將抗原充分振蕩混勻，用移液器或滴管吸取雞白痢抗原，垂直滴1滴(約0．05mL)于平板各格上，在第一格抗原上滴上雞白痢標(biāo)準(zhǔn)陽性血清1滴，在第二格抗原上滴上陰性血清1滴。其余各格為樣品檢測格(每只雞一格)，用針頭刺破被檢雞的翅靜脈或雞冠，用不銹鋼絲環(huán)沾取血液一環(huán)或用移液器吸取血液0.05mL滴加在抗原滴上，用滅菌牙簽迅速將被檢雞全血與抗原混勻并散開至直徑約為2cm的薄層后，輕輕晃動玻板，觀測5min，判定結(jié)果并記錄。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。在陽性對照出現(xiàn)100%凝集和陰性對照液體均勻混濁無凝集現(xiàn)象的前提下，抗原與血液或血清混和后，于1min內(nèi)出現(xiàn)很多大塊的凝集顆粒且底液清亮者為強(qiáng)陽性反應(yīng)，記錄為“#”；1～3min內(nèi)出現(xiàn)很多大小不等的凝集顆粒且底液略有混濁者為中強(qiáng)度陽性反應(yīng)，記錄為“++～+++”；3～4min后，出現(xiàn)少量細(xì)微顆粒，底液較混濁者為弱陽性反應(yīng)，記錄為“+”；未見凝集現(xiàn)象發(fā)生或在4min以后出現(xiàn)不明顯的凝集現(xiàn)象者為陰性反應(yīng)，記錄為“-”。

4實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

雞白痢平板凝集試驗(yàn)的應(yīng)用。雞白痢是流行普遍、危害嚴(yán)重的家禽傳染病，其傳播的重要途徑之一是經(jīng)卵垂直傳播。因此，在種雞群中做好該病的控制和凈化工作是防制本病的重要手段。雞白痢平板凝集試驗(yàn)以簡便、快捷、特異、敏感等特點(diǎn)在國內(nèi)外普遍用于該病的臨床檢驗(yàn)，監(jiān)視該病的控制與凈化效果，指導(dǎo)控制與凈化措施的修訂與實(shí)施。

對一般性商品生產(chǎn)種雞群作雞白痢檢疫時應(yīng)注意以下問題，檢測樣品抽檢比例一般為1%～2%。檢測出的陽性雞只可淘汰也可不淘汰。檢測的時間間隔對后備雞群，首次檢驗(yàn)應(yīng)在40~70日齡，第二次檢測在全面開產(chǎn)后每年檢測2～3次。檢測工作一定要配合有效的防疫工作，檢測后對結(jié)果作統(tǒng)計，計算感染的陽性率并與上次檢驗(yàn)結(jié)果比較，以便評估上次檢測后相應(yīng)防疫措施的效果，以便修訂防疫計劃，直至雞群感染率下降至最低水平。

對以建立凈化雞白痢為目的的SPF雞群作檢疫時應(yīng)注意以下問題：檢測樣品的比例應(yīng)為100%。檢測出的陽性雞只應(yīng)予淘汰。檢測時間間隔應(yīng)為每月1次，或根據(jù)具體凈化計劃確定間隔時間。對陰性雞群實(shí)施特別嚴(yán)格的隔離、衛(wèi)生消毒措施和藥物防制措施。雞群完全凈化的基本標(biāo)準(zhǔn)是以最后連續(xù)三次檢測全為陰性，且雞群在該段時間未用過對相應(yīng)疾病敏感的藥物。

雞白痢抗原應(yīng)保存于8~10℃，避光、干燥處，使用過程中應(yīng)不斷搖勻。雞白痢抗原適用于檢查產(chǎn)蛋母雞及一年以上的公雞，對幼齡雞的敏感性較差。平板凝集反應(yīng)應(yīng)在20℃以上的室溫下進(jìn)行。使用藍(lán)紫色雞白痢抗原作試驗(yàn)，最好襯以白色背景以便于觀察。本試驗(yàn)還可以以被檢雞卵黃液作被檢材料，判斷標(biāo)準(zhǔn)同上。

作者簡介：孟維珊(1980-)，男，黑龍江齊齊哈爾人，碩士，從事家畜生態(tài)養(yǎng)殖方面的研究工作。