4℃下不同放置時間對標(biāo)本血凝四項檢測結(jié)果的影響

夏 天 王義平 馮佳玲 徐海濤

4℃下不同放置時間對標(biāo)本血凝四項檢測結(jié)果的影響

夏 天 王義平 馮佳玲 徐海濤

目的 觀察4℃下不同的放置時間對標(biāo)本凝血酶原時間(PT)、纖維蛋白原(FIB)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)血凝四項測定結(jié)果的影響，以評估標(biāo)本保留時間對檢驗質(zhì)量的影響。方法將 111例血凝檢測標(biāo)本按照PT正常或者異常分成A、B兩組。檢測A、B兩組標(biāo)本即刻檢測及放入4℃冰箱下1、2、3、4、5、6、7、8及24 h的血凝四項的值。將1～8 h，24 h的血凝四項檢測結(jié)果與即刻的檢測結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果 A組標(biāo)本PT、APTT與TT在多次測量的時間點(diǎn)與即刻結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。B組標(biāo)本PT在4～8 h的時間點(diǎn)相對即刻結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而FIB在A、B組各時間點(diǎn)上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論在4℃條件下，PT正常的標(biāo)本放置24 h仍有臨床參考價值，PT異常的標(biāo)本放置時間不應(yīng)超過6 h，APTT標(biāo)本放置時間不應(yīng)超過4 h，而TT檢測標(biāo)本宜在采血后1 h內(nèi)完成。

血凝四項；4℃；放置時間；檢測結(jié)果

血凝四項目前已成為常規(guī)檢測項目，廣泛用于外科手術(shù)前凝血功能的評估，溶栓治療的監(jiān)測及出血性疾病的輔助診斷等。衛(wèi)生部推薦PT標(biāo)本采血后宜在1 h內(nèi)完成，置4℃冰箱保存不應(yīng)超過4 h；APTT的標(biāo)本檢測最遲不超過2 h[1]。近年國內(nèi)外有不少研究結(jié)果表明，室溫條件下不同保存時間對血凝四項檢測結(jié)果可產(chǎn)生影響[2-5]。各家醫(yī)院對血凝四項的標(biāo)本保留時間并沒有明確的統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，我院是在4℃冰箱下存放24 h。因此，本研究探討4℃條件下不同保存時間對標(biāo)本血凝四項檢測結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2013年12月至2014年7月安慶市第一人民醫(yī)院血凝檢測標(biāo)本111份，為保證標(biāo)本采集到初次檢測的時間小于等于1 h，故所有標(biāo)本均要求條碼打印時間到檢測時間小于等于1 h。其中，住院患者41 例，門診70例；男性38例，女性73例。年齡12～82 歲，平均(43.92±17.22)歲。

1.2 儀器與試劑 Sysmex CA7000全自動血凝分析儀，購自日本Sysmex公司。原裝配套檢測試劑 (PT、APTT、TT、CaCl2、CA CLEANⅠ、CA CLEAN Ⅱ批號分別為545546、547192A、43085、539718、A4016、A4004，國際敏感度指數(shù)ISI 0.97)，配套血漿質(zhì)控品(正常水平血漿N和異常水平血漿P，批號分別為528141A、548233)。

1.3 標(biāo)本采集 使用BD采血針及藍(lán)蓋真空管抽取外周靜脈血1.8 mL，充分混勻后，以3 000 r/min離心15 min后檢測。

1.4 血凝四項指標(biāo)的檢測 試驗前做好每日質(zhì)控，確保機(jī)器狀態(tài)正常。配置足量試劑。將111份血凝檢測標(biāo)本按照PT正?；蛘弋惓７殖葾、B兩組。A組80份，用于了解PT正常的患者標(biāo)本在4℃下放置時間對血凝四項檢測結(jié)果的影響。符合試驗要求的標(biāo)本即刻離心檢測，作為采血后0 h檢測結(jié)果。以0 h的測定結(jié)果作為基準(zhǔn)，檢測放入4℃冰箱下1、2、3、4、5、6、7、8及24 h的血凝四項的值。為減少標(biāo)本開蓋時間引起的血漿揮發(fā)及室溫對檢測結(jié)果的影響，標(biāo)本在檢測前盡量減少開蓋時間，并且在標(biāo)本吸樣結(jié)束以后，立即取出加蓋并放入4℃冰箱。因血漿量有限，每份標(biāo)本采用微量法檢測2個項目，隨機(jī)40份標(biāo)本用于檢測PT與FIB，另外40份標(biāo)本用于檢測APTT與TT。B組31份，全部檢測PT與FIB，用于了解PT異常的患者標(biāo)本在4℃下放置時間對PT和FIB檢測結(jié)果的影響。

2 結(jié)果

2.1 不同組別間的特點(diǎn)(表1) 不同組別間性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 4℃下A組標(biāo)本在不同時間點(diǎn)的檢測結(jié)果 重復(fù)測量資料的方差分析顯示，除FIB外，PT、APTT與TT在多次測量的時間點(diǎn)上差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中PT在0～8 h呈現(xiàn)下降趨勢，24 h略有升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；APTT隨時間有逐漸上升的趨勢，各時間點(diǎn)的值均高于基線水平，其中7、8和24 h的時間點(diǎn)相對0 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；TT隨時間呈逐漸上升的趨勢，其中8 h、24 h的時間點(diǎn)相對0 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2和圖1。

表1 不同組別間的特點(diǎn)

表2 4℃下A組標(biāo)本在不同時間點(diǎn)的檢測結(jié)果

2.3 4℃下A、B兩組標(biāo)本的PT、FIB在不同時間點(diǎn)的結(jié)果 重復(fù)測量資料的方差分析顯示，PT正常組(A組PT)在0～8 h呈現(xiàn)下降趨勢，24小時略有升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；PT異常組(B組標(biāo)本)在10個時間點(diǎn)上呈現(xiàn)下降趨勢，每一時間點(diǎn)PT均低于0 h水平，4～8 h的時間點(diǎn)相對0小時差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而FIB在A、B兩組各時間點(diǎn)上相對0 h差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3和圖1。

表3 A組和B組標(biāo)本在4℃下的PT和FIB檢測結(jié)果比較

3 討論

PT主要是外源性凝血系統(tǒng)的篩選試驗。本科室PT正常參考范圍為9～13 s。王蓓麗等[2]認(rèn)為早期標(biāo)本凝固時間的縮短是因為標(biāo)本及試劑的揮發(fā)導(dǎo)致凝血因子及試劑濃度升高所引起，本試驗在檢測過程中盡量減少標(biāo)本揮發(fā)和室溫因素對檢測結(jié)果的影響，仍能觀察到PT檢測結(jié)果從0～8 h呈現(xiàn)下降趨勢，且在本試驗中APTT的檢測并未出現(xiàn)早期縮短的現(xiàn)象，故我們認(rèn)為PT檢測結(jié)果從0～8 h呈現(xiàn)下降趨勢，更可能是因為Ⅶ因子的活化。這與姚家勇、茅蔚等[5, 6]的觀點(diǎn)一致。而標(biāo)本及試劑的揮發(fā)不是導(dǎo)致PT標(biāo)本0～8 h縮短的主要原因。

APTT是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)較敏感和常用的篩選試驗。叢玉隆等[7]的試驗發(fā)現(xiàn)，在4℃保存血漿6、12及24小時，Ⅷ因子活性分別為即刻試驗結(jié)果的95%、45%及29%。Ⅷ因子在6小時后超過5%活性的降低，可以解釋本試驗中APTT隨時間有逐漸上升的趨勢，且7小時、8小時相對0小時差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在4℃保存24 h，Ⅷ因子的活性喪失了71%，這可能是本試驗中24 h的APTT相對0～8 h有明顯上升的原因。

FIB是4℃下最穩(wěn)定的一個凝血四項指標(biāo)。不管是在PT正?；蛘弋惓Ｇ闆r下，1～8 h、24 h的FIB值與0 h檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TT測定主要是反映凝血共同途徑中生成的凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白的時間。本試驗中，TT隨時間有上升趨勢，在8 h、24 h相對0 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

由統(tǒng)計學(xué)分析可見，PT標(biāo)本即使在4℃下放置1 h后，和0 h檢測結(jié)果相比，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義。根據(jù)第3版全國臨床檢驗操作規(guī)程，PT測定值較正常對照值延長超過3 s以上、APTT測定值較正常對照值延長超過10 s以上、TT超過正常3 s以上有臨床意義。觀察A組全部PT的檢測值，每位患者標(biāo)本1～8 h、24 h與0 h檢測結(jié)果相減，差值的絕對值最大為2.9 s，小于3 s。因此，我們認(rèn)為，PT正常的標(biāo)本在4℃條件下放置可穩(wěn)定24 h，這與Kemkes-Matthes等[4]認(rèn)為PT在室溫條件下放置可穩(wěn)定24 h一致。在B組31個PT異常的標(biāo)本中，有17份標(biāo)本的PT值在4℃下隨放置時間的增加較0 h的測定值變化超過3 s以上，所有的這些變化均出現(xiàn)在7 h之后。其中，有1份標(biāo)本的24 h測定值相對0 h的測定值延長了14.5 s，另一份標(biāo)本的24 h測定值相對0 h的測定值縮短了10 s。由此，我們認(rèn)為，PT異常的標(biāo)本較PT正常標(biāo)本，在4℃條件下放置時間有明顯縮短，不應(yīng)超過6 h。這和趙欣宇等[8]的與正常組檢測結(jié)果相比異常標(biāo)本更易受放置時間的影響這個研究結(jié)果一致。觀察A組全部APTT的檢測值，有5份標(biāo)本的APTT值在4℃下隨放置時間的增加較正常對照值延長超過10 s以上。5份標(biāo)本中，有3份標(biāo)本出現(xiàn)延長超過10 s以上的時間在24 h，有1份標(biāo)本出現(xiàn)的時間在放置的 7 h，出現(xiàn)延長超過10 s最早的標(biāo)本是在放置的4 h。結(jié)合Ⅷ因子活性在4℃保存6 h為即刻試驗結(jié)果的95%，我們認(rèn)為APTT標(biāo)本在4℃下放置時間不要超過4 h。觀察A組全部TT的檢測值，有14份標(biāo)本的TT值在4℃下隨放置時間的增加較正常對照值延長超過3 s以上。其中，出現(xiàn)延長超過3 s最早的標(biāo)本是在放置的1 h。雖然表1中TT在4℃下放置8 h才相對0 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但在實際工作中，標(biāo)本宜在采血后1 h內(nèi)完成。

綜上所述，我們認(rèn)為在4℃條件下，PT正常的標(biāo)本放置24 h仍有臨床參考價值，PT異常的標(biāo)本放置時間不應(yīng)超過6 h， APTT標(biāo)本放置時間不要超過4 h，而TT檢測標(biāo)本宜在采血后1 h內(nèi)完成。

[1] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006: 210-233.

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(2014-07-28 收稿 2014-12-01 修回)

246003 安徽省安慶市第一人民醫(yī)院檢驗科(夏天，馮佳玲，徐海濤)，血液科(王義平)

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.02.025