流式熒光技術(shù)檢測(cè)CA242對(duì)胰腺癌的臨床診斷價(jià)值

陳園園 薛苗 李銘一 張樂(lè)之

·論著·

流式熒光技術(shù)檢測(cè)CA242對(duì)胰腺癌的臨床診斷價(jià)值

陳園園 薛苗 李銘一 張樂(lè)之

目的對(duì)流式熒光技術(shù)檢測(cè)血清CA242進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)，并評(píng)估其輔助診斷胰腺癌的臨床價(jià)值。方法 收集臨床確診的胰腺癌(140例)、肺癌等其他腫瘤(69例)、消化道良性疾病(48例)及健康體檢者(159名)的血標(biāo)本，采用流式熒光發(fā)光法檢測(cè)血清CA242水平，并與常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)流式熒光技術(shù)檢測(cè)CA242的敏感性和特異性。結(jié)果 流式熒光發(fā)光法的CA242檢測(cè)低限為0.89 U/ml，線性范圍經(jīng)驗(yàn)證為1～500 U/ml。方法不精密度批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為3.37%～5.30%，批間CV為7.43%～9.60%。與常規(guī)的ELISA法進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)，存在線性回歸方程Y=1.0398X-0.947，相關(guān)系數(shù)r=0.9687。受試者工作特征(ROC)曲線下面積為0.811±0.025(95%CI0.763～0.859)，以18.625 U/ml為最佳臨界值，診斷胰腺癌的特異性達(dá)92.0%，敏感性為62.1%。結(jié)論 流式熒光技術(shù)檢測(cè)血清CA242具有時(shí)間短，高通量，多指標(biāo)檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，值得臨床進(jìn)一步推廣。

胰腺腫瘤； 流式熒光技術(shù)； 糖鏈抗原242； 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和方法

胰腺癌因具有高浸潤(rùn)性、缺乏早期診斷方法、對(duì)化療不敏感而成為一種兇險(xiǎn)的惡性腫瘤[1-3]，在我國(guó)居惡性腫瘤發(fā)病第7位，發(fā)病率為7.28/106[4]。糖類抗原242(CA242)作為血清腫瘤標(biāo)志物用于胰腺癌的輔助診斷具有重要價(jià)值[5-6]，且在臨床應(yīng)用較長(zhǎng)時(shí)間。目前CA242常規(guī)檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附

(ELISA)法，該法性能穩(wěn)定，用于臨床已有數(shù)十年時(shí)間。隨著臨床對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)周期的要求提高，傳統(tǒng)ELISA方法因耗時(shí)較長(zhǎng)而顯得落后。流式熒光法又稱xMAP、懸浮陣列、液相芯片等，它是以熒光編碼微球?yàn)楹诵模魇皆怼⒓す夥治觥⒏咚贁?shù)字信號(hào)處理等多種技術(shù)于一體的多指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行分析的技術(shù)平臺(tái)，可一次同時(shí)準(zhǔn)確定量檢測(cè)100種不同的生物分子，具有高通量、高靈敏度、多指標(biāo)檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，可用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、受體及配體識(shí)別分析等多方面、多領(lǐng)域的研究。目前該方法已逐漸進(jìn)入臨床檢測(cè)的各個(gè)領(lǐng)域[7]。本研究采用流式熒光法檢測(cè)血清CA242水平，分析其檢測(cè)效能，評(píng)估其應(yīng)用于臨床的診斷價(jià)值。

材料與方法

一、檢測(cè)標(biāo)本

收集2013年8月至2015年6月間第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院診治的血標(biāo)本416例，包括胰腺癌140例，其他腫瘤69例(肺癌27例，肝癌13例，食管癌10例，乳腺癌6例，胃癌3例，食管癌、卵巢癌、子宮頸癌各2例，其他腫瘤4例)，消化道良性疾病48例(慢性胰腺炎20例，急性胰腺炎15例，胰腺假性囊腫5例，慢性胃炎2例，肝炎2例，其他良性疾病4例)，健康體檢者159名。各種疾病的診斷根據(jù)臨床癥狀、影像學(xué)檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查和(或)病理學(xué)檢查結(jié)果。

二、檢測(cè)方法

CA242定量檢測(cè)試劑盒(流式熒光發(fā)光法)由上海透景公司提供，多功能流式點(diǎn)陣儀為L(zhǎng)uminex公司產(chǎn)品，型號(hào)Luminex200。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、流式熒光發(fā)光法最低檢測(cè)限及線性范圍

流式熒光發(fā)光法檢測(cè)CA242的最低檢測(cè)限為0.89 U/ml，線性范圍上限為500 U/ml，下限為1 U/ml。將從臨床收集的接近線性范圍上限的高值CA242樣本(CA242 492.43 U/ml)和接近線性范圍下限的CA242樣本(CA242 1.12 U/ml)按1∶0、1∶4、2∶3、3∶2、4∶1、0∶1體積比混合成為6組等距濃度樣本，每個(gè)濃度樣本均重復(fù)檢測(cè)2次，各個(gè)濃度點(diǎn)實(shí)測(cè)值與理論值相關(guān)系數(shù)r=0.9928，說(shuō)明CA242在聲明線性范圍內(nèi)線性良好。

二、流式熒光發(fā)光法檢測(cè)的組內(nèi)、組間差異

三、流式熒光發(fā)光法準(zhǔn)確度與ELISA法比對(duì)

162例血樣本在同天內(nèi)分別用流式熒光法與ELISA法檢測(cè)，兩方法間存在線性回歸方程：Y=1.0398X- 0.947，相關(guān)系數(shù)r=0.9687(圖1)，表明兩種方法檢測(cè)CA242的相關(guān)性良好，系統(tǒng)誤差小，存在較好的可比性。

四、不同疾病組血清CA242水平

胰腺癌、其他腫瘤、胰腺及消化道良性疾病患者及健康人群的CA242水平分別為(159.96±277.40)、(31.02±107.95)、(32.76±114.62)、(4.69±4.97)U/ml。胰腺癌患者CA242水平顯著高于其他3組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.001)，其他腫瘤組、胰腺及消化道良性疾病組與健康人群組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.692)。

圖1 流式熒光發(fā)光法與ELISA法檢測(cè)CA242值的相關(guān)性

五、ROC曲線分析

416例臨床血清樣本的CA242的AUC為0.811±0.025，95%CI為0.763～0.859(圖2)。以18.625 U/ml為界，診斷胰腺癌的敏感性為62.1%，特異性為92.0%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為79.8%，陰性預(yù)測(cè)值為82.7%。

圖2 CA242診斷胰腺癌的ROC曲線

討 論

CA242在1985年由Lindolm等分離出來(lái)，識(shí)別CA242的抗體來(lái)源于人大腸癌Colo205細(xì)胞株[10]，其抗原決定簇是一種唾液酸化的碳水化合物[11]。CA242是胰腺重要的腫瘤標(biāo)志物，它相對(duì)于CA19-9在相似敏感性下具有更高的特異性[12]。在不同良惡性疾病時(shí)，CA242、CA19-9的抗原決定簇出現(xiàn)的機(jī)會(huì)和程度并不相同。惡性腫瘤時(shí)，兩種抗原決定簇的出現(xiàn)均較正常時(shí)明顯增多。而良性疾病尤其是良性肝、胰、膽道疾病時(shí)，CA19-9常常會(huì)升高，但CA242不升高。因此，檢測(cè)CA242診斷惡性腫瘤比CA19-9和CA50更具特異性[6,12]。

目前臨床檢測(cè)CA242的常用方法為ELISA法、化學(xué)發(fā)光法(CLIA)、蛋白芯片法等[6,12-14]。流式熒光技術(shù)檢測(cè)CA242是一種新方法，在流式熒光法平臺(tái)上利用藻紅蛋白(PE)標(biāo)記CA242抗體，與血清中的CA242反應(yīng)，加入交聯(lián)有抗CA242的捕獲單克隆抗體的熒光編碼微球的混懸液，最終形成了微球-捕獲抗體-CA242抗原-PE標(biāo)記抗體的復(fù)合物。在流式點(diǎn)陣分析儀上，熒光編碼的微球可被微量液體傳送系統(tǒng)排成單列，通過(guò)兩束激光，一束判定微球的編碼從而決定被測(cè)腫瘤標(biāo)志物的種類，另一束測(cè)定微球上的PE熒光強(qiáng)度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出待測(cè)血清中的CA242濃度。它是一種基于熒光編碼微球和流式技術(shù)臨床應(yīng)用型高通量發(fā)光檢測(cè)技術(shù)[15]，具有靈敏度高、線性范圍寬、精密度好等優(yōu)點(diǎn)[15-17]。10 mg/ml三酰甘油或1 mg/ml膽紅素不會(huì)干擾流式熒光法檢測(cè)，而ELISA法在8 mg/ml三酰甘油或0.6 mg/ml膽紅素水平以下才不受干擾。流式熒光技術(shù)反應(yīng)特點(diǎn)屬于液相反應(yīng)，反應(yīng)效率高，可以大大縮短反應(yīng)時(shí)間。

本研究結(jié)果顯示，采用流式熒光技術(shù)整體反應(yīng)時(shí)間僅為1 h，遠(yuǎn)短于ELISA法4 h的反應(yīng)時(shí)間；流式熒光技術(shù)的CA242定量檢測(cè)試劑盒靈敏度為0.1 U/ml，高于ELISA試劑盒1 U/ml的敏感性；流式熒光技術(shù)對(duì)CA242檢測(cè)的線性范圍較寬，其上線可達(dá)到500 U/ml；批內(nèi)、批間不精密度CV均<10%；流式熒光法與ELISA法的相關(guān)系數(shù)r=0.9687，存在較好的可比性。應(yīng)用流式熒光技術(shù)檢測(cè)CA242診斷胰腺癌的特異性92.0%時(shí)，敏感性為62.1%，與文獻(xiàn)報(bào)道的特異性86.5%、敏感性70.3%接近[18]。流式熒光技術(shù)多重檢測(cè)的特點(diǎn)為多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷胰腺癌提供了良好的方法學(xué)工具。

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(本文編輯：屠振興)

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Value of flowcytometry fluorescence immunoassay of CA242 in the diagnosis of pancreatic cancer

ChenYuanyuan,XueMiao,LiMingyi,ZhangLezhi.DepartmentofLaboratoryMedicine,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

Correspondingauthor:ZhangLezhi,Email: 13661924186@163.com

Objective To conduct a methodological evaluation on flowcytomotry fluorescence detection of serum CA242, and to evaluate its value in the diagnosis of pancreatic cancer. Methods The blood samples of 40 cases of pancreatic cancer, 49 cases of other tumors, 48 cases of benign digestive diseases and 159 healthy volunteers were collected. Fowcytometry fluorescence immunoassay was used to detect serum level of CA242, and it was compared with routine ELISA method to measure its sensitivity and specificity. Results The detection limit of CA242 by flowcytometry fluorescence immunoassay was 0.89 U/ml, the linear range was 1～500 U/ml after confirmation. The within-batch CV was 3.37%～5.30%, between batch CV was 7.43%～9.60%. When compared with routine ELISA, flowcytometry fluorescence immunoassay showed the equation of linear regression is Y=1.0398X-0.947,r=0.9687. Area under ROC curve was 0.811±0.025 (95%CI0.763～0.859), with 18.625 U/ml as the best cutoff value, the specificity was 92.0% and the sensitivity was 62.1%. Conclusions Flowcytometry fluorescence immunoassay for CA242 testing has the advantage of shorter detection time, miltiple sample and testing project detection, which is worth of clinical application.

Pancreatic neoplasms; Flowcytometry fluorescence immunoassay; CA242; Laboratory techniques and procedures

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.06.003

200433 上海，第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科

張樂(lè)之，Email：13661924186@163.com

2015-07-14)