潮風草中非C21甾體類化學成分研究*

劉秀芬，丁美玲，張朝鳳，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學中藥學院生藥學研究室，南京 211198

潮風草中非C21甾體類化學成分研究*

劉秀芬，丁美玲，張朝鳳**，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學中藥學院生藥學研究室，南京 211198

目的：研究民間藥用植物潮風草Cynanchum ascyrifolium中非C21甾體類化學成分，闡明其抗炎作用的物質基礎。方法：采用多種柱色譜技術進行化學成分的分離純化，并根據理化性質和波譜數據鑒定結構。結果：從本種植物的干燥根莖中分離鑒定了11個化合物，分別鑒定如下：五環三萜類的華北白前醇（1）；苯乙酮類的對羥基苯乙酮（2），2，4-二羥基苯乙酮（3）和 4-羥基-3-甲氧基苯乙酮（4）；植物甾醇類的6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮（5），3β，5α，6β-三羥基豆甾烷（6），β-谷甾醇（7）和β-胡蘿卜苷（8）；苯甲酸類的對羥基苯甲酸（9）和3，4-二羥基苯甲酸甲酯（10）；以及神經鞘脂苷元（2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2'-hydroxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol（11）。結論：潮風草的根莖中五環三萜和苯乙酮類成分含量較高，可能為潮風草發揮抗炎作用的主要成分類型之一；以上化合物均首次從本種植物中分離得到。

蘿藦科；潮風草；苯乙酮類；植物甾醇類

潮風草Cynanchum ascyrifolium系蘿藦科鵝絨藤屬植物，生于山坡、林緣、雜木林下及稍濕草地。產于吉林、遼寧、山東、河北，朝鮮、日本也有分布。根可藥用，在東北也作“白薇”收購[1]。本品味苦、咸，性寒，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效。本課題組前期研究發現，潮風草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，無顯著細胞毒性。C21甾類為蘿藦科特征性化學成分，具有較好的抗炎活性及免疫抑制作用[2]。

Yeo H等[3-4]從潮風草的根中分離得到5個C21甾體苷（cynascyroside A-E），而潮風草中C21甾體之外的化學成分未見報道。為了進一步探索潮風草中C21甾體以外的活性物質，對其根莖的乙醇提取物進行系統的化學成分研究。在此，本文報道所分離鑒定的11個非C21甾體類化合物，分別屬于苯乙酮類、植物甾醇類、簡單有機酸類、五環三萜及神經鞘脂類等。以上所有化合物均為首次從潮風草中分得（結構見圖1）。

圖1 潮風草根莖中分離鑒定的化合物結構

1 儀器與材料

Brucker ACF-300、500型核磁共振儀；Agilent 1100LC-ESI/MS型液-質聯用儀；薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠100～200目和200～300目均為青島海洋化工集團公司生產；羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，Pharmacia公司）；MCIgel-CHP-20P分離填料（日本三菱化工）；所用試劑均為分析純。

潮風草的根莖于2012年8月采自吉林省長白山地區，經本文通訊作者張朝鳳鑒定原植物為蘿藦科潮風草Cynanchum ascyrifolium，憑證標本（CFC-201208）存放于中國藥科大學生藥學研究室。

2 提取分離

潮風草干燥根莖（7.2 kg）粉碎，以80%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，回收乙醇溶劑，濃縮得到總浸膏1.67 kg。將總浸膏混懸在水里，用乙酸乙酯進行萃取，減壓回收溶劑后得到浸膏285.8 g。取乙酸乙酯萃取物250 g用硅膠柱色譜法進行分離，用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶1）梯度洗脫收集得到6個流分（Fr.）A～F和化合物1的粗品，粗品經重結晶純化得到化合物1（1.035 g）；Fr.B經硅膠柱色譜，采用石油醚-乙酸乙酯（5∶1～3∶1）梯度洗脫得到化合物2（698 mg）、3（604 mg）、7（94 mg），石油醚-丙酮（3∶1）洗脫得到化合物4（25 mg）、5（5 mg）；Fr.C經MCI-gel（80%甲醇-水）色譜柱后，石油醚-乙酸乙酯（3∶1～1∶1）梯度洗脫得到化合物10（77 mg）；用二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）洗脫，得到化合物6（14 mg）和8（189 mg）；二氯甲烷-甲醇（20∶1～8∶1）梯度洗脫，再經Sephadex LH-20柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫得化合物9（13 mg）和11（22 mg）。

3 結構鑒定

化合物1無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：222℃～225℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：3.48（1H，brd，J=6.0 Hz，H-3），5.55（1H，brd，J=6.0 Hz，H-6），1.04（3H，s，H-23），1.13（3H，s，H-24），0.89（3H，s，H-25），0.81（3H，s，H-26），1.25（3H，s，H-27），0.94（3H，s，H-28），0.88（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.0 Hz，H-30）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：20.8（C-1），28.8（C-2），76.5（C-3），41.3（C-4），140.7（C-5），121.4（C-6），22.6（C-7），44.6（C-8），34.5（C-9），37.2（C-10），30.6（C-11），30.7（C-12），39.3（C-13），39.6（C-14），29.4（C-15），32.7（C-16），39.9（C-17），54.5（C-18），48.2（C-19），35.9（C-20），27.8（C-21），42.5（C-22），27.2（C-23），25.4（C-24），28.8（C-25），15.4（C-26），16.8（C-27），33.3（C-28），21.2（C-29），23.4（C-30）。以上數據與文獻[5]基本一致，故鑒定化合物1為華北白前醇。

化合物2白色片狀結晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：109℃～110℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.88（2H，d，J=8.0 Hz），6.84（2H，d，J=9.0 Hz），2.51（3H，s）。以上數據與文獻[6]基本一致，故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物3白色片狀結晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：142℃～143℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.24（1H，d，J=2.0 Hz），6.35（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz），7.70（1H，d，J=8.5 Hz），2.51（3H，s）。以上數據與文獻[6]基本一致，故鑒定為2，4-二羥基苯乙酮。

化合物4無色針晶（石油醚-丙酮）；mp：113℃～115℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.53～7.54（2H，m），6.95（1H，d，J=8.5 Hz），6.15（1H，s），3.95（3H，s），2.55（3H，s）。以上數據與文獻[6]基本一致，故鑒定為4-羥基-3-甲氧基苯乙酮。

化合物5無色鱗片狀晶體 （石油醚-丙酮）；ESI-MS m/z 429.5[M+H]+，ESI-MS m/z 463.5[M+Cl]-。1HNMR（CDCl3，300 MHz）δ：0.74（3H，s，H-18），0.80（3H，s，H-26），0.82（3H，s，H-27），0.84（3H，s，H-29），0.92（3H，d，J=6.3 Hz，H-21），1.37（3H，s，H-19），4.34（1H，brs，H-6）and 5.81（1H，s，H-4）；13C-NMR（CDCl3，75 MHz）δ：37.1（C-1），34.2（C-2），200.2（C-3），126.2（C-4），168.3（C-5），73.2（C-6），38.6（C-7），29.7（C-8），53.6（C-9），38.6（C-10），20.9（C-11），39.6（C-12），42.5（C-13），55.9（C-14），24.1（C-15），28.1（C-16），56.0（C-17），12.0（C-18），19.4（C-19），36.1（C-20），18.7（C-21），33.9（C-22），26.1（C-23），45.8（C-24），29.2（C-25），19.7（C-26），19.0（C-27），23.1（C-28），11.9（C-29）。以上數據與文獻[7]基本一致，故鑒定為6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮。

化合物6無色針晶（二氯甲烷-甲醇）；mp：248℃～252℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.15（1H，s，H-3），4.15（1H，s，H-6），2.95（1H，t，J=12.5 Hz，H-4a），2.08（1H，m，overlap，H-4b），0.75（3H，s，H-18），0.82（3H，t，J=7.5 Hz，H-29），0.87（6H，d，J=7.0 Hz，H-26，27），0.99（3H，m，H-21），1.65（3H，s，H-19）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：32.5（C-1），33.3（C-2），67.4（C-3），42.9（C-4），75.9（C-5），76.3（C-6），35.7（C-7），31.2（C-8），45.9（C-9），39.1（C-10），21.8（C-11），40.7（C-12），43.1（C-13），56.6（C-14），24.6（C-15），28.6（C-16），56.6（C-17），12.1（C-18），17.2（C-19），36.5（C-20），19.0（C-21），34.3（C-22），26.5（C-23），46.1（C-24），29.5（C-25），19.2（C-26），19.9（C-27），23.4（C-28），12.4（C-29）。以上數據與文獻[8]基本一致，故鑒定為3β，5α，6β-三羥基豆甾烷。

化合物7無色針狀結晶 （丙酮）；mp：138℃～140℃。紫外燈下無熒光無暗斑，5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-谷甾醇標準品共薄層，三個溶劑系統，Rf值及斑點顏色均一致。故確定該化合物為β-谷甾醇。

化合物8白色粉末（甲醇）；mp：296℃～298℃。5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-胡蘿卜苷標準品共薄層，三個溶劑系統，Rf值及斑點顏色均一致。故確定該化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物9無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：214℃～216℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.87（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5）；13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.5（C=O），163.8（C-4），133.4（C-2，6），123.2（C-1），116.5（C-3，5）。以上數據與文獻[9]基本一致，故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物10白色粉末 （二氯甲烷-甲醇）；ESIMS m/z 166.8[M-H]+。1H-NMR（C5D5N，300 MHz）δ：8.17（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6），8.08（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），7.30（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），3.74（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（C5D5N，75 MHz）δ：169.1（C=O），123.1（C-1），115.8（C-2），149.0（C-3），152.4（C-4），113.6（C-5），124.6（C-6），55.6（-OCH3）。以上數據與文獻[10]基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物11白色粉末 （二氯甲烷-丙酮）；mp：138℃～139℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：8.60（1H，m，N-H），5.52（lH，m，H-2），4.63（1H，m，H-3），4.52（1H，m，H-4），4.44（1H，m，H-2′），4.37（1H，m，H-la），4.30（1H，m，H-lb），0.86（6H，m，H-18 and 24′），1.25-1.30（48H，m，H-13～17 and H-5′～23′）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：62.0（C-1），52.9（C-2），76.7（C-3），72.9（C-4），34.1（C-5），26.6（C-6），32.1（C-7），26.7（C-8），32.9（C-9），130.6（C-10），130.8（C-11），33.3（C-12），29.5～30.3（C-13～16），22.9（C-17），14.2（C-18），175.1（C-1′），72.4（C-2′），35.7（C-3′），25.8（C-4′），29.5～30.3（C-5′～22′），22.9（C-23′），14.2（C-24′）。以上數據與文獻[11]基本一致，故鑒定為 （2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2′-hy-droxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol。

4 討 論

潮風草為民間藥用植物，功效與傳統中藥白薇類似。C21甾體類化合物為白薇的主要活性成分，具有抗炎、鎮痛、退熱和抗腫瘤等藥理活性[12]。已有文獻報道，潮風草含有C21甾體類化合物，但未見到相關文獻報道其他類化學成分。本課題組前期研究發現潮風草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，為了闡明其抗炎作用的基礎，本課題對潮風草的化學成分進行系統的研究，從其乙酸乙酯部位分離得到植物甾醇類、苯乙酮類、簡單有機酸類、五環三萜及神經鞘脂類等各種不同類型的化合物。根據文獻報道，植物甾醇作為一種藥食同源的甾體類化合物具有明顯的免疫調節及抗炎作用[13-14]，能夠調節輔助T細胞的免疫應答[15]；與華北白前醇相同結構類型的羽扇豆醇型三萜能夠明顯的抑制前列腺炎癥[16]；苯乙酮類及簡單有機酸類化合物能夠抑制LPS誘導巨噬細胞中TNF-α因子的表達，并呈現出較好的劑量依賴性[17-18]；表明潮風草抗炎活性可能與其所含以上多種成分有關。本研究對潮風草發揮抗炎作用的物質基礎進行了探討，為其合理的開發利用提供理論依據。

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Non-C21Steroidal Constituents from the Roots of Cynanchum ascyrifolium*

LIU Xiu-fen,DING Mei-ling,ZHANG Chao-feng**,ZHANG Mian,XU Xiang-hong
Research Department of Pharmacognosy,China Pharmaceutical University,Nanjing 211198

Objective:To study the non-C21steroidal constituents of Cynanchum ascyrifolium(Asclepi-adaceae)and clarify the material basis of anti-inflammatory effects.Methods:Various column chromato-graphic techniques were used to isolate and purify the chemical constituents,their physico-chemical prop-erties and spectral data were employed to elucidate their structures.Results:Eleven known compounds were isolated from the roots of C.ascyrifolium and identified as:hancockinol (1),4-hydroxyacetophenone (2),2,4-dihydroxyacetophenone(3),4-hydroxy-3-methoxy acetophenone(4),stigmast-4-en-6β-ol-3-one(5), 3β,5α,6β-trihydroxylated sterols(6),β-sitosterol (7),β-daucosterin(8),4-hydroxybenzoic acid(9)methyl 3,4-dihydroxy benzoate(10)and(2S,3S,4R,10E)-2-[(2′R)-2′-hydroxytetracosanoyl amino)-10-octadecene-1,3,4-triol(11).Conclusion:The contents of pentacyclic triterpenes and acetophenons are higher,they may be the anti-inflammatory constituents,and all these substance are isolated firstly from this species.

Asclepiadaceae;Cynanchum ascyrifolium;Acetophenones;Phytosterols

R284.2

A

1673-7806（2015）02-123-04

國家新藥創新重大項目中藥化學成分庫建設（No.2011ZX09307-002-02）

劉秀芬，女，碩士 E-mail:lxf3897@126.com

* *通訊作者張朝鳳，女，副研究員 E-mail:njchaofeng@126.com

2015-01-14

2015-01-28?