IL-10R基因多態性與乙型肝炎病毒感染慢性化的相關性

鄭 亢，郜玉峰，潘高峰，殷宏娟，鄒桂舟

IL-10R基因多態性與乙型肝炎病毒感染慢性化的相關性

鄭 亢，郜玉峰，潘高峰，殷宏娟，鄒桂舟

摘要目的 探討IL-10R基因多態性與乙型肝炎病毒（HBV）感染后慢性化的相關性。方法 收集501例慢性HBV感染患者和301例急性自限性HBV感染患者外周血標本，兩組患者的年齡、性別和地區來源均相互匹配。Snapshot方法檢測IL-10R兩個tag SNP（rs2228055、rs2256111）的基因型；χ2檢驗用于比較兩組間基因型及等位基因頻率分布。結果 IL-10R基因rs2228055、rs2256111多態等位基因和基因型頻率在兩組中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。IL-10R基因rs2228055位點G／G基因型頻率（7.2%）明顯低于急性自限性HBV感染患者（13.0%），差異有統計學意義（P ＜0.05）；GG基因型在HBV感染慢性化的風險是AG＋AA基因型的0.52倍（OR＝0.52，95%CI：0.32～0.84）。結論IL-10R rs2228055位點GG基因型在HBV感染后的慢性化中發揮保護作用。

關鍵詞乙型肝炎病毒；單核苷酸多態性；IL-10R；易感性

2015-02-09接收

作者單位：安徽醫科大學第二附屬醫院肝病科，合肥 230601

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染慢性化的原因非常復雜，除與HBV的變異、宿主的年齡、性別和免疫狀態有密切關系外，遺傳基因的多態性可能是導致HBV感染慢性化的另一個重要原因［1］。HBV感染后，機體對病毒的清除能力與機體的免疫功能密切相關，而病毒的清除與否決定著疾病的轉歸和預后［2］。白細胞介素10受體（interleukin-10 receptor，IL-10R）是重要免疫調節基因，通過其配體IL-10參與免疫負性調節，在免疫反應中發揮抗炎癥的作用，從而維持機體內部免疫平衡［3-4］。最新的研究［5］顯示IL-10R多態性與泰國人群HBV的易感性相關。由于不同人種存在遺傳異質性，且目前尚未見IL-10R基因多態性與漢族慢性HBV感染相關性研究報道。該研究選取IL-10R基因為候選基因，探討IL-10R基因rs2228055、rs2256111多態位點與HBV感染的遺傳關聯性。

1　材料與方法

1.1 病例資料 本研究收集了安徽醫科大學第二附屬醫院肝病科門診和住院的患者，無血緣關系的漢族人。慢性乙型肝炎患者501例，男284例，女217例，年齡19～65（45.8±14.9）歲，自愈性乙肝病毒感染者301例，其中男166例，女135例，年齡19 ～69（44.3±15.8）歲。患者的臨床資料如表1所示。慢性乙型肝炎患者為有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過1年，血清HBsAg、HBeAg和HBV-DNA陽性者，1年內連續隨訪4次以上均顯示谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶均在正常范圍內。自愈性乙肝病毒感染者為無乙肝疫苗接種史，HBsAg陰性，血清抗-HBs、血清抗-HBc陽性者，谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶均在正常范圍內。診斷符合國際慢性乙型肝炎診斷標準。該研究得到了安徽醫科大學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 實驗步驟 用抗凝的外周血標本2 ml提取基因組DNA，通過PCR擴增目的基因，PCR產物分離純化，采用Snapshot延伸反應，然后進行測序、分析。IL-10R基因SNP位點的選擇：根據HapMap數據中的信息，選擇TagSNP中r2＞0.8，微等位基因MAF＞0.1，可能發揮功能的SNP作為候選的SNP位點。本研究選擇了rs2228055、rs256111位點。

1.2.2 PCR引物的設計、擴增及基因分型 PCR擴增SNP位點所用是通過primer primer5.0設計，于上海生工科技生物公司合成，rs2228055上游引物：5′-TGTCCGTGTGCCATGAAATAAAA-3’，下游引物：5′-CTGAGAGCAGCCCAGCTGAC-3′；rs256111上游引物：5′-CCTCCTCAGCCCTCAAGTCTCA-3’，下游引物：5′-GGGAACCCCATACCGTGAAGTT-3′。PCR產物通過延伸引物進行基因分型，rs2228055位點延伸引物為CACTGCCTGGTGAGGGAGA，rs256111位點延伸引物為TTTTGGCCCAAGATGGCCCCCGC。

1.3 統計學處理 采用SPSS 10.0進行統計學分析，本研究兩組患者的年齡等計量資料運用t檢驗，基因型及等位基因的比較及Hardy-Weinberg平衡檢測均運用χ2檢驗或是Fisher確切概率法，基因型及等位基因的比較運用Bonferroni校正，單倍體由SHEsis統計軟件分析。

2　結果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢測 IL-10R基因rs2228055、rs256111多態位點的基因型及等位基因在兩組患者中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。兩組患者的年齡、性別差異均無統計學意義。

2.2 兩組患者IL-10R基因多態位點基因型及等位基因的比較 IL-10R基因rs2228055、rs256111多態位點的基因型及等位基因頻率情況見表1。rs2228055位點GG基因型在慢性HBV感染患者中顯著低于自限性HBV感染患者（OR＝0.52，95% CI：0.32～0.84）。rs2228055位點GA基因型及rs2256111位點GA基因型在慢性HBV感染患者中有升高的趨勢，但經Bonferroni校正后兩組患者之間差異無統計學意義。兩個多態位點的其他基因型與等位基因在兩組患者中差異均無統計學意義。

表1　兩組患者IL-10R的基因型及等位基因的頻率比較［n（%）］

2.3 兩組患者的單倍體比較 兩個多態位點通過SHEsis軟件進行單倍體構建，兩組患者單倍體類型的比較見表2。結果顯示，兩個多態位點構成的單倍體在兩組之間差異均無統計學意義。

3　討論

HBV感染人體后，由于機體對病毒的清除能力不同，會導致不同的轉歸。若免疫功能低下或是免疫缺陷，不能徹底地清除病毒，病毒潛伏于肝臟，經過長期的免疫耐受期的沉寂后開始發病，即導致慢性乙型肝炎［1］。在我國，慢性乙型肝炎的患者人數眾多，發病率較高，且目前尚無特效的治療方式，主要是抗病毒及對癥治療。慢性乙型肝炎的發病機制復雜，免疫和遺傳因素參與其發病。多種免疫相關基因多態與HBV的遺傳易感性相關，這些基因在HBV感染的預后過程中發揮著重要作用。IL-10、GTP結合核蛋白等多種基因的多態性與慢性乙型肝炎顯著相關，而已發現的基因只能解釋慢性乙型肝炎的易感性［3，6］。基于遺傳、免疫因素的共同作用，因此免疫相關的基因與慢性HBV感染的遺傳易感性研究是當前研究的熱點。本研究結果表明IL-10R基因rs2228055位點GG基因型與慢性乙型肝炎顯著相關；而rs2228055位點GA，rs2256111位點GA和AA基因型在慢性HBV感染中有升高趨勢，經校正后與疾病無相關性；單倍體未發現與該病存在相關性。研究［6-9］表明，rs2228055位點與慢性丙型肝炎和早期潰瘍性結腸炎顯著相關；而rs2256111位點在韓國人群中與高血壓及前列腺肥大相關。這些不同的結果可能是由于不同的種族在遺傳上具有異質性所致，不同疾病存在不同的遺傳易感性位點。

表2　慢性乙型肝炎患者和自限性肝炎患者的IL-10R單倍體頻率比較（n）

IL-10是重要的抗炎因子，主要由調節T細胞、巨噬細胞和Th2細胞分泌的，IL-10發揮抗炎癥及免疫調節作用是通過與其配體IL-10R結合［2，4］。在HBV感染的患者中，IL-10的表達水平明顯增加。IL-10及IL-10R的基因多態性是炎癥性疾病研究的熱點，這些基因某些單核苷酸的多態性可能影響基因的表達或是功能，從而調控免疫反應。本研究顯示，IL-10R基因rs2228055多態位點GG基因型在慢性乙型肝炎患者中顯著降低，在該病中發揮保護作用。根據該多態位點的位于IL-10R基因的外顯子區段，IL-10R基因的rs2228055A／G位點會導致氨基酸合成的改變：異亮氨酸和纈氨酸。當此位點等位基因為A堿基時，該位點編碼的氨基酸為異亮氨

酸；而當該位點等位基因為G堿基時，編碼的氨基酸為纈氨酸。由此可知，此位點的多態性導致了氨基酸的改變，進而影響IL-10R基因的表達或功能。在此基礎上，可推測IL-10R基因的rs2228055A／G位點對疾病的影響：可能因為該多態位點通過改變編碼的氨基酸影響IL-10R的功能及表達水平，進而引起免疫平衡打破，機體清除HBV能力的改變，從而影響疾病的發生。

同其他的病例對照研究一樣，本文的不足之處主要有以下幾個方面［10］：首先，在于患者僅來自于漢族人群，需要其他多種族、大樣本的標本驗證。其次，沒有對本研究顯示的與HBV感染慢性化相關的多態位點rs2228055進行功能研究。

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Association between IL-10R gene polymorphisms and spontaneous clearance of hepatitis B virus infection

Zheng Kang，Gao Yufeng，Pan Gaofeng，et al
（Dept of Infectious Diseases，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230032）

AbstractObjective To examine whether IL-10R polymorphisms were associated with susceptibility to chronic hepatitis B virus（HBV）infection in a Chinese Han population.Methods A total of 501 chronic HBV-infected patients as cases and 301 age-，sex-，and ethnically matched self-limiting HBV-infected individuals as controls were recruited in this study.Two tag SNPs（rs2228055 and rs2256111 of IL-10R）were genotyped in all subjects by using Snapshot method.The frequencies of alleles and genotypes between the two groups were analyzed by χ2analysis.Results All genotype and allele distributions in patients with C-HBV and patients with SL-HBV were in Hardy-Weinberg equilibrium.The frequency of the rs2228055 GG genotype（7.2%）was significantly decreased in patients with C-HBV as compared to SL-HBV patients（13.0%）.In patients with chronic HBV infection，the risk of GG genotype in patients is 0.52 times of that of the AG，AA genotypes patients（OR＝0.52，95%CI：0.32～0.84）.Conclusion In this study，the results suggest that the rs2228055 GG genotype of IL-10R is associated with the susceptibility to chronic HBV infection in the Chinese Han population.

Key wordshepatitis B virus；single polymorphism；interleukin-10 recepter；gene susceptibility

作者簡介：鄭 亢，女，碩士研究生；鄒桂舟，男，主任醫師，碩士生導師，責任作者，E-mail：ayzouguizhou＠sina.com

基金項目：國家自然科學基金（編號：81273142）

文獻標志碼A

文章編號1000-1492（2015）05-0632-03

中圖分類號R 512.6＋3