血清Ang／Tie2、VEGF在糖尿病腎病病情評估中的應用價值

霍亞杰，溫玉潔，劉陶文，夏含笑

血清Ang／Tie2、VEGF在糖尿病腎病病情評估中的應用價值

霍亞杰1，溫玉潔2，劉陶文2，夏含笑2

摘要目的 觀察血清中血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）及其受體Tie2與血管內皮生長因子（VEGF）在糖尿病腎病（DN）病情進展中的水平變化規律，探討平衡其比率在DN中的重要性。方法 選取2型糖尿病患者60例，依據尿白蛋白排泄率（UAER）分為3組：正常白蛋白尿患者20例（DM1組）、微量白蛋白尿患者22例（DM2組）、大量白蛋白尿患者18例（DM3組），另設健康對照患者22例（NC組）。采用ELISA法檢測受試者血清Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平，同時檢測相關生化指標。結果 ①DM1組血清VEGF、Ang-2水平高于NC組，DM2組、DM3組進一步升高，4組間差異均有統計學意義（P＜0.05）。②DM1組血清Ang-1水平高于NC組，DM2組、DM3組逐漸下降，4組間差異無統計學意義。③Tie2水平差異無統計學意義。④UAER與Ang-2、VEGF呈正相關性（r＝0.470、0.404，P＜0.01），與Ang-1呈負相關性（r＝－0.310，P＜0.05）；Ang-2 與VEGF、Tie2呈正相關性（r＝0.450、0.725，P＜0.01）；Ang-1與Tie2呈正相關性（r＝0.571，P＜0.01），與Ang-2、VEGF呈負相關性（r＝－0.497、－0.396，P＜0.01，P＜0.05）。⑤以UAER為應變量行多元線性逐步回歸分析顯示：Ang-1、Ang-2、VEGF、肌酐進入回歸方程，是影響UAER的獨立相關因子。結論 血清中Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF水平與DN密切相關，可能參與了DN的發生發展，并影響DN病情的進程。檢測血清Ang／Tie2及VEGF可作為評估DN病情的重要指標。

關鍵詞糖尿病腎病；血管生成素；血管內皮生長因子；Tie2；尿白蛋白排泄率

2014－12－13接收

2廣西壯族自治區南溪山醫院內分泌科，桂林 541002

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是導致終末期腎病的一個首要原因，累積發病率為25%～40%［1］，由于糖尿病患病率增加及生存期的延長，DN人數逐年上升。隨著病情進展，患者最終要靠血液透析或腎移植來維持生命。目前臨床上常采用尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate， UAER）來診斷評估DN，通過控制血糖、血壓，改善血脂及腎臟血流動力學延緩DN的進程。事實上在微量白蛋白尿出現之前DN就存在血流動力學異常和代謝紊亂，故需尋找一種新的、特異的DN早期診斷標志物，以便進行早期干預治療。研究［2］表明，血清中血管生成素-1（angiopoietin-1，Ang-1）、血管生成素-2（angiopoietin-2，Ang-2）及其受體Tie2、血管內皮生長因子（vascular endothelia growth factor，VEGF）在DN進展中調節血管新生方面起重要作用，但聯合檢測4者及評估其在防治DN中的潛在作用尚無明確報道。該研究通過測定血清中Ang-1、Ang-2、Tie2及VEGF在DN患者不同階段的水平變化規律，探討平衡的比率對DN病情評估的重要性，從而為早期DN的防治提供新思路。

1 材料與方法

1．1 病例資料 選取2013年8月～2014年3月在廣西壯族自治區南溪山醫院住院的2型糖尿病患者60例和來我院體檢中心體檢的健康成年者22例。受試者均符合2010年ADA糖尿病診斷標準，年齡33～79（56.94±11.14）歲，病程1～15年。根據UAER分為3組：正常白蛋白尿患者20例作為DM1組：UAER＜20 μg／min，男11例，女9例，年齡39～73（54.35±8.85）歲；微量白蛋白尿患者22例作為DM2組：UAER為20～200 μg／min，男12例，女10例，年齡44～79（62.45±9.54）歲；大量白蛋白尿患者18例作為DM3組：UAER＞200 μg／min，男10例，女8例，年齡38～78（63.00±12.06）歲；健康對照者22例作為NC組：男11例，女11例，年齡33～62（57.80±7.31）歲。受試者排除標準：1型糖尿病，高血糖高滲狀態，乳酸性酸中毒，高血壓，心、肝、腎功能不全者，感染性疾病，惡性腫瘤，自身免疫性疾病，極度衰弱者及近期使用影響腎功能的藥物等。實驗得到倫理委員會的批準，所有受試者簽署知情同意書。

1．2 方法

1．2．1 血清收集 受試者均隔夜禁食8～12 h，于清晨空腹采取肘靜脈血約5 ml，離心（2 000 r／min，10 min）后分離血清，取1 ml血清至1.5 mlEP管中，

置于－70℃冰箱中保存備用。

1．2．2 相關指標檢測 血清中Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF水平均采用ELISA法測定（試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司）。按說明書操作，測吸光度，根據標準曲線計算血清中Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF濃度。空腹血糖（fasting plasma glucose，FPG）、肌酐（creatinine，Cr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triacylglycerol，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）均采用自動血生化分析儀檢測。糖化血紅蛋白（glycated hemoglobin，HbA1C）采用離子交換高效液相色譜法測定，24 h尿微量白蛋白定量采用比濁法測定。體重指數（body mass index，BMI）＝體重／身高2。UAER＝24 h尿微量白蛋白濃度×24 h尿量／（24×60）。

1．3 統計學處理 應用SPSS 17．0軟件進行分析，符合正態分布的計量資料以±s表示。多組間均數比較采用單因素方差分析，兩變量間關系采用Pearson直線相關分析，影響UAER的多因素分析采用多元線性逐步回歸分析。

2 結果

2．1 DM1組、DM2組、DM3組及NC組觀察指標比較 所有觀察指標經正態檢驗，符合正態分布。4組受試者BMI、HbA1C、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Tie2水平比較，差異均無統計學意義。4組受試者BUN、Cr、血清尿酸（serum uric acid，sUA）、UAER、Ang-2、 VEGF水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。其中，DM1組血清VEGF、Ang-2、UAER的水平高于NC組，DM2組、DM3組進一步升高，4組間差異均有統計學意義（P＜0.05）。DM1組血清Ang-1水平高于NC組（P＜0.05），DM2組、DM3組逐漸下降，差異無統計學意義。Tie2受體水平差異無統計學意義。見表1。

表1　各組觀察指標比較（±s）

表1　各組觀察指標比較（±s）

與NC組比較：*P＜0．05；與DM1組比較：△P＜0．05；與DM2組比較：＃P＜0．05

項目　NC組（n＝22）　DM1組（n＝20）　DM2組（n＝22）　DM3組（n＝18）　F值　P值BMI（kg／m2）　24．65±2．80　24．25±3．40　24．57±2．98　23．70±2．32　1．198　0．316 BUN（mmol／L）　4．87±1．24　5．38±1．71*　6．36±2．00*△　8．68±4．30*△＃　8．230　　＜0．001 Cr（μmol／L）　69．74±18．06　73．00±19．06*　77．73±20．11*△　137．28±69．12*△＃　13．880　　＜0．001 sUA（μmol／L）　308．45±89．83　300．35±64．62*　310．55±77．86*△　388．05±88．05*△＃　4．831　0．004 HbA1C（%）　4．36±1．78　9．16±2．79　9．98±2．04　8．98±1．86　1．150　0．324 UAER（μg／min）　　－　8．88±5．54*　98．37±48．28*△　517．22±313．47*△＃62．020　　＜0．001 TC（mmol／L）　5．17±1．06　5．12±1．18　5．00±0．87　5．37±0．98　0．463　0．709 TG（mmol／L）　1．89±1．07　2．40±0．92　2．47±2．25　3．02±1．34　2．007　0．120 HDL-C（mmol／L）　1．43±0．52　1．18±0．32　1．28±0．32　1．11±0．216　3．160　0．130 LDL-C（mmol／L）　3．44±0．86　3．39±0．80　3．20±0．70　3．57±0．88　0．758　0．521 Ang-1（ng／L）　16．88±14．74　22．90±16．76*　20．46±15．21　10．56±5．65　2．640　0．060 Ang-2（ng／L）　2．03±1．56　2．77±2．17*　2．99±1．80*△　3．35±2．60*△＃　1．245　　＜0．001 Tie2（ng／L）　1．49±0．89　1．59±1．13　6．92±1．08　2．04±0．85　2．830　0．094 VEGF（ng／L）　31．08±24．32　66．36±31．22*　73．56±53．71*△　89．08±69．67*△＃7．066　0．020

2．2 各指標間的相關性分析 UAER與Cr、sUA、Ang-2、VEGF呈正相關性（r＝0.587、0.361、0.470、0.404，P＜0.01），與BUN呈正相關性，但相關性較弱（r＝0.280，P＜0.05），與Ang-1呈負相關性（r＝－0.310，P＜0.05）。Ang-2與Cr、VEGF、Tie2呈正相關性（r＝0.478、0.450、0.725，P＜0.01）。Ang-1 與Tie2呈正相關性（r＝0.571，P＜0.01），與Ang-2、VEGF呈負相關性（r＝－0.497、－0.396，P＜0.01，P＜0.05）。

2．3 UAER與相關指標的多元線性逐步回歸分析

為排除外混雜因素影響，以UAER為應變量，BMI、BUN、Cr、HbA1C、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Ang-1、Ang-2、Tie2、VEGF為自變量，行多元線性逐步回歸分析顯示Cr、Ang-1、Ang-2、VEGF進入回歸方程，是影響UAER的獨立相關因子。見表2。

3 討論

DN作為糖尿病微血管并發癥之一，突出特點為血管通透性和血管生成增加，Ang-1、Ang-2、Tie2 及VEGF在DN的血管新生和重塑方面發揮重要作用［3－4］。

在DN中，VEGF隨著蛋白尿的程度及血管內皮功能的失常而增加［5］。Cha et al［5］研究顯示VEGF 在DN早期上調，可作為疾病初期病情進展的標志，后期VEGF表達下降。本研究對不同階段DN患者血清中VEGF水平進行比較，表明VEGF隨蛋白尿程度增加而升高；其中DM1組高于NC組，DM3組雖有下降趨勢，但仍高于DM2和DM1組，與相關文獻［4，6］報道一致。這種隨DN進展逐漸增高的趨勢，可能與糖代謝紊亂所致血管內皮損傷后機體自我修復相關［7］。提示局部VEGF水平升高或降低均可導致蛋白尿的產生。既往有研究［4］顯示DN患者血清中VEGF及Ang-2水平與HbA1c相關，隨UAER增加而升高，本研究表明HbA1c在DM3組中是降低的，可能與患者長期使用控制血糖藥物有關。相關分析顯示DN患者UAER與VEGF呈顯著正相關性，多元線性逐步回歸分析顯示VEGF升高與UAER變化一致，為影響DN的獨立危險因素之一。提示血清中VEGF可能成為DN的預測因素和潛在危險因子。

表2　UAER水平與相關指標的多元線性逐步回歸分析

Ang-1、Ang-2參與了DN血管生成和重塑過程，Tie-2為其共同受體［2］。研究［8］表明Ang-1在第4、8周糖尿病大鼠腎組織中表達顯著上調，從第12周開始下降，第24周顯著下降，表明Ang-1水平在高血糖情況下有所消耗。Rizkalla et al［9］發現在糖尿病大鼠早期階段，Ang-1、Tie2水平上調，隨病情進展，表達逐漸下調。本研究表明DM1組血清Ang-1、Tie2水平高于NC組，DM2組、DM3組逐漸下降，且UAER與血清Ang-1呈負相關性，多元線性逐步回歸分析顯示Ang-1與DN病情進展相關。研究［10］表明Ang-1可減少蛋白尿，降低腎小球系膜的擴張、基底膜厚度，抑制炎癥因子在腎臟中的表達。推測Ang-1具有保護DN微血管內皮細胞，延緩和逆轉DN微血管病變作用。

研究［11］顯示在早期腎小球疾病中Ang-2水平增加。Kümpers et al［12］在腎血管內皮損傷的患者中發現Ang-2水平比健康者高6倍，在病情有所緩解的情況下Ang-2水平差異無統計學意義，推測Ang-2可能來源于損傷的腎血管內皮。本研究結果示DM1組血清Ang-2的水平高于NC組，DM2組、DM3組進一步升高，隨著蛋白尿程度增加而升高；UAER 與Ang-2呈顯著正相關性，多元線性逐步回歸分析顯示Ang-2升高與Tie2、UAER變化一致，為影響DN的獨立危險因素之一；與研究［2］結果一致。Ang-2參與了DN的形成發展，可作為DN早期診斷的一項重要指標，持續表達預示著腎臟病變存在進行性發展的潛在危險［4］。

本研究表明血清中Ang-1、Ang2、Tie2與VEGF 4者相互作用，共同參與了DN的發生發展。多元線性回歸分析表明血清中VEGF、Ang-2和Ang-1與UAER密切相關，是DN病情進展的獨立相關因子，可在一定程度上反應DN的嚴重程度，影響DN的進程。DM3組血清Ang-1、Tie2水平下降，而Ang-2、VEGF水平升高，提示Ang／Tie2、VEGF比值在DN患者中表達失衡。相關研究［13］表明上調VEGF與Ang-2可增加血管通透性，促不穩定血管出芽，Ang-1可拮抗此現象使血管成熟、維持血管內皮結構穩定。推測降低DN患者Ang-2與VEGF水平，將減少不良血管生成，使血管滲透脆性降低，提升Ang-1促使血管成熟穩定，由此平衡血清Ang／Tie2、VEGF的表達水平，使其在DN中發揮最大程度的保護腎臟作用。

綜上所述，血清Ang／Tie2、VEGF在DN發病機制及病情評估中發揮重要作用，平衡它們之間的關系，可作為未來的治療方法。

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Application value of serum Ang／Tie2，VEGF in the assessment of diabetic nephropathy

Huo Yajie1，Wen Yujie2，Liu Taowen2，et al
（1Graduate College，Guilin Medical University，Guilin 541001；2Dept of Endocrinology，Nanxishan Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guilin 541002）

AbstractObjective To observe the regular levels change of serum angiopoietin-1（Ang-1），angiopoietin-2（Ang-2）and receptor Tie2 as well as vascular endothelia growth factor（VEGF）in the progerssion of diabetic nephropathy（DN），and investigate the importance of ratio of balance among them in DN．Methods Sixty Chinese patients with type 2 diabetes were enrolled．According to their UAER diabetic patients were divided into three groups randomly：20 patients with normoalbuminuric diabetic（DM1 group），22 with microalbuminuric diabetic（DM2 group）and 18 proteinuric diabetic（DM3 group）．A total of 22 health contros were selected（NC group）．Serum Ang-1，Ang-2，Tie2，VEGF levels were detected by ELISA．At the same time，related biochemical indicators were tested．Results ①The level of serum Ang-2，VEGF increased in DM1 compared with NC，and serum Ang-2，VEGF levels in DM2 and DM3 were much higher．There was statistical difference among four groups（P＜0．05）．②The level of serum Ang-1 increased in DM1 compared with NC，but serum Ang-1 levels in DM2 and DM3 were much lower．③There was no statistical significance in difference among the four groups．There was no statistical significance in differences of Tie2．④UAER had positive correlation with serum Ang-2，VEGF（r＝0.470，0.404，P＜0.01）．UAER had negative correlation with serum Ang-1（r＝－0.310，P＜0.05）．Ang-2 had positive correlation with serum VEGF，Tie2（r＝0.450，0.725，P＜0.01）．Ang-1 had positive correlation with serum Tie2（r＝0.571，P＜0.01）．Ang-1 had negative correlation with serum Ang-2，VEGF（r＝－0.497，－0.396，P＜0.01，P＜0.05）．⑤Line to UAER level as the dependent variable，multiple stepwise regression analysis showed that：Ang-1，Ang-2，VEGF，creatinine entered regression equation．They were independent correlation factors for UAER．Conclusion Serum Ang-1，Ang-2，Tie2 and VEGF levels are closely related with DN．They may participate in the development of DN and affect the process of DN．Detection of serum Ang／Tie2 and VEGF levels can be used as a reference index for the condition of DN．

Key wordsdiabetic nephropathy；angiopoietin；VEGF；Tie2；urinary albumin excretion rate

作者簡介：霍亞杰，女，碩士研究生；溫玉潔，女，教授，主任醫師，碩士生導師，責任作者，E-mail：wenyujie888＠qq．com

基金項目：廣西自然科學基金資助項目（編號：2011GXNSFA018238）作者單位：1桂林醫學院研究生學院，桂林 541001

文獻標志碼A

文章編號1000－1492（2015）04－0508－04

中圖分類號R 587．2