不同產地川芎主要有效成分含量比較

王 虎，李文兵，胡昌江，朱 軍

（1．四川新綠色藥業科技發展股份有限公司，四川 成都 611930； 2．成都中醫藥大學，四川 成都 611137）

不同產地川芎主要有效成分含量比較

王 虎1，李文兵1，胡昌江2，朱 軍1

（1．四川新綠色藥業科技發展股份有限公司，四川 成都 611930； 2．成都中醫藥大學，四川 成都 611137）

目的建立測定川芎主要有效成分含量的高效液相色譜（HPLC）法，比較不同產地川芎的質量，為川芎新品種選育提供依據。方法采用HPLC法對川芎主要有效成分藁本內酯和阿魏酸進行含量測定，確定最佳測定方法。結果不同產區川芎中有效成分含量有差異，四川道地產區彭州和都江堰總含量最高，其中都江堰產區川芎中藁本內酯平均含量最高。結論通過對川芎有效成分含量的測定，四川道地產區川芎質量最優。該測定方法能為川芎新品種選育優質的苓種提供科學的依據，并可為川芎的綜合開發利用提供優質原料。

川芎；高效液相色譜法；藁本內酯；阿魏酸；選育；質量評價

川芎為傘形科植物 Ligusticum chuanxiong Hort．藁本屬的干燥根莖，具有行氣活血、祛風止痛的功效，被古人譽為“血中之氣藥”。川芎栽培歷史悠久，主產于四川省，此外云南、甘肅、江蘇、江西等地亦產[1]。川芎中主要含有揮發油、生物堿、酚酸、有機酸等成分[2-3]。現代藥理學研究結果表明，阿魏酸和藁本內酯為川芎中起活性作用的有效成分，在高效液相色譜（HPLC）中易檢測，故建立阿魏酸和藁本內酯的含量測定方法[4-5]，對不同產地川芎進行含量測定和比較，以評價川芎的質量，可為川芎新品種育種選擇優質的苓種提供科學依據。

1 儀器與試藥

安捷倫 1200B型高效液相色譜儀（G1312B型二元泵，G1315C型DAD檢測器，ChemStation化學工作站）；BP211D型電子天平（德國Sartorius公司，d=0．1 mg／0．01 mg，max=210 g／80 g)；KQ5200DB型超聲波清洗器（昆山市儀器有限公司）；溫控水浴鍋。阿魏酸（批號為 110773-201312）、藁本內酯（批號為111737-201001）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院，曝光保存；甲醇（迪馬公司)為色譜純，水為重蒸水，冰醋酸等其他試劑均為分析純。川芎購自四川彭州、都江堰、江西（扶芎）、甘肅（西芎）、云南（云芎）等不同產地，經成都中醫藥大學胡昌江教授鑒定為傘形科植物 Ligusticum chuanxiong Hort．的干燥根莖。

2 方法與結果

2．1 川芎中阿魏酸含量測定[6]

2．1．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-1%的醋酸溶液（30∶70）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：321 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，川芎中阿魏酸與其他組分能達到基線分離。色譜見圖1。

圖1 阿魏酸的高效液相色譜圖

2．1．2 溶液制備

精密稱取阿魏酸對照品5．00 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解，作為母液，放置冰箱備用，再精密吸取10 mL至25 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，制成質量濃度20 μg／mL的對照品溶液。取川芎粉末（過4號篩）0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續濾液適量過0．45 μm濾膜，即得供試品溶液。

2．1．3方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品溶液4，6，8，10，12，14，16 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積值，重復操作2次，以進樣量(μg)為橫坐標(X)、峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=0．005 95 X+0．054 77，r=0．999 9（n=7）。結果表明，阿魏酸進樣量在0．08～0．32 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，重復進樣6次，測定阿魏酸峰面積。結果峰面積的 RSD為0．75%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：分別取對照品溶液和供試品溶液置棕色瓶中，密閉、室溫貯藏，于0，2，4，8，12，24 h時分別進樣2次，測定藁本內酯的峰面積。結果的 RSD分別為0．86%，1．05%（n=6），表明阿魏酸在該溶液中穩定性良好。

重復性試驗：取同一川芎樣品粉末6份，照2．1．2項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算阿魏酸的含量。結果的 RSD= 2．01%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知阿魏酸含量的川芎藥材粉末約0．25 g，6份，精密稱定，精密加入阿魏酸對照品適量，按2．1．2項下方法制備供試品溶液，測定含量并計算回收率。結果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗結果（n=6）

2．2 川芎中藁本內酯含量測定

2．2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水（70∶30）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：326 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，川芎中藁本內酯與其他組分能達到基線分離。色譜見圖2。

圖2 藁本內酯的高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

取藁本內酯對照品約62．50 mg，精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，加色譜甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，再精密量取1 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加色譜甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含藁本內酯100 μg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取川芎粉末（過4號篩）約0．5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密閉，搖勻，稱重，超聲處理30 min，用甲醇溶液補足減失質量，濾過，精密稱取續濾液2 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液，取續濾液適量過0．45 μm濾膜，備用。

2．2．3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品溶液，分別進樣4，8，10，12，16，20 μL，重復進樣2次，以進樣量(μg)為橫坐標(X)、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=0．008 93 X+0．003 85， r=0．999 9（n=6）。結果表明，藁本內酯進樣量在 0．4～2．0 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，重復進樣6次，測定藁本內酯峰面積。結果的 RSD為0．64%（n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:分別取對照品溶液和供試品溶液至棕色瓶中，密閉、室溫貯藏，于0，2，4，8，12，24 h時分別進樣2次，測定藁本內酯的峰面積。結果的 RSD分別為1．03%和0．92%（n=6），表明藁本內酯在該溶液中穩定性良好。

重復性試驗:取同一川芎樣品粉末6份，照2．2．2項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算藁本內酯的含量。結果的 RSD= 1．86%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知藁本內酯含量的川芎藥材粉末約0．25 g，6份，精密稱定，分別精密加入藁本內酯對照品適量，按2．2．2項下方法制成供試品溶液，測定含量并計算回收率。結果見表2。

表2 藁本內酯加樣回收試驗結果（n=6）

2．3 樣品含量測定

取不同產地的川芎藥材，依法制備供試品溶液并測定含量。結果見表3。可見，從總含量來看，四川＞江蘇＞甘肅 ＞云南；在四川產地的川芎中，都江堰產地川芎中藁本內酯含量大于彭州產地的川芎。四川適宜的氣候和生長環境為川芎質量提供了保證，故四川產地川芎產量大，暢銷國內外[7]。

表3 川芎中阿魏酸和藁本內酯含量測定結果（%）

3 討論

檢測波長選擇：通過全波段波長掃描，阿魏酸在321 nm波長處有最大吸收，藁本內酯在326 nm波長處有最大吸收。

提取方法選擇：阿魏酸的含量測定參照2010年版《中國藥典（一部）》方法，通過考察，70%甲醇回流可將川芎中阿魏酸提取完全。藁本內酯的提取方法中比較了甲醇超聲、回流、冷浸，甲醇超聲效率最高；比較了甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、95%乙醇提取溶劑，甲醇提取率最高；比較了15，30，45 min不同提取時間，30 min即可完全提取，故選擇文中的提取與測定方法。由于阿魏酸屬于酚酸類成分，藁本內酯屬于揮發油類成分，1種溶劑不可能將兩者提取完全，為了最大限度地提取，文中分開建立了其含量測定方法，結果準確可行。

流動相選擇：阿魏酸采用2010年版《中國藥典（一部）》流動相，效果好。而藁本內酯的流動相比較了乙腈-水（60∶40）、甲醇 -水（70∶30），后者出峰時間和峰形較好，且能與其他峰相分離，分離度大于1．5，故選擇甲醇-水（70∶30）為流動相。

藁本內酯在川芎中含量較高，可作為川芎質量的評價指標[8-9]，但其在室溫條件下穩定性較差，對光和熱較為敏感，應快速測定，并密封避光、低溫保存。通過對川芎有效成分含量測定發現，不同產地川芎含量有明顯差異，其中四川產地含量最高，應努力從源頭上保證川芎藥材質量[10]。彭州已建立了川芎最大的中藥材生產質量管理規范（GAP）種植基地，是開發使用川芎的主要源頭。本研究結果可為川芎新品種選育優質的苓種提供科學依據。

[1]蔣桂花，馬逾英，侯 嘉，等．川芎種質資源的調查收集與保存研究[J]．中草藥，2008，39(4):601-604．

[2]郝淑娟，張振學，田 洋，等．川芎化學成分研究[J]．中國現代中藥，2010，12(3):22-25．

[3]楊麗紅，謝秀瓊，萬 麗，等．川芎化學成分研究[J]．時珍國醫國藥，2007，18(7):1 576．

[4]張 村，李 麗，耿立冬，等．川芎藥材有效成分鑒別及其含量標準研究[J]．北京中醫藥大學學報，2005，28(2):66-69．

[5]劉 毅，劉素香，張鐵軍，等．HPLC法測定川芎中阿魏酸和藁本內酯[J]．藥物評價研究，2010，33（3）：210-212．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010:89，131．

[7]劉彩霞，廖夢霞，鄧天龍．川產道地藥材川芎的品種和質量[J]．中草藥，2004，35(10)：2．

[8]張 玲，劉友平，李惠勇，等．川芎化學成分分離鑒定與藁本內酯的含量測定[J]．中藥分析與鑒定，2010，21(15):1 381-1 383．

[9]晃真真，晃若冰．HPIC測定川芎藥材中藁本內酯的含量[J]．華西藥學雜志，2004，19(3):197-198．

[10]甘業梅，曾 玲．川芎藥材質量研究[J]．中國中醫藥信息雜志，2007，14（11）：48-49．

Comparison of the M ain Effective Contents of Ligusticum Wallichii from Different Regions

Wang Hu1,Li Wenbing1,Hu Changjiang2,Zhu Jun1
（1．Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development CO．,LTD．,Chengdu,Sichuan,China 611930; 2．Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan China 611137）

Objective To establish an HPLC method for the measurement of the main effective components ofLigusticum wallichii to compare the quality of the product from different regions,and to provide the basis for breeding new varieties．M ethods HPLC was used to assay the contents of ligustilide and ferulic acid in RC to determine the best measuring method．Results There were differences in the effective components ofLigusticum wallichii from different regions;products from Sichuan′s Pengzhou and Dujiangyan districts were of the highest quality．Conclusion Through the determination of the effective components ofLigusticum wallichii,product from Sichuan has the best quality．This method can to provide a scientific basis for producing high quality raw materials and the development and utilization of new varieties．

Ligusticum wallichii;HPLC;Z-ligustilide;ferulicacid;breeding;qualitative standard

R284.1；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0037-03

王虎（1985-），男，碩士研究生，研究方向為中藥炮制學，（電子信箱）893274765＠qq．com；胡昌江，男，教授，博士研究生導師，主要從事中藥炮制學的教學和科研工作，本文通訊作者，（電子信箱）hhccjj＠hotmail．com。

2015-05-13；

2015-07-09)

四川省科技支撐計劃突破性川產道地藥材新品種選育——川芎新品種選育及配套技術研究項目，項目編號：2011NZ0098-12-06；川芎整合式全產業鏈綜合開發研究項目，項目編號：2015SZ0031。