兒腎清丸質量標準研究

李 思，崔恩忠，唐安福，王 爭，湯 ，王曙東

(中國人民解放軍南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇 南京 210002)

兒腎清丸質量標準研究

李 思，崔恩忠，唐安福，王 爭，湯 ，王曙東

(中國人民解放軍南京軍區南京總醫院制劑科，江蘇 南京 210002)

目的建立兒腎清丸的質量控制標準。方法對方中當歸、川芎、赤芍3味藥材進行薄層色譜(TLC)法鑒別，同時采用高效液相色譜(HPLC)法對方中丹皮酚進行含量測定。結果TLC中色譜斑點清晰，專屬性強。丹皮酚質量濃度在7．75～124．00 g／mL范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為100．04%，RSD為1．73%。結論該方法簡便，重復性好，準確可靠，可用于兒腎清丸的質量控制。

兒腎清丸；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

兒腎清丸為我院院內制劑，由全軍腎臟病研究所研制，臨床應用多年。由當歸、赤芍、川芎、丹皮等10味中藥組方，具有活血化瘀、清熱涼血的功效，用于治療小兒急慢性腎炎及血尿等癥。該制劑所含成分復雜，為提高制劑質量標準，更好地發揮臨床療效，本試驗中通過對方中當歸、川芎、赤芍3味中藥材進行薄層色譜（TLC）法鑒別，同時采用高效液相色譜（HPLC）法對丹皮酚進行含量測定，進一步提升了質量控制標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測器；FA1104型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；KQ-500DE型超聲機（昆山市超聲儀器有限公司）；調溫電熱器(南通市通州申通電熱器廠)；HH-6型數顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；隔膜真空泵(天津市津騰實驗設備有限公司)。對照藥材當歸(批號為120927-201014)、川芎(批號為120918-201110)、赤芍(批號為121092-201003)均經王曙東主任藥師鑒定為正品；對照品芍藥苷(批號為 110736-201337)、丹皮酚（批號為110708-200506）均購自中國食品藥品檢定研究院；兒腎清丸（批號為140102，140731，141015，本院制劑科)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 TLC鑒別

當歸、川芎：取本品適量，研細，稱取4 g，加無水乙醇25 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。取當歸和川芎對照藥材各0．5 g，同法制成對照藥材溶液。另按處方比例，稱取除當歸和川芎以外的其余藥材，研碎，按制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述溶液各20 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾(圖1 A)。

赤芍：取當歸、赤芍鑒別項下的供試品溶液作為供試品溶液。取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。另按處方比例稱取除赤芍以外的其余藥材，研碎，按本品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，吸取上述溶液各20 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯（8∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘約5 min至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾(圖1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2．2 丹皮酚含量測定

2．2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Hedera Lichrospher C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水（65∶35）；流速:1．0 mL／min；檢測波長:274 nm，柱溫:35℃。在此條件下，色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

稱取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含124 μg的溶液，即得對照品溶液。取制劑粉末(過3號篩)約0．5 g，精密稱定，加入50%甲醇溶液35 mL，稱定質量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）60 min，冷卻至室溫，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按處方比例及生產工藝制備缺丹皮的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．2．3方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2．2．2項下3種溶液各10 μL，依法測定。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應保留時間處有同一色譜峰，而陰性無干擾。色譜圖見圖2。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液5 mL，至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋，定容，逐級稀釋，依次制成質量濃度為124，62，31，15．5，7．75 μg／mL系列對照品溶液，按擬訂色譜條件測定峰面積，以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得丹皮酚回歸方程 Y=42．836 X-8．233 3（r=1）。結果表明，丹皮酚質量濃度在7．75～124．00 μg／mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件測定。結果峰面積的 RSD為0．70%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液（批號為140102），分別于0，1，2，4，6，8 h時依法測定。結果丹皮酚峰面積的 RSD為0．71%（n=6），表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

重復性試驗:取同一批樣品（批號為140102）6份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果樣品中丹皮酚平均質量濃度為2．171 g／L，RSD為0．559%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品(批號為140102，含量為2．173 mg／g)，精密量取9份，每份0．5 g，精密稱定，分別加入3個量級的丹皮酚對照品，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

2．2．4 樣品含量測定

取 2批樣品（批號為 140102，140731），平行測定 3次。結果丹皮酚平均含量分別為2．173 mg／g和2．006 mg／g，RSD分別為0．32%和1．42%(n=3)。

表1 丹皮酚加樣回收試驗結果（n=9）

3 討論

當歸、川芎、赤芍、丹皮為方中君臣藥，主要起活血化瘀、清熱涼血功效。其中當歸含揮發油及水溶性成分，川芎含揮發油及生物堿類、酚類等，兩者成分非常相似[1-2]，故TLC法選擇兩者共有成分進行薄層鑒別[3]。

采用HPLC法測定復方中丹皮酚含量的報道比較多見[3-4]，提取溶劑主要是甲醇-水或純甲醇體系。參考2010年版《中國藥典(一部)》[5]及文獻[6-7]，超聲提取時考察了50%甲醇、甲醇對丹皮酚的提取效果，結果50%甲醇提取效果比較好，故選擇前者。參考2010年版《中國藥典(一部)》[5]及文獻[8-9]，比較了40，70，100倍液料比的提取效果，結果液料比選擇70倍50%甲醇可以完全提取0．5 g兒腎清丸粉末中的丹皮酚。對超聲處理30，45，60 min進行比較，發現超聲60 min時提取得丹皮酚最充分，因此選擇60 min。

兒腎清丸所含成分非常復雜，前期試驗中對赤芍中芍藥苷的含量進行了考察，結果陰性樣品中存在干擾，后對丹參中的丹酚酸B含量進行了考察，但因處方中丹參量較少，結果含量太低，不適合作為質量控制的指標。故暫選擇丹皮酚作為指標進行檢測，結果表明該方法重復性、精密度均較好[10-11]，適用于兒腎清丸的質量控制。

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Quality Standard of Ershenqing Pills

Li Si,Cui Enzhong,Tang Anfu,Wang Zheng,Tang Hao,Wang Shudong
(Department of Pharmaceutical Preparation,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Area Command,Nanjing,Jiangsu,China 210002)

Objective To establish the quality standard of Ershenqing Pills．M ethods The TLC method was used for the qualitative identification ofthe Radix AngelicaeSinensis,Rhizoma Chanxiong,Radix PaeoniaeRubra,and the paeonolwasdetermined by HPLC．Results TLC spots were clear,with strong specificity．The linear relationship of specnuezhenide content was good in the range of 7．75～124．00 μg／mL,the average recovery was 100．04% (RSD=1．73% )．Conclusion The method is simple,accurate and reliable,with good reproducibility,and it can be used for the quality control of Ershenqing Pills．

Ershenqing Pills;quality standard;TLC;HPLC

R284.1；R260.0

A

1006-4931(2015)21-0111-03

李思，女，大學本科，藥師，主要從事中藥制劑質量檢驗，（電話）025-80860166；湯氵昊，男，碩士研究生，主管藥師，研究方向為中藥制劑工藝，本文通訊作者，（電子信箱）tang_hao0518＠sina．com。

2014-10-27；

2015-03-03)

全軍醫療機構制劑標準提高科研專項課題重點項目，項目編號：13ZJZ13。