高效液相色譜法同時測定鎮痛凝膠劑中氯胺酮和咪唑安定含量

丁進峰，曹東航，曹海華

（浙江省臺州醫院，浙江 臺州 317000）

高效液相色譜法同時測定鎮痛凝膠劑中氯胺酮和咪唑安定含量

丁進峰，曹東航，曹海華

（浙江省臺州醫院，浙江 臺州 317000）

目的建立同時測定鎮痛凝膠劑中氯胺酮和咪唑安定含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法采用RP-HPLC外標法，色譜柱為Hypersil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 g），流動相為乙腈-甲醇-0．01%三乙胺（33∶45∶22，V∶V∶V），流速為0．8 mL／min，柱溫為25℃，檢測波長為220 nm。結果氯胺酮和咪唑安定的進樣質量濃度線性范圍分別為24．32～243．2 g／mL（r=0．999 2）和20．28～202．8 g／mL（r=0．999 6），日內及日間精密度的 RSD均小于10%，平均回收率分別為97．78%和100．49%。結論該方法快捷方便、結果可靠，可作為鎮痛凝膠劑的質量控制方法。

高效液相色譜法；氯胺酮；咪唑安定；含量測定

氯胺酮為N-甲基-D-天門冬氨酸（NMDA）受體拮抗劑，可選擇性地阻斷痛覺傳遞而不抑制中樞神經系統，在手術麻醉及鎮痛方面得到了廣泛應用，尤其在兒科手術中發揮了重要作用，但它也具有消除半衰期短、消除快的缺點[1-2]。咪唑安定是目前應用最廣泛的苯二氮 類藥，具有抗焦慮、催眠、抗驚厥、肌肉松弛和順行性遺忘等作用，在臨床麻醉中應用較廣[3]。由于消除半衰期短，咪唑安定用于重癥監護病房(ICU)鎮靜或術后鎮痛需多次給藥，故多采取微量注射泵持續輸注方式。微量注射泵存在藥物外滲致靜脈炎和靜脈硬化、管道阻塞、注射泵故障等弊端，且24 h需更換注射器和延長管[4]。為克服藥物消除半衰期短、體內消除快的缺點，延長藥物作用時間及方便給藥，目前開發了以丙烯酸酯醫用膠為基質，以乙醇及丙二醇為增溶劑，氮酮為促滲劑，主藥為氯胺酮和咪唑安定的透皮凝膠劑，用于手術前后的麻醉鎮痛。本試驗中建立了同時測定透皮凝膠劑中氯胺酮和咪唑安定含量的高效液相色譜(HPLC)法，1次進樣能在20 min內完成分析，適應醫院制劑快速分析的需要。

1 儀器與試藥

LC 1200型高效液相色譜儀，包括四元泵、DAD檢測器、在線脫氣機、LC1200中文工作站（安捷倫科技有限公司）；AE204型十萬分之一分析天平（梅特勒托利多公司）；MILLI-Q型超純水制備儀（密理博科技公司）。鹽酸氯胺酮對照品（批號為 013284-012）、咪唑安定對照品（批號為M01236827）均由上海瑞齊有限公司提供；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-甲醇-0．01%三乙胺（33∶45∶22，V∶V∶V）；流速：0．8 mL／min，柱溫：25℃，檢測波長：220 nm，進樣量：20 μL。在此色譜條件下，色譜圖見圖1。氯胺酮和咪唑安定的理論板數分別為8 272和7 568。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

精密稱取鹽酸氯胺酮對照品0．12 g、咪唑安定對照品0．10 g，加適量甲醇溶解，置100 mL棕色容量瓶，加甲醇定容到刻度，即得混合對照品貯備液。精密稱取鎮痛凝膠劑（自制，主藥為處方量氯胺酮和咪唑安定），加甲醇溶解，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方配制不加藥物成分的空白溶劑，即得空白對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察：精密量取對照品貯備液0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得系列質量濃度的對照品溶液。分別取各質量濃度對照品溶液20 μL，進樣測定，記錄峰面積積分值。分別以對照品溶液進樣質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸，得氯胺酮和咪唑安定的回歸方程分別為 Y=3．628 X+ 152．636（r=0．999 2）和 Y=28．365 X-7．128（r=0．999 6），線性范圍分別為24．32～243．2 μg／mL，20．28～202．8 μg／mL。

精密度試驗：精密配制對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣5次，每次20 μL，以峰面積計算 RSD。結果見表1。

表1 精密度試驗結果（n=5）

重復性試驗：取同一批樣品，依法制備供試品溶液并進樣測定，計算含量。結果氯胺酮和咪唑安定含量的 RSD分別為1．4%和1．6%（n=6），表明該方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4 h進樣測定氯胺酮和咪唑安定的峰面積。結果氯胺酮和咪唑安定的 RSD分別為1．5%和1．7%（n=4），表明供試品溶液在4 h內穩定。

回收率試驗：取同一批空白樣品9份，按處方量的110%，100%，85%分別精密加入對照品溶液，配制成低、中、高3種質量濃度的溶液各3份。依法進樣測定含量，計算回收率。結果見表2。

表2 回收率試驗結果（n=3）

2．4 樣品含量測定

取3個批號的樣品，依法配制供試品溶液，進樣測定峰面積，用外標法測定含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（%，n=3）

3 討論

氯胺酮的檢測方法有多種，如氣相色譜法、液相色譜法及液質聯用法[5-7]。咪唑安定的檢測方法文獻報道也較多[8-9]，2010年版《中國藥典（二部）》中咪唑安定的檢測方法為高效液相色譜法[10]。但同時測定這2種成分的方法尚未見報道。本試驗中對2010年版《中國藥典(二部)》中的色譜條件略作調整[1]，將流動相中控制pH的磷酸鹽改為三乙胺，避免了檢測過程中鹽類物質析出，影響檢測結果和儀器的使用壽命。在該條件下，氯胺酮和咪唑安定能有效分離，且分離度高、色譜峰形好、分離時間短，能同時完成制劑中2種藥物成分的含量檢測。

對本制劑藥物成分作紫外波長掃描檢測發現，氯胺酮和咪唑安定的最大吸收波長分別為233 nm和220 nm。制劑中咪唑安定含量低，氯胺酮含量高，為提高檢測靈敏度，應選擇含量低的藥物最大吸收波長作檢測波長，故最終選擇220 nm作為檢測波長。結果表明，在該波長條件下各成分峰高比例合適，線性關系良好。

在HPLC法檢測過程中，采用四元泵在線混合流動相，流速為1．0 mL／min時泵壓力過高，且壓力不穩定。本研究中將流動相按比例預先混合均勻，調低流速至0．8 mL／min，溫度控制在25℃，檢測時基線平穩，泵壓力保持恒定。

本研究中所用主藥為氯胺酮和咪唑安定的經皮給藥凝膠劑，為超術前和術后鎮痛的研究及麻醉藥物新劑型的研發提供了參考。

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[3]Wang X，Wayne YW Lee，Zhou XL，et al．A pharmacodynamic pharma

cokinetic（PD-PK）study on the effects of Danshen（Salvia miltiorrhiza）on midazolam，a model CYP3A probe substrate in the rat[J]．Phytomedicine，2010，17（11）：876-883．

[4]盧小麗，廖 燕．微量注射泵使用中的安全隱患及對策[J]．當代護士，2012（7）：3-6．

[5]曹殿青，趙麗斌，呂應年，等．高效液相色譜法測定兔血漿中鹽酸氯胺酮質量濃度[J]．中國藥業，2012，21（15）：30-31．

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[8]趙 麗，閻克里，張勤功，等．HPLC法測定人體內咪達唑侖血藥濃度[J]．中國現代藥物應用，2009，3（5）：7-9．

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[10]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：787．

Simultaneous Determination of Ketamine and Midazolam in Zhengtong Gels by HPLC

Ding Jinfeng,Cao Donghang,Cao Haihua
(Taizhou Hospital,Taizhou,Zhejiang,China 317000)

Objective To establish an HPLC method to simultaneously determine ketamine and midazolam in Zhengtong Gels．Methods The separation was carried out on a Hypersil C18column(250 mm×4．6 mm，5 μm)with a mobile phase of acetonitrile-methanol-0．01% triethylamine（33∶45∶22,V∶V∶V）．The detection wavelength was 220 nm,the flow rate was 0．8 mL／min and the column temperature was 25℃．Results The linear range of ketamine and midazolam were 24．32-243．2 μg／mL(r=0．999 2),20．28-202．8 μg／mL(r=0．999 6),respectively．The inter-day and intra-day precision（RSD）were both less than 10%．The average recovery (n=9)were 97．78% and 100．49%,respectively．Conclusion The method is simple,rapid,sensitive and reproducible．

HPLC;ketamine;midazolam;content determination

R927.2；R971+.1

A

1006-4931(2015)21-0119-03

2015-03-30；

2015-06-14)