高效液相色譜法測定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量

楊帆

（重慶市食品藥品檢驗所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

高效液相色譜法測定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量

楊帆

（重慶市食品藥品檢驗所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

目的 建立測定五黃養(yǎng)陰顆粒中黃芩苷含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法 色譜柱為Waters Symmetry Shield RP18柱(150 mm× 3.9 mm，5 m)，流動相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58），檢測波長為280 nm，流速為1.5 mL／min，柱溫30℃。結(jié)果 黃芩苷進(jìn)樣量在0.10～2.00 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)；平均回收率為98.70%，RSD=1.40% （n=6）。結(jié)論 該法簡便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好，可用于五黃養(yǎng)陰顆粒的質(zhì)量控制。

五黃養(yǎng)陰顆粒；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測定

五黃養(yǎng)陰顆粒為黃連、黃芩等藥味組成的復(fù)方制劑，具有燥濕化痰、益氣養(yǎng)陰的功效，用于消渴病屬痰濕內(nèi)滯、氣陰兩虛證，證見口渴喜飲，多食善饑，尿頻尿多，頭身困重，嘔惡痰涎，倦怠乏力，氣短懶言，自汗盜汗，心悸失眠，形體肥胖，咽燥口干，心煩畏熱，溲赤便秘等。方中黃芩清熱燥濕，與療效具有直接的關(guān)系，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對其進(jìn)行含量控制。筆者參考文獻(xiàn)[1-3]，建立了高效液相色譜（HPLC）法，用于測定方中黃芩所含有效成分黃芩苷的含量。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國）；HP-Chemstation色譜工作站。黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110715-201117，含量為91.7%）；五黃養(yǎng)陰顆粒（重慶東田藥業(yè)股份有限公司，批號為130302，130504，130702）；甲醇為色譜醇，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry Shield RP18柱（150 mm×3.9 mm，5 μm）；流動相：甲醇-用磷酸調(diào) pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58）；流速：1.5 mL／min；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品0.010 91 g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取樣品適量，研細(xì)，精密稱取0.2 g，置50 mL量瓶中，加70%乙醇40 mL，密塞，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺黃芩的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法制取陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：取2.2項下3種溶液10 μL，注入液相色譜儀，依法進(jìn)樣。結(jié)果陰性對照品溶液色譜與黃芩苷對照品溶液及供試品溶液色譜峰相應(yīng)位置無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照品對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取對照品溶液，分別進(jìn)樣1，5，10，15，20 μL，以進(jìn)樣量 C(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積 A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程 Y=3 456 X-40.28，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.10～2.00 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.9%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同批樣品（批號為130302），依法制備供試品溶液，測定黃芩苷的含量。結(jié)果的 RSD為1.03%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取新制備的同一供試品溶液，分別于放置0，2，4，8，12 h時進(jìn)樣10 μL，測定黃芩苷峰面積。結(jié)果的 RSD=1.08% （n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已測定含量的同批樣品（批號為130302）6份各0.1 g，分置50 mL容量瓶中，分別精密加入黃芩苷對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法操作，測定黃芩苷量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取樣品適量，依法測定。結(jié)果批號為130302，130504，130702的樣品中黃芩苷含量分別為16.79，17.32，16.51 mg／g。

3 討論

參照2010年版《中國藥典（一部）》黃芩藥材黃芩苷含量測定項下方法，采用70%乙醇作為提取溶劑，檢測波長為280 nm。試驗中分別對超聲提取時間20，30，40 min進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲處理30 min能將樣品中黃芩苷提取完全。

在流動相選擇試驗中，考察了黃芩苷測定常用的流動相：甲醇 -水-磷酸（47∶53∶0.2）[4-7]、甲醇-用磷酸調(diào) pH至2.7的0.05mol／L磷酸二氫鈉溶液(42∶58），結(jié)果采用后者為流動相時，供試品溶液中黃芩苷色譜峰的相對保留時間更穩(wěn)定。

綜上，本法操作簡便，黃芩苷分離效果較好，具有良好的重復(fù)性和回收率，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282，402-403.

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[3]熊澤文，陳 云，李峻峰，等.五黃養(yǎng)陰顆粒治療2型糖尿病合并脂代謝異常臨床研究[J].中國藥物經(jīng)濟學(xué)，2014（4）：47-49.

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Determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC

Yang Fan
(Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 401121)

Objective To establish a method for the determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC.Methods Waters SymmetryShield RP18column(150 mm×3.9 mm，5 m)was used with the mobile phase of methnol-0.05% sodium dihydrogen phosphate solution(pH=2.7，42∶58)，The flow rate was 1.5 mL／min,the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 280 nm. Results Baicalin showed good linear relationship at the range 0.10～2.00 g(r=0.999 9).The average recovery was 98.70% （RSD=1.40%，n=6）.Conclusion The method is convenient，quick，accurate，repeatable and is suitable for the quality control of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules.

Wuhuangyangyin Granules;baicalin;HPLC;determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)17-0052-02

楊帆（1982-），女，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向為藥物分析、藥品實驗室質(zhì)量控制，（電話）023-86072723（電子信箱）18695847＠qq.com。

2015-01-27；

2015-03-24)