紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量

王慶芬，倪曉霞，劉曉玲，高惠真

（中國人民解放軍第一七五醫(yī)院·廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院制劑科，福建 漳州 363000）

紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量

王慶芬，倪曉霞，劉曉玲，高惠真

（中國人民解放軍第一七五醫(yī)院·廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院制劑科，福建 漳州 363000）

目的 建立測定枇芩顆粒劑中總黃酮含量的紫外分光光度法。方法 以蘆丁為對照品，采用70%的乙醇溶液加熱回流提取總黃酮，于509 nm波長處測定總黃酮含量。結(jié)果 蘆丁質(zhì)量濃度在12.72～76.32 mg/L范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=0.019 C+0.010 7（r=0.999 5）。結(jié)論 該法操作簡便、結(jié)果可靠，可為枇芩顆粒劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

枇芩顆粒劑；紫外分光光度法；總黃酮；含量

枇芩顆粒劑是我院自制中藥復(fù)方制劑，由枇杷葉、黃芩、白花 蛇舌草等13味中藥組方，君藥黃芩中的黃芩苷、黃芩素[1]，白花蛇舌草中的山柰酚、槲皮素等均為黃酮類化合物[2]。黃酮類化合物具有抗氧化、抗菌、抗炎、解熱等作用。現(xiàn)代藥理研究表明，白花蛇舌草含有的總黃酮具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、增強(qiáng)免疫力等作用，是一類極具開發(fā)價(jià)值的天然活性物質(zhì)[3]。茵陳中的色原酮類、黃酮類、香豆酸及揮發(fā)油等具清熱利濕、利膽退黃之功效，在體外對金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用，對痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、腦膜炎雙球菌等有不同程度的抑制作用[4]。因此，黃酮類化合物一直備受關(guān)注。本試驗(yàn)中建立了紫外分光光度法用于測定枇芩顆粒劑中總黃酮的含量，為其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-2550微機(jī)型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；AUX220型電子分析天平（日本島津公司）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市江南儀器廠）。蘆丁對照品（批號為100080-200707，中國食品藥品檢定研究院）；95%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果[5]

2.1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品 0.015 9 g，加65%乙醇溶解（少量多次），定容至50 mL容量瓶中，搖勻，得對照品溶液（蘆丁含量為0.318 g/L）[6]。精密稱取枇芩顆粒劑5.0 g，以適量70%乙醇回流提取2 h，冷卻過濾，收集濾液，定容于100 mL容量瓶中[7]，得供試品溶液。

2.2 測定波長選擇

取適量的蘆丁對照品與供試品溶液，分別置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，再加入5%亞硝酸鈉溶液0.8 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液0.8 mL，搖勻，放置8 min，加入4%氫氧化鈉溶液8.0 mL，用蒸餾水定容至刻度，搖勻放置15 min顯色，以65%乙醇為空白，立即測定，在300～600 nm波長范圍內(nèi)掃描[8]。結(jié)果對照品溶液與供試品溶液在509 nm均有最大吸收，故選擇509 nm為測定波長。色譜圖見圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取蘆丁對照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.8 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液0.8 mL，搖勻，放置8 min，加入4%氫氧化鈉溶液8.0 mL，用蒸餾水定容至刻度，搖勻放置15 mim，以相應(yīng)試劑為空白，在509 nm波長處測定吸光度（A）[9]。以 A為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)，得回歸方程 A=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在12.72～76.32 mg/L范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取對照品溶液 1 mL，置 25 mL容量瓶中，依法操作，并以相應(yīng)試劑為空白，連續(xù)5次。結(jié)果測得質(zhì)量濃度分別為31.571，31.668，31.713，31.696，31.997 mg/L，RSD為0.502%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液(批號為140220)，按擬訂方法分別于0，10，20，30，40，50，60 min時(shí)測定吸光度。結(jié)果分別為31.835，31.537，31.185，31.712，31.407，31.066，31.918 mg/L，RSD為1.082%（n=7），表明供試品溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品（批號為140220）5份，每份5.0 g，按供試品溶液制備方法平行制備，依法測定。結(jié)果分別為31.536，31.725，31.085，31.642，31.545 mg/L，RSD為 0.79%（n=5），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的蘆丁對照品溶液1 mL (0.318 g/L)，分別加入9份各0.5 mL已知含量的供試品溶液中(批號為140220)，按供試品溶液制備方法制備，依法操作。結(jié)果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

精密稱取3批樣品各5 g，依法制備供試品溶液并測定吸光度，計(jì)算總黃酮的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

枇芩顆粒劑處方涉及中藥材組分眾多，有效成分復(fù)雜。黃酮類藥是該制劑的主要有效成分之一，且處方中多味中藥含有黃酮成分，因此需對總黃酮進(jìn)行質(zhì)量控制，確保藥品的質(zhì)量。

本試驗(yàn)中采用紫外分光光度法測定枇芩顆粒劑中總黃酮的含量，采用比色法，即向供試品溶液中加入顯色劑后測定吸光度以測定其含量[10-11]。黃酮類化合物分子中具有3-羥基、5-羥基或鄰二酚羥基，易與金屬鹽類如鋁鹽、鋯鹽、鎂鹽等反應(yīng)，生成有色金屬絡(luò)合物，這些絡(luò)合物作用在光譜上能產(chǎn)生明顯變化，如吸收峰紅移，常用金屬試劑為硝酸鋁溶液。蘆丁為黃酮苷，能與鋁離子生成黃色配合物，在亞硝酸鈉堿性溶液中呈紅色，在509 nm波長處有最大吸收，故本試驗(yàn)中試劑為亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉溶液[12]。以蘆丁為對照品，測出總黃酮含量較穩(wěn)定，此法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，可為枇芩顆粒劑的質(zhì)量控制提供參考。

本試驗(yàn)中，枇芩顆粒劑的總黃酮溶液提取采用70%的乙醇溶液回流2 h再過濾，試驗(yàn)過程時(shí)曾與等處方枇芩溶液等量時(shí)測得的總黃酮收得率無明顯差別，表明此方法提取完全。

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Determination of Total Flavonoids from Piqin Granules by UV Spectrophotometry

Wang Qingfen,Ni Xiaoxia,Liu Xiaoling,Gao Huizhen (Department of Pharmacy,175 Hospital of PLA/Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University,Zhangzhou,Fujian,China 363000)

Objective To establish a UV spectrophotometry method for determining the content of total flavonoids from Piqin Granules.M ethods With rutin as the reference substance,total flavonoids were extracted from Piqin Granules by the 70% ethanol solution heating reflux extraction.Then,the content of total flavonoids was detected at 509 nm by UV Spectrophotometry.Results The rutin mass concentration in the range of 12.72-76.32 mg/L showed the good linear relationship with absorbancy.The regression equation wasA=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5).Conclusion This method is simple to operate and reliable in the detection results,and can provide the basis for the quality control of Piqin Granules.

Piqin Granules;UV Spectrophotometry;total flavonoids;content

王慶芬，大學(xué)本科，主管藥師，主要從事醫(yī)院制劑檢驗(yàn)，（電子信箱）wqf0596＠163.com。

2014-10-28)

醫(yī)院青年苗圃基金資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號:13Y016。

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0031-03