犬用鹽酸特比萘芬片劑矯味處方及含量測定研究

楊柳，董博宇，白潔，李鵬躍，趙夢迪，譚寧，陸洋，杜守穎

(北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102)

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犬用鹽酸特比萘芬片劑矯味處方及含量測定研究

楊柳，董博宇，白潔，李鵬躍，趙夢迪，譚寧，陸洋*，杜守穎*

(北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102)

為了對犬用鹽酸特比萘芬片劑進行矯味處方篩選并對鹽酸特比萘芬進行含量測定，試驗以片劑成型性為指標優選出含5%純天然雞粉、3%雞粉香精及5%味精的片劑矯味處方，并分別按照處方對所制片劑進行重量差異、崩解時限考察，再以比格犬對各處方片劑偏好篩選出最優矯味劑為純天然雞粉，采用HPLC法測定該矯味處方鹽酸特比萘芬含量。鹽酸特比萘芬回歸曲線方程為y=2.652×107x- 2.418×104(r=0.9998)，在0.0201～0.4026 mg/mL范圍線性關系良好，平均回收率為97.97%，RSD=0.94(n=6)。對三批片劑進行含量測定，含量在99.17%～101.24%之間，含量均勻度A+1.8S<15。因此所篩選的矯味劑處方工藝可行，含量測定方法簡便、符合生產要求，純天然雞粉作為矯味劑既可以迎合犬類的偏愛又不影響片劑的質量檢查。

犬用片劑；矯味劑；鹽酸特比萘芬；含量測定

鹽酸特比萘芬片是由鹽酸特比萘芬加入適量輔料制成供犬用的片劑。鹽酸特比萘芬是一種新型的丙烯胺類抗真菌藥，具有廣譜抗真菌活性，抗菌作用強，并且很少產生耐藥性，為國家二類抗真菌新藥[1]。可廣泛的應用于畜禽特別是犬貓真菌病的治療。但由于犬的嗅覺很靈敏，服用片劑的順應性差,主人通常需要將藥物與食物混合或者其他的方式誘導小動物服藥，這樣不僅影響藥物的吸收與利用，而且也對主人造成一定的困擾。因此有必要對原有的鹽酸特比萘芬處方進行矯味優化，改善藥物的氣味，從而誘導犬類主動服藥，提高犬類服藥的順應性。試驗選用3種安全可靠的矯味劑(純天然雞粉、雞粉香精以及味精)進行矯味效果的考察，篩選出適宜的矯味劑及用量，并對所制備的鹽酸特比萘芬片進行重量差異、崩解時限檢查、含量及含量均勻度的測定。

1 材料

1.1 儀器 ZP10旋轉式壓片機(上海信源制藥機械有限公司)；崩解儀(ZBS-6G天津大學無線電廠)；HC-97硬度測定儀(Kraemer)；LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；BSA224S型電子天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司)；DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥品 鹽酸特比萘芬原料藥(濟南明鑫制藥股份有限公司，批號13125510)；鹽酸特比萘芬對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號100563-201402)；純天然雞粉，市售；雞粉香精，市售；味精，市售；純凈水(杭州娃哈哈集團)；甲醇(fisher，色譜純)；四氫呋喃(fisher，色譜純)；乙腈(fisher，色譜純)；磷酸(北京化工廠，色譜純)；四甲基氫氧化銨(國藥集團化學試劑有限公司)

1.3 實驗動物 比格犬，6只，10～15 kg, 年齡3～5歲，由中國農業大學動物房提供。

2 方法與結果

2.1 鹽酸特比萘酚矯味處方研究

2.1.1 未經矯味的片劑的制備 參照文獻方法[2-3]，鹽酸特比萘芬、淀粉、糊精適量，共制成100片。按處方量將鹽酸特比萘芬、淀粉、糊精進行混合，并過60目篩混合均勻，加入黏合劑制成軟材，用16目篩制粒，所得顆粒置于65℃鼓風烘箱中干燥，然后用18目篩整粒。壓片，干燥貯藏。

2.1.2 添加矯味劑的處方設計 按照未經矯味的處方的輔料比例，相應的減少淀粉和糊精的量，分別加入純天然雞粉、雞粉香精及味精三種矯味劑。矯味劑的用量參考《雞精調味料》國家行業標準、藥用輔料常用用量及實驗研究[4]進行設計，以片劑的可壓性作為評價指標，考察不同比例的矯味劑對壓片成型的影響，結合生產成本考慮，初步篩選出處方3、6、7進行質量檢查,結果見表1。

表1 處方中各矯味劑用量的考察結果

2.1.3 質量檢查

2.1.3.1 性狀檢查 參照文獻方法[5]，按照2.1.1制備工藝，根據處方3、6、7制備片劑，觀察片劑表面光潔，色澤均勻。

2.1.3.2 重量差異 隨機抽取20片，精密稱定總重量，求得平均片重后，再精密稱定各個片的重量。三個處方(處方3、6、7)平均片重分別是0.606 g、0.604 g、0.603 g，均符合中國獸藥典規定。

2.1.3.3 崩解時限 在每個處方中，隨機抽取6片，采用升降式崩解儀進行檢查，檢查三次。三個處方片劑的平均崩解時限分別是125 s，106 s，112 s。均符合中國獸藥典規定。

2.1.4 比格犬對矯味效果評價 經2.1.2項下初步篩選出處方3、6、7，分別將三個處方的鹽酸特比萘芬片喂給比格犬，觀察，以比格犬服藥的順應性為評價指標，試驗發現比格犬對處方3最為偏愛。結果見表2。

表2 比格犬對矯味效果評價

2.2 鹽酸特比萘芬片劑含量測定

2.2.1 色譜條件 參照文獻方法[6-8]，色譜柱：Merck KGaA Hibar-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-四氫呋喃-四甲基氫氧化銨緩沖液(取25%四甲基氫氧化銨5.8 mL，加水800 mL，用0.7 mol/L磷酸溶液調pH值至7.8，加水稀釋至1000 mL)(60∶20∶20)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：280 nm。

2.2.2 對照品溶液的制備 按照所需濃度精密稱取鹽酸特比萘芬對照品，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，微孔濾膜濾過，取續濾液，作為對鹽酸特比萘芬對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 將不同批次樣品研磨，精密稱取約0.015 g(相當于鹽酸特比萘酚約2.5 mg)，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.2.4 線性關系考察 按照2.2.2項下方法，配制濃度為0.4026 mg/mL的鹽酸特比萘芬對照品溶液。精密量取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置10 mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度，配制濃度分別為0.0201、0.0403、0.0805、0.1610、0.2416、0.3221、0.4026 mg/mL的對照品溶液。取不同濃度對照品溶液，按2.2.1項下方法測定，以鹽酸特比萘芬吸收峰面積為縱坐標(y)，進樣濃度(x，mg/mL)為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，y=2.652×107x- 2.418×104，r=0.9998)表明鹽酸特比萘芬在0.0201～0.4026mg/mL的濃度范圍內線性關系良好。

2.2.5 重復性考察 按照2.2.3項下方法，配制成濃度為0.100mg/mL供試品溶液，6份，按2.2.1項下方法測定，樣品中鹽酸特比萘芬平均含量為0.095mg/mL，RSD=1.18%。

2.2.6 精密度考察 按照2.2.2項下的方法，配制濃度為0.098 mg/mL的對照品溶液，按2.2.1項下方法測定，日內重復進樣6次，計算峰面積的RSD=0.13%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性考察 按照2.2.3項下的方法，配制成濃度為0.100 mg/mL供試品溶液，按2.2.1項下方法測定，樣品中鹽酸特比萘芬平均含量為0.095 mg/mL，RSD=1.18%。

2.2.8 加樣回收率考察 按照2.2.2項下方法，配制0.25 mg/mL的鹽酸特比萘芬對照品溶液，從中精密吸取10 mL共6份，分別置50 mL量瓶中，再取鹽酸特比萘芬樣品6份，每份約0.015 g，精密稱定，分別置上述量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，按2.2.1項下方法測定，回收率計算結果見表3。

2.2.9 色譜圖 鹽酸特比萘芬陰性對照溶液(A)、對照品溶液(B)及樣品處理液(C)的色譜圖見圖1，鹽酸特比萘芬的保留時間為12.4 min左右，理論塔板數為13081。陰性對照品為按照鹽酸特比萘芬片劑處方，不添加鹽酸特比萘芬藥物而制備。

A:鹽酸特比萘芬陰性對照溶液; B:鹽酸特比萘芬對照品溶液; C:鹽酸特比萘芬樣品處理液;1.鹽酸特比萘芬峰圖1 鹽酸特比萘芬HPLC色譜圖

2.2.10 樣品測定 三批樣品，每批樣品取10片，按2.2.3項下制備鹽酸特比萘芬供試品溶液，按2.2.1項下方法測定，計算樣品相當于標示量的百分含量及SD值、含量均勻度。三批樣品的含量分別是99.17%、99.70%、101.24%；含量均勻度(計算A+1.80S)分別為2.65、4.00、4.60，均符合中國獸藥典的規定。

3 討論與小結

根據壓片成型性與成本的考慮，試驗初步篩選處方3、處方6、處方7進行重量差異和崩解時限檢查，均符合中國獸藥典規定。結果可知，比格犬對處方3最為偏好，證明純天然雞粉的矯味效果明顯優于雞粉香精和味精。因此，篩選出最終處方為處方3，即5%純天然雞粉。通過對三批片劑的含量測定，鹽酸特比萘芬的含量符合要求，含量均勻。

在HPLC色譜圖中，鹽酸特比萘芬能夠很好的分離，陰性對照無干擾，輔料對含量的測定無干擾。

犬類具有高度發達的嗅覺，而味覺相對較弱。與人用藥矯味劑的研究[9]相比，獸用矯味劑不僅要考慮口感問題，應該更著重研究氣味對犬類服藥順應性的影響。因此本試驗在篩選矯味劑時，通過比格犬試驗，更簡單直觀的篩選出犬類更為偏愛的矯味劑并確定了合適的用量, 為獸藥矯味劑的應用與選擇方面提供一定的參考價值。此外，純天然雞粉具有營養性和便利性等特點，在市場上已經被廣泛應用和認可，發展前景良好[10]。純天然雞粉作為獸藥片劑的矯味劑較為安全可靠，同時研究表明，所選矯味劑幾乎不影響鹽酸特比萘芬片劑的質量檢查，因此矯味后的片劑既提高了犬類的服藥順應性又保證了療效。

[1] 吳云飛.鹽酸特比萘芬的安全性和抗真菌藥物的敏感性及臨床療效試驗[D].南京農業大學,2012.

[2] 宮凱敏,潘旭,劉軍.消炎止帶合劑矯味工藝的研究[J].內蒙古中醫藥,2014,(5):61.

[3] 吳飛,王優杰,張繼全,等.康兒靈顆粒的矯味研究[J].中國新藥雜志,2014,06:701-705.

[4] F.吉姆伯托,L.佩羅特.可口的口服獸藥組合物[P].法國：CN104519868A,2015-04-15.

[5] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2010版(一部)[S].北京：中國農業出版社,附錄111.

[6] 金錄勝.復方伊維菌素片含量測定方法的探討.中國獸藥雜志[J].2003,37(12): 30-31,27.

[7] 寇婉青,俞娟,開偉華.高效液相色譜法測定鹽酸特比萘芬乳膏含量[J].安徽中醫學院學報,2009,03:54-55.

[8] 李曉波,范薇,李迎杰.HPLC法測定鹽酸特比萘芬乳膏的含量[J].中國藥師,2010,07:993-995.

[9] 唐建華.新型矯味劑在藥物口服制劑中的應用[J].中國藥業,2007,18:59-60.

[10]吳廣泉,楊巧萍,王穎.雞精(粉)的現狀及發展趨勢[J].農產品加工(學刊),2010,08:89-91.

(編輯：陳希)

Taste-modifying and Determined the Content of Hydrochloride Terbinafine Tablets

YANG Liu, DONG Bo-yu,BAI Jie,LI Peng-yue,ZHAO Meng-di, TAN Ning , LU Yang*,DU Shou-ying*

(SchoolofChinesePharmacyBeijingUniversityofTCM,Beijing100102，China)

To study veterinary hydrochloride terbinafine tablets flavoring process for dogs and determined the content of hydrochloride terbinafine.We chose three prescriptions with flavor agent by tablet moldability as an index included 5% natural chicken powder,3% chicken essence and 5% monosodium glutamate of description dosages .Then we observed the weight variation and disintegration time in comformity with the rules.Finally, 5% natrual chicken power is the best prescription by the compliance of beagle dogs.We determined the content of tablets by HPLC.Hydrochloride terbinafine concentration in the range of 0.0201 to 0.4026 mg/mL has a linear relationship (y= 2.652×107x- 2.418×104，r=0.9998),average recovery (n=6)97.97%(RSD=0.94).We prepared three batches of samples to test in some aspects.The content of hydrochloride terbinafine is between 99.17% and 101.24%,the content uniformity is A+1.8S<15.Therefore the process of flavor test was proved to be feasible and stable .The method is simple and accurate for quatification ,and can be used for the quality control.Natural chicken powder could improve the taste of dogs while hardly interfering the quality test.

tablets for dogs;flavor agent; hydrochloride terbinafine; content determination

北京市科技新星計劃(No.xx2015A048)

楊柳,碩士研究生，從事中藥制劑新劑型與新技術方面研究。

陸洋,E-mail:landocean28@163.com;杜守穎，E-mail:dushouying@263.net

2015-08-28

A

1002-1280 (2015) 11-0045-04

S855.4