不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況觀察

謝迎春(三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443003)

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不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況觀察

謝迎春(三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443003)

摘要：目的觀察不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況。方法病因不明的肝病患者79例，應(yīng)用PCR法檢測(cè)血清HBV DNA。結(jié)果79例病因不明肝病患者中，HBV DNA陽(yáng)性 15例(18.98%)；其中，抗HBc陽(yáng)性者中，HBV DNA陽(yáng)性12例(37.5%)；與不明原因肝炎相比，隱匿性HBV感染者年齡大、失代償性肝硬化患者比例高，血透明質(zhì)酸、ALT升高，白蛋白降低，P均<0.05。結(jié)論不明原因肝炎患者中存在一定的隱匿性HBV感染，與肝硬化密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：病毒性肝病；隱匿性感染；肝炎標(biāo)志物；乙型肝炎病毒

長(zhǎng)久以來(lái)，醫(yī)學(xué)界認(rèn)為乙肝表面抗原(HBsAg)轉(zhuǎn)陰和抗-HBs出現(xiàn)是HBV清除和臨床體征恢復(fù)的指征。但是，近年來(lái)大量文獻(xiàn)報(bào)道[1～3]，有些血清HBsAg呈陰性的患者血清中仍可檢測(cè)出HBV DNA，這種情況臨床上稱為隱匿性HBV感染。本研究通過(guò)觀察不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況，了解其發(fā)病的原因和流行病學(xué)情況。現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料納入標(biāo)準(zhǔn)：①血清乙肝病毒標(biāo)志物(HBV-M)呈陰性，即HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc均陰性；② HBsAg陰性，但多個(gè)或單個(gè)抗體呈陽(yáng)性(抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc中多個(gè)或單個(gè)陽(yáng)性)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他慢性病毒性肝炎；②酒精性或藥物性肝病；③代謝性肝病、自身免疫系統(tǒng)引起的肝病。宜昌市中心人民醫(yī)院2009年3月～2011年11月收治的符合標(biāo)準(zhǔn)的病因不明肝病患者79例，其中男41例、女38例，年齡(46.59±17.21)歲，病程(3.34±2.45) a；肝炎37例，肝癌9例，肝硬化33例。HBV-M檢測(cè)抗-HBs、抗-Hbe、抗-HBc陽(yáng)性(1組)7例，抗-HBs、抗-HBc陽(yáng)性(2組)9例，抗-HBc陽(yáng)性(3組)32例，抗-Hbe、抗-HBc陽(yáng)性(4組)5例，抗-HBs陽(yáng)性(5組)6例，乙肝五項(xiàng)均陰性(6組)20例。治療前均行透明質(zhì)酸、白蛋白、ALT檢測(cè)。

1.2方法

1.2.1HBV DNA檢測(cè)方法清晨肘部取空腹血5 mL，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，置于-30 ℃保存核酸提取：取血清150 μL，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作，采用逐吸附法提取HBV DNA；最后得到50 μL核酸提取液，于-30 ℃保存，作為PCR擴(kuò)增模板。引物設(shè)計(jì)：參考文獻(xiàn)[2]，選擇HBV DNA中S區(qū)，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物。外部引物：上游引物5′-AGAACGTCCCAACATGACTG-3′，下游引物5′-CAAAGCTATCTACCGACCGG-3′；內(nèi)部引物：上游引物5′-AGCAGGCGTGCCGCTCTTAG-3′，下游引物5′-ACATCTTCGCATCCGACTAG-3′；產(chǎn)物條帶為693 bp。PCR擴(kuò)增方法：每次擴(kuò)增反應(yīng)中，陽(yáng)性對(duì)照(試劑自帶)選用乙肝患者血清HBV DNA為模板；陰性以ddH2O為模板；反應(yīng)體系總體積50 μL，其中Taq聚合酶0.3 μL，dNTPs 3μL，buffer 5 μL；外引物中上游引物2 μL、下游引物2 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 35.7 μL。第1輪擴(kuò)增反應(yīng)條件：預(yù)變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 1 min，退火55 ℃ 1 min，延伸75 ℃ 1 min，終末延伸75 ℃ 5 min，循環(huán)40次；第2輪擴(kuò)增的模板為2 μL上輪PCR產(chǎn)物，反應(yīng)體系與第1輪相同，選用內(nèi)部引物中一對(duì)引物。反應(yīng)條件：預(yù)變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 2 min，退火50 ℃ 1 min，延伸70 ℃ 1 min，終末延伸70 ℃ 3 min，循環(huán)40次。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行凝膠電泳分析，紫外檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)志物對(duì)照，對(duì)應(yīng)部位出現(xiàn)熒光條帶則為陽(yáng)性。

2結(jié)果

79例病因不明肝病患者中，HBV DNA陽(yáng)性 15例(18.98%)。其中，1～6組分別為0、1、12、0、0、2例；3組與1、4、5組比較，P均<0.05；3組與6組比較，P<0.05；其余各組間比較，P均>0.05。另外，HBV DNA陽(yáng)性在肝炎、肝硬化、肝癌中分別為4、8、3例，三者間兩兩比較，P均>0.05。79例病因不明肝病患者中，隱匿性HBV感染失代償肝硬化5例(33.33%)，非隱匿性HBV感染者4例(6.25%)，P<0.05；二者年齡及血透明質(zhì)酸水平、白蛋白、ALT比較，見(jiàn)表1；二者性別、輸血史和直系親屬HBV感染差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

HBVDNAn年齡(歲)透明質(zhì)酸(ng/mL)白蛋白(g/L)ALT(U/L)陽(yáng)性1552.1±10.1*856.23±60.67*33.17±5.78*369.54±38.49*陰性6443.7±14.2307.45±58.1237.78±7.92151.48±50.15

注：與HBV DNA陰性者比較，*P<0.05。

3討論

隱匿性HBV感染患者在血清HBV-M抗體陽(yáng)性和(或)陰性的檢出率，很多文獻(xiàn)報(bào)道均有差異。有研究發(fā)現(xiàn)[4]，HBV-M陰性人群HBV DNA檢出率為5%，在抗-Hbe陽(yáng)性、抗-HBc陽(yáng)性者中檢出率為18%。本研究中，單抗HBc陽(yáng)性檢出率最高，達(dá)37.5%，與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致；HBV-M全陰性檢出率為10%，與文獻(xiàn)報(bào)道[6]相當(dāng)。目前，尚不明確HBV-M全陰性患者檢測(cè)到HBV DNA陽(yáng)性的原因是從病毒標(biāo)記物消失還是剛開(kāi)始感染就已發(fā)生。因此，對(duì)于各種長(zhǎng)期不明原因的肝病患者均應(yīng)行HBV DNA檢測(cè)，判斷是否為隱匿性HBV感染導(dǎo)致。

另外，我們還發(fā)現(xiàn)隱匿性HBV感染多發(fā)于中老年人群，且失代償性肝硬化發(fā)生率(33.33%)顯著高于非隱匿性HBV感染者(6.25%)，ALT偏高、血清白蛋白下降，透明質(zhì)酸升高。但隱匿性HBV感染者無(wú)家庭聚集爆發(fā)情況，該觀點(diǎn)也得到吳蓓穎等[7]研究的支持。

出現(xiàn)隱匿性HBV感染的原因可能與輸血性感染、器官移植等傳播HBV、急性慢性肝炎、血液透析和HBV母嬰傳播、肝硬化和肝癌等密切相關(guān)[8，9]。無(wú)償獻(xiàn)血者中存在隱匿性HBV感染，這在許多研究中已有報(bào)道。陳長(zhǎng)榮等[10]對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者做隱匿性HBV感染篩查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隱匿性HBV感染率高達(dá)0.21%(20/9 091)；倪宏英等[11]報(bào)道，無(wú)償獻(xiàn)血者隱匿性HBV感染率為0.208%(19/9 159)，二者結(jié)果相當(dāng)。Elgohry等[12]對(duì)埃及93例長(zhǎng)期血液透析患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)隱匿性HBV感染者有25例(26.8%)，其中3例抗-HBc、抗-HBs同時(shí)陽(yáng)性，1例抗-HBc、抗-HBs同時(shí)陰性，15例僅抗-HBc陽(yáng)性，6例僅抗-HBs陽(yáng)性，說(shuō)明隱匿性HBV感染在長(zhǎng)期血液透析患者中的發(fā)生率較高。

我國(guó)是一個(gè)肝病大國(guó)，隱匿性肝炎占很大比例,加強(qiáng)對(duì)此類患者的監(jiān)控和管理，對(duì)控制病情發(fā)展，減少遠(yuǎn)期不良后果，甚至對(duì)預(yù)防輸血后肝炎、器官移植失敗、母嬰垂直傳播等均有重要意義[13]。因此，加大隱匿性HBV感染的流行病學(xué)、臨床治療、檢測(cè)方法研究，尋找其致病原因、提前預(yù)防、有效治療是一項(xiàng)艱巨任務(wù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 梁紅霞,余祖江,張倩,等.HIV-1感染者中HCV感染對(duì)于隱匿性HBV感染的影響[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,32(2):190-193.

[2] Pniewski T, Kapusta J, Bociag P, et al. Plant expression, lyophilisation and storage of HBV medium and large surface antigens for a prototype oral vaccine formulation. (Special Issue: Plant molecular pharming 2012 and beyond)[J]. Plant Cell Reports, 2012,31(3):585-595.

[3] Li JQ, Wang KF, Yang YL, et al. Dynamical behaviors of an HBV infection model with logistic hepatocyte growth[J]. Mathe Comp Mod, 2011,54(1/2):704-711.

[4] 畢芳,商慶華,安永，等.單純抗-HBc陽(yáng)性慢性丙型肝炎患者隱匿性HBV感染[J].實(shí)用肝臟病雜志,2012,15(2):145-146.

[5] 馬寧強(qiáng),馮英明,張偉,等.隱匿性乙型肝炎病毒在隱源性肝病中的感染率研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2006,14(4):425-428.

[6] 張玲榮,馬媛,郝彥琴,等.隱匿性HBV感染者血清中HBV S基因變異分析[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,42(10):781-783.

[7] 吳蓓穎,蔡剛,林佳菲，等.隱匿性乙型肝炎患者乙肝病毒preS/S基因突變分析[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2011,31(8):724-728.

[8] Anna SF. Occult hepatitis B virus infection: diagnosis, implications and management[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2004,19(4):114-117.

[9] Giovanni R, Teresa P, Irene C, et al. Occult hepatitis B virus infection[J]. J Hepatol, 2007,46(3):160-170.

[10]陳長(zhǎng)榮,袁權(quán),葛勝,等.無(wú)償獻(xiàn)血者中隱匿性乙型肝炎病毒感染及表面抗原突變分析[J].病毒學(xué)報(bào),2009,25(3):178-184.

[11] 倪宏英,歐山海,謝金鎮(zhèn),等.閩南地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者隱匿性乙型肝炎病毒感染研究[J].中國(guó)輸血雜志,2011,24(12):1046.

[12] Elgohry I, Elbanna A, Hashad D. Occult hepatitis B virus infec-tion in a cohort of Egyptian chronic hemodialysis patients[J]. Clin Lab, 2012,58(9-10):1057-1061.

[13] Marusawa H, Uemoto S, Hijikata M, et al. Latent hepatitis B virus infection in healthy individuals with antibodies to hepatitis B core antigen[J]. Hepatology, 2000,31(2):488-495.

(收稿日期：2014-02-07)

中圖分類號(hào)：R512.6

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)04-0072-02

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.04.029