HPV分型及其高危亞型與宮頸病變的相關性分析*

李春龍，廖 洪，楊 瑛，吳長洪(廣東省深圳市鹽田區婦幼保健院檢驗科 518081)

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HPV分型及其高危亞型與宮頸病變的相關性分析*

李春龍，廖 洪，楊 瑛，吳長洪(廣東省深圳市鹽田區婦幼保健院檢驗科 518081)

目的 觀察人乳頭瘤病毒(HPV)亞型分布情況，探討HPV高危亞型與宮頸病變的相關性。方法 回顧性分析5 545例行液基細胞學檢測(TCT)及HPV分型檢測篩查宮頸癌患者的臨床資料，其中細胞學結果為無明確意義的非典型鱗狀上皮細胞改變(ASCUS)及以上級別者，進行陰道鏡宮頸活檢，分析HPV亞型分布情況及高危亞型與宮頸病變的相關性。結果 5 545例女性共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中單型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)；共檢測出4 194株HPV亞型。感染頻度前5位的HPV亞型分別是16型(21.75%)、58型(20.12%)、52型(10.59%)、18型(7.46%)以及68型(5.05%)。ASCUS、鱗狀上皮內低度病變及高度病變的病變率分別為27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)，宮頸細胞學病變分級程度越高，宮頸高度病變率越高(P<0.05)。病理結果為CINⅡ、CIN Ⅲ、宮頸癌患者的HPV高危亞型的陽性感染率分別為92.13%、96.21%、100.00%，提示HPV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.05)。TCT、HPV高危亞型和病理活檢3種方法進行對比分析顯示，宮頸細胞學檢查異常程度和病理活檢病變分級越高，HPV高危亞型陽性率越高；在TCT結果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發生率更高。以病理活檢為金標準，HPV高危亞型篩查在鱗狀上皮高度病變患者中對宮頸高度病變的靈敏度高達90.91%，特異度高達85.71%，陽性預測值高達90.91%。結論 宮頸細胞學檢查異常程度和病理活檢病變分級越高，HPV高危亞型陽性率越高；HPV分型檢測對細胞學異常者宮頸高度病變篩查有重要意義。

HPV分型檢測； 高危亞型； 宮頸病變

近年來，宮頸癌的發生率呈上升趨勢，是發病率第二位的女性惡性腫瘤，有數據顯示，宮頸癌占所有女性惡性腫瘤的25%[1]。研究已證實，人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌和宮頸上皮內瘤變的致病因素之一，尤其是高危型HPV更容易導致宮頸癌前病變，而宮頸癌的癌前病變期可逆，因此，HPV感染并對其準確分型，進行早期干預治療對挽救患者性命具有重要的意義。此外，應用HPV檢測篩查宮頸癌，有助于提高宮頸病變診斷的準確性，同時，對HPV進行分型，有利于臨床制定相關干預措施。經陰道鏡多點去活體做病理學檢查作為診斷宮頸癌的金標準，長期以來由于操作過程中設備需求高，技術人員專業性的要求也高，因而不能作為篩查的主要手段。近年來，薄層液基細胞學檢測技術(TCT)、高危型HPV(HR-HPV)篩查以及聯合LCT和HR-HPV在宮頸癌臨床篩查上的應用大大提升了篩查的準確性和特異性[2-3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院婦科門診2009年1月至2014年6月共對5 545例女性進行機會性宮頸癌篩查，均進行HPV分型檢測和TCT。對HPV高危亞型陽性或TCT結果為無明確意義的非典型鱗狀上皮細胞改變(ASC-US)及以上級別者，進行陰道鏡宮頸活檢。所有患者知情同意，排除生殖道畸形和急性炎性反應、有宮頸錐切及子宮切除手術史、妊娠、免疫缺陷、腫瘤史患者。

1.2 方法

1.2.1 HPV分型檢測 采用中國凱普生物科技公司的HPV分型檢測試劑盒，可檢測21種HPV亞型，包括高危亞型13種(HPV16、HPV18、HPV3l、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68型)，低危亞型5種(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44型)以及中國人群常見型3種(HPV53、HPV66、CP8304型)[4]。宮頸上皮脫落細胞標本采集后4 ℃標本，48 h內完成檢測。抽提純化DNA，PCR擴增，以凱普醫用核酸分子快速雜交儀為平臺，利用導流雜交的原理，在已經固定好核酸探針的低密度基因芯片膜上，采用凱普導流雜交HPV-DNA檢測法檢測HPV的分型。

1.2.2 TCT檢測 采集宮頸脫落上皮細胞標本后，根據ThinPrep液基細胞學檢測儀(美國新柏氏公司)的操作規范，TCT制片染色后，由2名細胞病理學醫師獨立閱片，結果不能確定者再請上級醫生閱片確定結果。采用2001年國際癌癥協會伯塞斯達系統報告染色觀察結果[3,5]，即正常范圍(WNL)、無明確意義的ASCUS改變、鱗狀上皮內低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內高度病變(HSIL)、鱗狀細胞癌(SCC)、腺上皮不正常為意義不明的不典型腺細胞(AGUS)和腺癌。根據TBS標準，LSIL即CINⅠ,HSIL包括CIN Ⅱ和 CIN Ⅲ。細胞學LSIL以上病變診斷為陽性。

1.2.3 病理診斷標準 TCT檢查結果為ASCUS及以上級別者，進行陰道鏡檢查，對宮頸可疑病變部位采集標本活檢。以組織病理學的診斷作為金標準，根據組織學的標準，宮頸病變的病理結果報告分為：正常、炎性反應、濕疣；宮頸上皮內瘤變：分為CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ；宮頸浸潤癌；其他。CINⅡ級及以上病變程度規定為宮頸高度病變標準。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0統計軟件對資料進行統計分析。計數資料用百分率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，顯著性標準取α=0.05。

2 結 果

2.1 HPV亞型分布 本組5 545例女性共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中單型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)。共檢測出4 194株HPV亞型。單型感染者中，檢出率超過5.00%的HPV亞型分別是HPV16型541株(24.12%)、HPV58型495株(22.07%)、HPV52型248株(11.06%)、HPV18型135株(6.02%)、HPV11型127株(5.66%)、HPV33型122株(5.44%)、HPV68型113株(5.04%)；多重感染者中，檢出率超過5.00%的HPV亞型分別是HPV16型371株(19.02%)、HPV58型349株(17.89%)、HPV52型196株(10.05%)、HPV18型178株(9.12%)、HPV53型103株(5.28%)、HPV68型99株(5.07%)。結果見表1。

表1 HPV亞型分布情況[n(%)]

2.2 TCT檢測結果 TCT結果顯示，WNL者3 049例，大于或等于ASCUS者2 496例，占45.01%。其中ASCUS 1 740例，LSIL 540例，HSIL 216例。

2.3 病理活檢結果 對2 496例大于或等于ASCUS者進行病理組織活檢，結果顯示，病變為炎性反應或濕疣的患者1 212例，CIN Ⅰ 540例，CIN Ⅱ432例，CINⅢ 264例，宮頸癌48例，宮頸高度病變率29.81%(744/2 496)。ASCUS、LSIL、HSIL的高度病變率分別為27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)。可見，隨著宮頸細胞學病變分級程度越高，宮頸高度病變率越高(P<0.05)。

2.4 HPV高危亞型與宮頸病變的關系 病理診斷為炎性反應或濕疣、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌的患者中，感染HPV高危亞型的陽性率分別為38.45%(466/1 212)、60.56%(360/540)、92.13%(398/432)、96.21%(254/264)、100.00%(48/48)。可見，HPV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.01)。

2.5 HPV高危亞型檢測與病理結果對比分析 本組宮頸高度病變患者共有744例，在HPV高危陽性者中的檢出率為45.87%(700/1 526)，在HPV高危亞型陰性中的檢出率為4.54%，兩者比較，差異具有統計學意義(P<0.01)。以病理結果為診斷金標準，HPV高危型陽性對宮頸高度病變診斷的靈敏度為94.09%，診斷特異性為52.85%，陽性預測值為45.87%，陰性預測值為95.46%。結果見表2。

表2 HPV高危亞型檢測與病理結果對比(n)

2.6 TCT不同分級的HPV高危亞型感染率及宮頸高度病變率 471例被病理診斷為宮頸高度病變的ASCUS患者中，HPV高危亞型陽性患者的宮頸高度病變率為40.22%(444/1 104)，顯著高于HPV高危亞型陰性的4.25%(27/636)，差異有統計學意義(P<0.01)，提示HPV高危亞型陽性的ASCUS患者宮頸高度病變發生率更高。同理，在LSIL和HSIL的患者中，HPV高危亞型陽性患者的宮頸高度病變率分別為36.67%(132/360)和90.91%(120/132)，顯著高于HPV高危亞型陰性的6.67%(12/180)和14.29%(12/84)，差異具有統計學意義(P<0.05)。此外，以病理活檢為金標準，HPV高危亞型篩查在HSIL患者中對宮頸高度病變的靈敏度高達90.91%(120/132)，特異度高達85.71%(72/84)，陽性預測值高達90.91%(120/132)。上述結果表明，在TCT結果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發生率更高，HPV高危亞型陽性的HSIL患者需立即進行陰道鏡采集病理活檢，以及早發現宮頸高度病變。結果見表3。

表3 TCT、HPV高危亞型以及病理活檢結果對比(n)

3 討 論

有多機構研究顯示，HPV亞型感染率具有較大的地域差異，國際癌癥研究協會分析了全球25個國家共3 607例宮頸癌患者的HPV亞型感染情況，發現感染率最高的HPV16平均感染率高達57.40%；其次為HPV18，感染率12.60%～25.70%[6]。有研究報道，亞洲國家感染率最常見的是HPV52型和HPV58型，有流行病學研究顯示，上海的宮頸癌標本中，HPV52和HPV58型感染率高達42.50%[7]。有權威數據顯示，中國女性最常見的HPV亞型感染頻度前5位的分別是HPV16、HPV18、HPV52、HPV58、HPV31[8-9]。本組研究篩查了5 545例女性，共篩查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，感染頻度前5位的HPV亞型分別是HPV16型(21.75%)、HPV58型(20.12%)、HPV52型(10.59%)、HPV18型(7.46%)以及HPV68型(5.05%)，基因型與亞洲國家的相關報道基本一致，檢出頻度略有差異，可能與HPV亞型在人群中的分布有地域差異有關，也可能與研究對象的來源不同有關[10]。

研究已證實，HPV高危亞型感染是導致宮頸高度病變的必要條件，有統計數據表明，99.80%的宮頸癌患者感染HPV高危亞型[9]。本組研究顯示，病理結果為CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、宮頸癌患者的HPV高危亞型的陽性感染率分別為92.13%、96.21%、100.00%，可見HPV高危亞型的感染率越高，宮頸病變程度越高(P<0.01)。TCT、HPV高危亞型和病理活檢3種方法進行對比分析顯示，宮頸細胞學檢查異常程度和病理活檢病變分級越高，HPV高危亞型陽性率越高；在TCT結果異常的患者中，HPV高危亞型陽性的患者宮頸高度病變發生率更高，以病理活檢為金標準，HPV高危亞型篩查在HSIL患者中對宮頸高度病變的靈敏度高達90.91%，特異度高達85.71%，陽性預測值高達90.91%。因此，臨床檢查發現HPV高危亞型陽性的HSIL患者需立即進行陰道鏡采集病理活檢，以及早發現宮頸高度病變。

宮頸病變嚴重程度及其預后轉歸除了與感染HPV高危亞型有關，還與遺傳、年齡、免疫狀態、婚育史、生活習慣等諸多因素有關[11]。因此，在臨床工作中，應結合多種方法對高危人群進行篩查。本組研究結果有助于了解筆者所在地區范圍內的HPV各亞型分布趨勢，對疫苗研制或臨床重點篩查具有重要的指導意義，對TCT不同分級的患者進行臨床分層管理也有參考價值。HPV亞型檢測對篩查宮頸癌和宮頸癌手術后隨訪具有重要的臨床應用價值。

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廣東省計劃生育委員會科研基金資助項目(2010312)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.08.033

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1672-9455(2015)08-1109-03

2014-10-10

2014-11-20)