RhD(-)無親緣關系獻血者Du和 Del變異型分布調查*

劉文國，郭長義，宋雪冬，宋任浩

(1.河北省廊坊市第四人民醫院檢驗科 065700；2.河北省

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·臨床研究·

RhD(-)無親緣關系獻血者Du和 Del變異型分布調查*

劉文國1，郭長義1，宋雪冬1，宋任浩2△

(1.河北省廊坊市第四人民醫院檢驗科 065700；2.河北省

血液中心檢驗科，石家莊 050071)

目的 調查RhD(-)無親緣關系獻血者Du和 Del變異型分布情況。方法 對鹽水法初篩為RhD(-)無親緣關系獻血者采用間接抗球蛋白試驗檢測Du型，采用吸收放散法檢測Del型。結果 初篩為RhD(-) 327例標本中,檢出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,確證RhD(-)256例,占78.29%。確證RhD(-)獻血者中ccee表現型最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。結論 常規檢測 RhD(-)的獻血者應采用更為敏感的試驗確證是否為Du型或Del型。為保障輸血安全，Du型和Del型獻血者應作RhD陽性看待，而作為受血者則應視為RhD陰性。

RhD(-)血型； Du型； Del型

RhD抗原對輸血的影響僅次于ABO抗原，具有重要的臨床意義，因此，人們對RhD抗原的研究較為深入。RhD基因的重組、突變、缺失及mRNA的表達水平下降，導致了紅細胞的RhD血型出現許多變異型，其中Du型及Del型最為常見[1]。Du型及Del型由于D抗原表達較弱，常規血型血清學方法檢測一般為陰性，采用較為敏感的間接抗球蛋白試驗和吸收放散法仍可檢測出D抗原。目前，已有RhD(-)患者因輸入Rh Du或Del型血液后產生了抗-D或抗-D效價升高的報道[2]。因此，在RhD(-)獻血者中排除Du、Del的個體,對于建立真正的RhD(-)血型庫以保證安全輸血十分重要。為此作者采用間接抗球蛋白試驗和吸收放散試驗對河北地區初篩RhD(-)獻血者Du和 Del變異型分布調查,現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年5月至2014年5月河北省血液中心鹽水法初篩為RhD(-)無親緣關系獻血者的血液標本327份。進一步采用間接抗球蛋白試驗檢測Du型，采用吸收放散法檢測Del型。

1.2 主要試劑與儀器 單克隆IgM抗-D、單克隆IgG抗-D、人源性多克隆抗-D(德國Biotest公司、上海血液生物公司、北京金豪制藥公司)；單克隆IgG+IgM抗-D(加拿大Dominion公司、德國Biotest公司、法國Diagast公司)；單克隆抗-C、抗-c、抗-E、抗-e和抗球蛋白試劑(北京金豪制藥有限公司)。2991型血細胞洗滌機(美國Gambro公司)、80-2 型離心沉淀器(上海手術機械廠)、TD4M血細胞洗滌離心機 (長沙平凡儀器儀表有限公司)、BHW 2型水浴箱(北京醫療設備廠)、奧林巴斯CX21BIM-SET5生物顯微鏡(上海皖寧精密科學儀器有限公司) 和QL-861漩渦混合器(常州杰博森儀器有限公司)。

1.3 方法 RhD(-)初篩及確認:操作步驟參照文獻[3]。用3批不同來源的單克隆 IgM 抗-D試劑作鹽水法初篩試驗,凝集者為 RhD(+)，未凝集者為 RhD(-)；未凝集者用單克隆抗-C、抗-c、抗-E和抗-e鑒定其表型，同時3種不同來源的人源性多克隆抗-D和單克隆IgG+IgM抗-D進行間接抗人球蛋白試驗,凝集者判為Du；未凝集者用單克隆 IgM抗-D試劑及單克隆IgG抗-D試劑作乙醚吸收放散試驗，凝集者確定為Del型。

2 結 果

初篩為RhD(-)標本327例中,檢出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,確證RhD(-)256例,占78.29%。確證RhD(-)獻血者中ccee最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。327例初篩為RhD(-)獻血者Rh 系統表型分布見表1。

表1 327例初篩為RhD(-)獻血者Rh 系統表型分布[n(%)]

3 討 論

Rh血型系統是最具多態性的紅細胞血型系統，與臨床輸血密切相關的有D、C、c、E、e等5種抗原，免疫強度依次為D、E、c、C、e，約80%的RhD陰性個體在接受1 U的RhD陽性紅細胞刺激后即可產生抗-D[4],我國衛生部于2000年頒發了《臨床輸血技術規范》，明確要求采供血機構在采集、供應血制品前必須進行Rh 血型檢測。近年來隨著輸血實踐的不斷深入，人們發現部分RhD(-)個體擁有常規檢測方法如鹽水法難以檢測出的弱D抗原。弱D抗原是由于基因重組、缺失、點突變、無義突變以及 mRNA 的表達水平下降而導致的，與D抗原基本上無區別,只是比RhD陽性的紅細胞膜上的D抗原位點少,表達減弱。弱D抗原最為常見的為Du和 Del變異型，只能用間接抗球蛋白試驗和吸收放散技術才能檢出。

調查顯示，本地區Du型在初篩陰性獻血者中的分布頻率較低，為6.12%，與有關調查結果相近[5]。Du型紅細胞在抗人球蛋白介質中能夠與IgG抗D血清發生凝集，說明Du型紅細胞上含有一定的RhD抗原表位。有研究顯示,Du型紅細胞可刺激RhD(-)受血者產生IgG 抗D[6]。在RhD(-)獻血者中Del型的檢出率為15.59%，與云南地區接近[7]，但低于海南地區29.25%的檢出率[8]，說明Del型的分布存在一定的地區差異，但還有待于大標本量的進一步研究。實驗顯示,Del型紅細胞在抗人球蛋白介質中不能與IgG抗D出現凝集，只能用更加敏感的吸收放散試驗才能檢出,說明Del型紅細胞上含有較少的RhD抗原表位。盡管如此,Del型獻血者的紅細胞仍可刺激受血者發生同種免疫反應而產生IgG抗D[9]，因此，為保障輸血安全，Du型和Del型獻血者應作RhD陽性看待，而作為受血者則應視為RhD陰性。由于Del型紅細胞上抗原表位極少，由此引起同種免疫反應的概率較小。因此，若RhD(-)患者要急需用血，此時又找不到完全適合的血液，這時可將Del型作為RhD陰性血液來用。不過，這種做法僅限在RhD陰性血液缺乏時應急使用。

調查還顯示，RhD(-)獻血者的表現型以 ccee型(48.32%)和 Ccee型(23.55%) 所占比重最大,與有關報道基本一致[10]。在Du型獻血者中，表現型分布以ccEe型為最多，而在Del型獻血者中，以Ccee型為最多。有研究報道Del型與C抗原有一定的相關性[11],但因檢測的標本量較少,還有待進一步研究。

綜上所述，常規檢測 RhD(-)的獻血者應采用更為敏感的試驗確證是否為Du型或Del型。為保障輸血安全，Du型和Del型獻血者應作RhD陽性看待，而作為受血者則應視為RhD陰性。

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河北省醫學科學研究重點課題(20130133)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.030

A

1672-9455(2015)02-0211-02

2014-06-17

2014-09-22)

△通訊作者，E-mail：songrenhao888@163.com。