病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀的可行性探討*

劉金嬪，王 莉，劉海濤，金 松，李福玲

(湖北省荊門市紅十字中心血站 448000)

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·論 著·

病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀的可行性探討*

劉金嬪，王 莉，劉海濤△，金 松，李福玲

(湖北省荊門市紅十字中心血站 448000)

目的 探討亞甲藍光化學法(MB-P)病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀凝血因子的可行性。方法 選取2014年1～6月無償獻血者捐獻的400 mL全血93袋，分離新鮮冰凍血漿200 mL后再均分為2袋，各100 mL，分別作為對照組和試驗組。對照組直接制備冷沉淀凝血因子，試驗組經MB-P法病毒滅活后再制備冷沉淀凝血因子。檢測每袋冷沉淀凝血因子中FⅧ和Fbg水平。結果 對照組FⅧ和Fbg水平分別為(82.9±7.1)IU/100 mL、(102.4±8.5)mg/100 mL，試驗組分別為(56.6±5.3)IU/100 mL、(83.3±5.6)mg/100 mL，試驗組FⅧ和Fbg水平均低于對照組，組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)，且均符合相關國家標準。結論 加強血液采集、儲存、運輸和制備過程中的質量控制，使用經MB-P法病毒滅活新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀凝血因子符合相關國家標準。

冷沉淀； 病毒滅活； 冰凍血漿

輸血是臨床治療疾病的一種有效手段，在現代醫學中有著不可替代的地位。但由于血液檢測存在“窗口期”等問題，通過輸血傳播病毒的風險依然存在。血液主要由紅細胞、白細胞、血小板和血漿等組成，各種成分對病毒傳播的危險性不同，其中白細胞對病毒的傳播風險最大，血漿其次。亞甲基藍光化學法(MB-P)作為目前唯一獲準用于臨床的光化學血漿病毒滅活技術[1]，已應用于我國大部分血站。冷沉淀凝血因子是從新鮮冰凍血漿(FFP)中提取的冷不溶性沉淀物，因富含凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纖維蛋白原(Fbg)等,被廣泛用于治療兒童及成人輕型甲型血友病、血管性血友病(vWD)、纖維蛋白原缺乏癥及Ⅷ因子缺乏癥。GB 18469-2012《全血及成分血質量要求》分別明確了病毒滅活FFP和冷沉淀凝血因子的國家標準，但并未明確病毒滅活FFP制備冷沉淀凝血因子的國家標準。為探討采用病毒滅活FFP制備的冷沉淀凝血因子是否符合國家標準，作者在2014年1～6月分別對不同方法制備的冷沉淀凝血因子的主要成分，即Fbg和FⅧ水平進行了檢測，分析通過病毒滅活FFP制備冷沉淀凝血因子的可行性，以提高臨床輸血的安全性，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 所有標本均為本血站2014年1～6月無償獻血者捐獻的400 mL全血，每批次選取不超過5袋，共93袋。

1.2 儀器與試劑 主要儀器設備：CR-7大容量離心機(日本日立公司)，ZBK-YBM02醫用病毒滅活柜(山東中保康)，PH-IC型恒溫循環解凍箱(濰坊普華)，CA-50自動血凝儀(日本希森美康公司)，STA-R Evolution 全自動血凝分析儀(法國Stago公司)，Compodock無菌接管機(德國費森尤斯公司)；MBF21速凍機等(德國Dometic公司)。耗材與試劑：Q-400血袋及枸櫞酸-磷酸鹽-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA-1)保存液(上海輸血技術有限公司和山東威高)，一次性使用病毒滅活過濾性器材(上海輸血技術有限公司和山東中保康)，FⅧ、Fbg試劑盒(法國Stago公司)。全部設備均在校準有效期內，全部試劑和耗材均在有效期內使用。

1.3 方法

1.3.1 標本制備 所有標本采集后保存于CPDA-1保存液中，置于2～6 ℃儲血冰箱，8 h內分離出血漿200 mL，再平均分為2袋，各100 mL，分別作為對照組和試驗組。對照組FFP放入-50 ℃速凍機速凍成塊備用。試驗組血漿在30 000～38 000 Lux、溫度4 ℃、擺動條件下照射35 min后，將病毒滅活FFP放入-50 ℃速凍機速凍成塊備用。完成FFP制備、病毒滅活操作后，將對照組和試驗組FFP置于水浴式血漿融化箱，待融化至剩少量冰渣時，以離心法提取冷沉淀凝血因子以備檢測。所有操作嚴格按照國家相關標準操作規程執行。

1.3.2 檢測方法 將每次制備的對照組、試驗組冷沉淀凝血因子(每次檢測不超過10袋)分別留取5 mL，使用自動血凝分析儀檢測FⅧ與Fbg水平。嚴格按儀器標準操作規程和試劑使用說明書操作。

2 結 果

試驗組FⅧ與Fbg水平均低于對照組，組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)，且均符合GB 18469-2012《全血及成分血質量要求》相關標準。見表1。

表1 兩組冷沉淀凝血因子FⅧ與Fbg檢測水平比較

注：每袋100 mL即相當于國標中來源于200 mL全血。

3 討 論

MB-P血漿病毒滅活法是通過向血漿中添加MB，使MB與病毒基因核酸及脂質包膜相結合，在光照下誘導發生氧化損傷而使病毒滅活；最后通過吸附過濾器內設置的纖維過濾膜層和活性炭吸附層的阻滯作用、表面張力、電荷排斥力濾除MB[2]。MB-P血漿病毒滅活是一種安全、有效，并適合臨床用于單袋血漿滅活病毒的方法，其病毒滅活效果已得到大量實驗證實[3]。

輸注病毒滅活血漿相關制劑可降低輸血傳播疾病的發生率，但是任何病毒滅活技術都可能對血液制劑中的有效成分產生損傷。本研究結果顯示，采用經MB-P進行血漿病毒滅活后的FFP所制備的冷沉淀凝血因子，其FⅧ、Fbg水平均較采用未滅活的FFP所制備的冷沉淀凝血因子降低(P<0.05)，與國內相關文獻報道一致[4-6]。但均符合相關血液制劑的國家標準，即FⅧ≥40 IU(來源于200 mL全血)，Fbg≥75 mg(來源于200 mL全血)。FⅧ、Fbg水平下降的原因除與MB-P方法相關，還與凝血因子受溫度和時間的影響有關[7-8]。此外，病毒滅活后在吸附、過濾亞甲藍的過程中，會吸附一部分FⅧ、Fbg使其水平下降。

結合本次試驗，作者認為：(1)應加強血液采集、儲存、運輸過程中的質量控制。在血液采集過程中，嚴格執行《血站技術操作規程》的相關規定，保證采血過程順利，血液流速正常。若200 mL血液的采集時間超過7 min，400 mL血液的采集時間超過13 min，不得用于制備FFP。血液采集后應及時儲存于2～6 ℃儲血冰箱并保證運輸過程的冷鏈保護，防止因溫度影響導致FⅧ、Fbg水平下降。(2)采血后8 h內必須完成FFP的制備、病毒滅活和速凍工作，冷沉淀凝血因子需在冷鏈條件下以盡可能短的時間通過離心法完成收集和速凍工作，防止因時間延遲導致的FⅧ、Fbg水平下降。(3)臨床使用時，采用專用血漿融化機以37 ℃水浴融化，取血后盡快輸注。并以患者能承受的最大速度輸注。此外，根據FⅧ半衰期為8～12 h的特性，連續輸注等方法均是保證冷沉淀凝血因子的臨床治療效果的重要保證。

綜上所述，采用病毒滅活FFP制備冷沉淀凝血因子，其FⅧ、Fbg水平均下降，但仍然符合國家相關標準。在血液的采集、制備、輸注等環節，嚴格執行國家相關規定和技術規程，不會影響臨床輸注效果，且可以降低病毒感染風險。

[1]楊建，朱琳，趙淑紅，等．病毒滅活血漿的臨床應用狀況調查[J]．臨床輸血與檢驗，2010，12(3)：265-266．

[2]蔡杰，胡俊妍，陳映娥，等．白細胞濾器對新鮮冰凍血漿凝血因子及血漿蛋白的影響[J]．中國熱帶醫學雜志，2006，6(1)：123-124．

[3]陸萍，凌冰，季育華，等．亞甲藍光化學法滅活血制品中巨細胞病毒的研究[J]．中國輸血雜志，2005，18(4)：290-292．

[4]王飛，盧舜華，葉小演，等．血漿病毒滅活后質量回顧性分析[J]．重慶醫學，2010，39(15)：2043-2044．

[5]黃文杰，范恩勇，孫海英．亞甲藍光化學法病毒滅活血漿對凝血因子的影響[J]．實用醫學雜志，2006，22(18)：2193-2194．

[6]湯龍梅，楊春暉，周群剛，等．亞甲藍病毒滅活血漿1年保存期質量調查研究[J]．檢驗醫學與臨床，2012，9(24)：3043-3044．

[7]李靜旗，馬麗華，管尚峰．冷沉淀的質量分析[J]．大連大學學報，2004，25(2)：102-103．

[8]于建華，孫庶麗，王明靜，等．病毒滅活血漿中有效成分及亞甲藍殘留量的研究[J]．中國衛生檢驗雜志，2010，20(6)：1541-1542．

Study on feasibility of cryoprecipitate prepared by viral inactivation fresh frozen plasma*

LIUJin-pin,WANGLi,LIUHai-tao△,JINSong,LIFu-ling

(JingmenMunicipalRedCrossBloodCenter,Jingmen,Hubei448000,China)

Objective To investigate the feasibility of viral inactivation fresh frozen plasma for preparing the cryoprecipitate clotting factor by using the methylene blue photochemical (MB-P) method.Methods A total of 93 bags of whole blood 400 mL donated by the voluntary blood donors from Jan. to Jun. 2014 were selected.Fresh frozen plasma 200 mL was separated from the whole blood and was equally divided into 2 bags(100 mL each) as the control group and the experimental group after separating the fresh frozen plasma.The control group was directly prepared the cryoprecipitated clotting factor,while the experimental group was prepared the cryoprecipitated clotting factor after the viral inactivation by the MB-P method.The levels of the cryoprecipitate clotting factor FⅧ and Fbg in each bag were detected.Results The FⅧ and Fbg levels in the control group were (82.9±7.1)IU/100 mL and (102.4±8.5)mg/100 mL respectively,which in the experimental group were (56.6±5.3)IU/100 mL and (83.3±5.6)mg/100 mL respectively,the FⅧ and Fbg levels in the experimental group were significantly lower than the control group,the differences between the two groups were statistically significant(P<0.05),but in which conformed to the relevant national standards.Conclusion Through strengthening the quality control in the process of blood collection,storage,transportation and preparation,preparing the cryoprecipitate clotting factor by using the viral inactivation fresh frozen plasma with the MB-P method could meet the relevant national standards.

cryoprecipitate； viral inactivation； frozen plasma

湖北省荊門市科技計劃項目(2013YD48)。

劉金嬪，女，本科，主管護師，主要從事血液采集和成分制備工作。△

，E-mail：437342281@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.012

A

1672-9455(2015)06-0750-02

2014-09-04

2014-12-25)