冷沉淀制備過程的質量控制和去冷沉淀血漿的臨床應用價值探討

黎美君，馬姍姍，夏代全，駱展鵬，張維理，鄒曉萍，王娟娟

(重慶市血液中心 400015)

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·臨床研究·

冷沉淀制備過程的質量控制和去冷沉淀血漿的臨床應用價值探討

黎美君，馬姍姍△，夏代全，駱展鵬，張維理，鄒曉萍，王娟娟

(重慶市血液中心 400015)

目的 通過控制冷沉淀的制備過程，分析去冷沉淀血漿的質量，為臨床應用提供依據。方法 采用離心法制備冷沉淀，檢測同一獻血者來源的新鮮冰凍血漿、去冷沉淀血漿、普通血漿標本中凝血因子FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ水平，以及纖維蛋白原和總蛋白水平并進行比較分析，同時檢測冷沉淀中FⅧ與纖維蛋白原水平。結果 去冷沉淀血漿的纖維蛋白原、總蛋白及FⅧ水平均低于新鮮冰凍血漿與普通冰凍血漿，且其FⅨ水平同樣低于新鮮冰凍血漿，組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 去冷沉淀血漿在臨床上不能等同于新鮮冰凍血漿和普通冰凍血漿使用，應通過對冷沉淀制備過程的有效控制，根據實際情況進行選擇。

冷沉淀； 去冷沉淀血漿； 臨床應用

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在1～6 ℃條件下不溶解的白色沉淀物，主要含有纖維蛋白原(Fg)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)和F、血管性假血友病因子(vWF)及纖維結合蛋白(Fn)5種成分，分出的血漿則為去冷沉淀血漿，又稱冷上清。近年來，由于成分輸血的大力推廣及凝血因子制品的缺乏，冷沉淀制品的臨床應用范圍和用量呈明顯上升趨勢，除用于治療甲型血友病及纖維蛋白原與凝血因子缺乏所致的出血性疾病外，在燒傷、外傷、播散性血管內凝血(DIC)等方面也得到了廣泛的應用。冷沉淀中Ⅷ因子極其不穩定，獻血者自身凝血因子水平，血液采集過程，制備時間、溫度和方法，運輸溫度等環節都會影響冷沉淀的最終質量。而臨床通常將去冷沉淀血漿作為普通冰凍血漿使用。本文通過嚴格控制冷沉淀制備過程的關鍵環節，分析冷沉淀和去冷沉淀血漿的質量，為臨床應用提供依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 隨機抽取符合《獻血者健康檢查要求》的30人份全血，各400 mL,所有標本均采血順暢、使用血液保存液Ⅱ抗凝、于采集后6 h內進行檢測。

1.2 儀器與試劑 凝血因子檢測均采用CA-1500全自動凝血儀(日本希森美康)及成都協和凝血系列試劑(FⅤ、FⅧ、FⅨ檢測試劑批號20100902，FⅦ檢測試劑批號20100901，纖維蛋白原檢測試劑批號20100702)；蛋白水平檢測采用NSA-400全自動生化儀(沈陽東軟醫療系統有限公司)及四川邁克試劑(批號051011021)；血漿速凍機(天津天商冰源科技發展有限公司)，CytoTherm CT-4T.6C低溫融化箱(美國科瑞特)，Cyrofuge 6000i大容量離心機(德國賀利氏)，低溫冰箱(日本三洋)。

1.3 方法 血液采集后儲存在2～6 ℃冰箱中，嚴格按照國標要求在6 h內分離新鮮血漿200 mL，同時留取2份血漿標本約15 mL，其中1份速凍至-50 ℃以下(新鮮冰凍血漿標本)，另1份置于4 ℃冰箱(普通冰凍血漿標本)。次日將新鮮冰凍血漿放入1～6 ℃水浴低溫融化箱快速融化，采用離心法制備冷沉淀。待血漿基本融化，留有少許冰渣時，取出血漿，4 000 r/min，2～6 ℃，15 min離心，分離出上清去冷沉淀血漿，留下20～30 mL血漿和白色沉淀物，即為冷沉淀。將其快速置于低溫速凍箱內凍結，同時留取血漿標本約15 mL(去冷沉淀血漿樣本)，與前一天置于4 ℃冰箱的血漿標本一起放入-20 ℃冰箱冰凍。按照試劑說明書操作，檢測新鮮冰凍血漿、去冷沉淀血漿、普通冰凍血漿樣本中FV、FⅦ、FⅧ、FⅨ水平，以及纖維蛋白原和總蛋白水平，并檢測冷沉淀中FⅧ和纖維蛋白原水平。

2 結 果

2.1 不同血漿標本各指標檢測結果比較 新鮮冰凍血漿與去冷沉淀血漿標本中FⅧ 、FⅨ、纖維蛋白原和總蛋白水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)；普通冰凍血漿與去冷沉淀血漿標本中FⅧ、纖維蛋白原和總蛋白水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同血漿標本各指標檢測結果比較

注：與去冷沉淀血漿比較，aP<0.05。

2.2 冷沉淀中FⅧ和纖維蛋白原水平 冷沉淀中FⅧ和纖維蛋白原水平分別為(395±76.4)%和(6.9±0.9)g/L。

3 討 論

近年來，隨著冷沉淀凝血因子的廣泛使用，去冷沉淀血漿的應用也逐年遞增，但目前國內輸血行業對去冷沉淀血漿沒有明確的界定，《全血及成分血質量要求》[1]中也無此類血液的術語和定義，對其在疾病治療中的作用也未做出評估。大多數學者認為，去冷沉淀血漿僅能用于血栓性血小板減少性紫癜(TTP)的治療[2-4]。但也有文獻報道，對于常規使用血漿的患者，新鮮血漿和去冷沉淀血漿可起到同等效果[5]。本文采用離心法制備了冷沉淀，對比檢測了同一獻血者來源的新鮮冰凍血漿、去冷沉淀血漿、普通血漿標本中FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ，以及纖維蛋白原和總蛋白水平，并且為了控制冷沉淀的質量，同時對冷沉淀中FⅧ因子和纖維蛋白原水平進行了檢測，均滿足標準要求。

冷沉淀制備過程中的影響因素較多，需要嚴格控制各關鍵點。如全血采集后需及時放入2～6 ℃冰箱；各袋新鮮血漿的容量最好控制在250 mL以內，否則不同血袋的融化時間差異較大，且需在6 h內冰凍；水浴低溫融化箱和離心機在使用前應達到規定溫度；融化血漿的數量應在規定的最大數量內；同時選擇恰當的融化終點很關鍵，一般240 mL血漿的融化時間約為90 min。作者認為，當多數血漿融化至冰塊直徑2～3 cm、厚度約1 cm時終止融化最為恰當；對于極個別仍然較大的冰塊需繼續融化，此時需隨時關注融化情況，使冷沉淀達到最佳分離狀態。因為若以冰渣量很少或基本無冰渣為終點，會導致融化過度，待分離時可能出現冷沉淀溶解的狀況，造成冷沉淀容量降低；若所選終點提前，會由于冰塊過大造成冷沉淀容量超標。

本研究結果顯示，去冷沉淀血漿中纖維蛋白原水平，FⅧ與FⅨ水平，以及總蛋白水平均明顯低于新鮮冰凍血漿，差異均有統計學意義(P<0.05)，尤其以FⅧ差異最大。本研究結果還顯示，去冷沉淀血漿中纖維蛋白原、FⅧ及總蛋白水平均低于普通冰凍血漿，差異均有統計學意義(P<0.05)。由于目前多數血站將去冷沉淀血漿標識為普通冰凍血漿，且臨床上將兩者等同使用，使得需補充以上凝血因子和總蛋白的患者不一定能達到治療目的。因此不能把去冷沉淀血漿標識為普通冰凍血漿應用于臨床。雖然一直以來FⅤ被認為是不穩定因子，但有學者研究發現，枸櫞酸鹽抗凝溶液(CPD血液保存液)保存的全血在4 ℃保存1周后所測定的FⅤ活性與采集1 h后分離血漿所測定的結果接近[6]。本研究同樣顯示，普通冰凍血漿、新鮮冰凍血漿的FⅤ水平與去冷沉淀血漿比較，差異均無統計學意義，與文獻報道相符。此外有研究報道，去冷沉淀血漿和新鮮冰凍血漿中抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、血漿蛋白C(PC)和血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)水平無明顯差異，即去冷沉淀血漿中富含大量的AT-Ⅲ、PC和ADAMTS13，理論上可用于上述因子缺乏癥患者的補充治療[7]。并且用去冷沉淀血漿對TTP患者行血漿置換后,可使患者凝血系統恢復正常,病情明顯好轉[8]。

綜上所述，建議去冷沉淀血漿應單獨標識，不能替代普通冰凍血漿，最好用于TTP患者的輸注治療，如此既可以達到有效治療的目的，又能節約血液資源。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.041

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1672-9455(2015)06-0819-02

2014-09-23

2014-12-19)

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