惠州龍門地區(qū)婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白與KGFR的表達(dá)及意義

王永良，陳美才

(1.廣東省惠州市龍門縣人民醫(yī)院 516800；2.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司 510330)

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·臨床研究·

惠州龍門地區(qū)婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白與KGFR的表達(dá)及意義

王永良1，陳美才2

(1.廣東省惠州市龍門縣人民醫(yī)院 516800；2.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司 510330)

目的 探討p16INK4a蛋白、角質(zhì)細(xì)胞生長因子受體(KGFR)在惠州龍門地區(qū)婦女宮頸病變中的表達(dá)及意義。方法 選取2013年6月至2014年6月于惠州市龍門人民醫(yī)院就診的180例婦女，按照病例診斷結(jié)果將所有研究對象分為宮頸鱗癌組(40例)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ/Ⅲ組(45例)，CINⅠ組(48例)，健康及慢性炎癥組(47例)。采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物酶連結(jié)(SP)法對p16INK4a蛋白及KGFR的表達(dá)進(jìn)行檢測，并比較分析不同病理分期的表達(dá)差異。結(jié)果 宮頸鱗癌組、CINⅡ/Ⅲ組、CINⅠ組、健康及慢性炎癥組的p16INK4a蛋白表達(dá)陽性率分別為90.0%、82.2%、29.2%、0.0%，KGFR表達(dá)陽性率分別為87.5%、84.4%、52.1%、42.6%。p16INK4a蛋白與KGFR在宮頸組織中的表達(dá)隨著病理分期的上升而增加，組間p16INK4a蛋白及KGFR表達(dá)陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 惠州龍門地區(qū)婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白、KGFR均有不同程度的表達(dá)，且與宮頸病變進(jìn)展密切相關(guān)。

宮頸病變； p16INK4a； 角質(zhì)細(xì)胞生長因子受體

宮頸癌是目前第2高發(fā)的女性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，已成為中青年婦女的重要死因，據(jù)統(tǒng)計全世界每年約有27萬人死于宮頸癌，其中發(fā)展中國家占85%[1]。宮頸癌的發(fā)展與多個抑癌基因的失活密切相關(guān)。其中p16INK4a基因位于9p21，直接參與細(xì)胞從G1到S期的調(diào)節(jié)，如失去該調(diào)控作用，細(xì)胞將會去分化而形成腫瘤[2]。而角質(zhì)細(xì)胞生長因子受體(KGFR)則與上皮源性腫瘤的發(fā)展相關(guān)，目前已證實(shí)KGFR在各種上皮源性腫瘤中表達(dá)。p16INK4a、KGFR在不同地區(qū)人群的表達(dá)各有差異，本研究主要探討惠州龍門地區(qū)婦女宮頸病變中p16INK4a、KGFR的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年6月至2014年6月于該院婦產(chǎn)科就診的婦女180例，其中宮頸鱗癌患者40例(宮頸鱗癌組)，平均年齡(48.32±8.22)歲，平均身高(158.12±4.26)cm，平均體質(zhì)量(48.13±6.74)kg,平均體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(21.64±3.24)kg/m2；宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)Ⅱ/Ⅲ患者45例(CINⅡ/Ⅲ組)，平均年齡(47.25±8.72)歲，平均身高(159.54±4.47)cm，平均體質(zhì)量(50.25±5.59)kg,平均BMI(22.61±3.42)kg/m2；CINⅠ患者48例(CINⅠ組)，平均年齡(49.72±7.45)歲，平均身高(158.74±4.79)cm，平均體質(zhì)量(51.80±5.56)kg,平均BMI(23.61±7.67)kg/m2；健康及慢性炎癥患者47例(健康及慢性炎癥組)，平均年齡(48.52±6.62)歲，平均身高(159.82±5.15)cm，平均體質(zhì)量(50.26±7.87)kg,平均BMI(26.24±7.88)kg/m2。所有研究對象的病理診斷均由2位病理專家進(jìn)行復(fù)核，且均未經(jīng)過任何放化療治療。各組年齡、身高、體質(zhì)量和BMI等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測 采用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物酶連結(jié)(SP)法對p16INK4a、KGFR蛋白進(jìn)行檢測。切片厚度為2 μm，60 ℃恒溫過夜后脫蠟，乙醇梯度脫水后分別進(jìn)行：蒸餾水洗片，抗原修復(fù)，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS再沖洗，加基因科技(上海) 有限公司生產(chǎn)的鼠單抗人p16INK4a (1∶100)，美國Santa Cruz公司產(chǎn)生的KGFR(1∶200)，4 ℃過夜，PBS沖洗，生物素化后加入二抗(羊抗鼠)，PBS沖洗，加入鏈霉素抗生物素-過氧化物酶，北京中杉金橋生物公司產(chǎn)生的二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明，中性樹膠封片。陰性對照以PBS液代替一抗，余下操作同上。

1.2.2 結(jié)果判讀 光學(xué)顯微鏡下，每張切片取5～10個視野,每個視野計數(shù)150個細(xì)胞。KGFR于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜表達(dá)，P16INK4a蛋白于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核表達(dá)。判斷標(biāo)準(zhǔn):以陽性細(xì)胞小于5%為陰性，5%～25%為弱陽性，26%～50%為中陽性，51%～75%為強(qiáng)陽性。

2 結(jié) 果

p16INK4a蛋白與KGFR在宮頸組織中的表達(dá)隨著病理分期的上升而增高，組間p16INK4a蛋白與KGFR表達(dá)陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 P16INK4a蛋白與KGFR表達(dá)與不同病理分期宮頸組織學(xué)類型的關(guān)系[n(%)]

續(xù)表1 P16INK4a蛋白與KGFR表達(dá)與不同病理分期宮頸組織學(xué)類型的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌最重要的病因，高危型 HPV 與宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的發(fā)生密切相關(guān)[3]，用基因分型等技術(shù)可在99.17%的宮頸癌標(biāo)本中檢出高危型HPV，其中以HPV16、18 型最為常見。HPV16型多見于鱗癌，HPV18型則多見于腺癌[4]。近年來研究顯示，抑癌基因p16INK4a幾乎在所有HPV陽性的宮頸病變中表達(dá)[5]。

p16INK4a蛋白由抑癌基因INK4a編碼,被證實(shí)為直接調(diào)控細(xì)胞周期的抑癌基因。p16INK4a通過與CDK4和CDK6結(jié)合發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，調(diào)控細(xì)胞增殖。Braganca等[6]研究發(fā)現(xiàn)，79.2%的宮頸癌患者p16INK4a表達(dá)陽性，該抑癌基因參與宮頸癌的整個病理過程，隨著宮頸病變程度的增加，p16INK4a蛋白的表達(dá)也越來越明顯。Guo等[7]研究顯示，p16INK4a基因?qū)IN的預(yù)測較HPV基因分型更為敏感。本研究對本地區(qū)宮頸病變婦女的p16INK4a蛋白進(jìn)行檢測，同樣表明p16INK4a蛋白與病變的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)屬于纖維母細(xì)胞生長因子家族，主要參與間質(zhì)細(xì)胞與上皮細(xì)胞間的相互作用，與KGFR特異結(jié)合，促進(jìn)上皮細(xì)胞分化、增殖和遷移。KGFR屬于跨膜酪氨酸激酶,由成纖維細(xì)胞生長因子受體2(FGFR2)剪接而成，主要在上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。通過與成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)、FGFR3、FGFR10等受體結(jié)合發(fā)揮作用。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，KGFR與眾多上皮源性腫瘤密切相關(guān)，其中結(jié)腸癌和胰腺癌中KGFR的表達(dá)早已經(jīng)被證實(shí)，表明其在腫瘤演變中起著促進(jìn)作用。Kurban等[8]發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌的CaSKi和HeLa細(xì)胞株中檢測到KGFR，而在ME-180細(xì)胞株中并未發(fā)現(xiàn)，KGFR在正常宮頸上皮及平滑肌上幾乎無表達(dá)，宮頸癌上皮儲備細(xì)胞和鱗狀細(xì)胞KGFR的陽性率高達(dá)86%，而其他非腫瘤區(qū)域及非上皮細(xì)胞和儲備細(xì)胞中則未見KGFR表達(dá)。本研究結(jié)果提示，KGFR的表達(dá)與宮頸病變程度有關(guān)，再次證明KGFR在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要定作用，可與p16INK4a蛋白一同作為預(yù)測因子。

綜上所述，本研究初步證實(shí)KGFR與p16INK4a在本地宮頸病變婦女有一定的表達(dá)，且與病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。為使結(jié)果更加可靠，并為宮頸癌篩查及治療提供可靠的依據(jù)與評估指標(biāo)，將進(jìn)一步增大樣本量進(jìn)行研究。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.044

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1672-9455(2015)06-0825-02

2014-08-01

2014-12-02)