HBV-DNA檢測在乙型肝炎診斷中的價值分析

羅 瀾

(湖北省荊州市公安縣人民醫院檢驗科 434300)

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·臨床研究·

HBV-DNA檢測在乙型肝炎診斷中的價值分析

羅 瀾

(湖北省荊州市公安縣人民醫院檢驗科 434300)

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)-DNA檢測在乙型肝炎診斷中的價值。方法 選取2012年2月至2013年2月收治的門診及住院患者684例，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測HBV血清標記物，根據檢測結果將所有患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組，并采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測HBV-DNA，比較各組 HBV-DNA 陽性檢出率及水平。結果 Ⅰ組(“大三陽”組)患者HBV-DNA陽性檢出率達100.0%，平均水平為5.10×107copy/mL，較其他各組明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)；V組(乙肝兩對半“全陰”組)患者HBV-DNA陽性檢出率為0.0%，平均水平為1.11×102copy/mL。結論 單獨采用ELISA定性檢測HBV血清標志物對乙型肝炎的診斷具有一定的局限性，輔以HBV-DNA的實時熒光定量PCR檢測可提高早期診斷的準確率及靈敏度。

乙型肝炎； 血清標志物； HBV-DNA； 定量檢測

乙型肝炎是全球最常見的慢性傳染性疾病之一，我國慢性乙型肝炎的發病率位居世界首位[1]。據統計，每年因乙型肝炎及其相關性疾病，如乙型肝炎所致肝衰竭等死亡的人數高達25萬，給社會及患者家庭帶來了嚴重的威脅[2]。乙型肝炎屬于病毒性感染疾病，根治極為困難，因此臨床早期診斷顯得尤為重要。目前，臨床對乙型肝炎的檢查主要通過乙型肝炎病毒(HBV)5項血清標志物的定性檢測及HBV-DNA的定量檢測。本研究通過分析HBV-DNA檢測在診斷乙型肝炎中的價值及其與HBV血清標志物的相關性，為臨床診斷乙型肝炎提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2013年2月在本院就診的684例門診及住院患者為研究對象，其中男432例，女252例；年齡1～87歲，平均(33.7±1.1)歲；病程3 d至6年，平均為(1.5±0.1)年。所有患者均晨起抽取空腹靜脈血6 mL，均分為2管，分別進行HBV血清標志物及HBV-DNA檢測。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法及儀器設備 (1)HBV血清標志物的檢測：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(抗-HBe)和乙型肝炎核心抗體(抗-HBc)的檢測采用中山生物公司提供的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒。(2)HBV-DNA檢測：采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)，從血清中提取HBV-DNA加入反應管，放入擴增儀進行擴增，反應結束后由電腦自動分析結果；儀器采用美國MJ公司生產的Option DNA Engine型PCR擴增儀及上海科華生物技術有限公司提供的熒光定量 HBV-DNA試劑盒。所有操作過程均嚴格按照試劑盒要求及防污染措施進行。

1.2.2 分組及指標陽性值界定 按照HBV血清標志物的ELISA檢測結果將所有患者分成5組，Ⅰ組(“大三陽”組)為HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性，Ⅱ組(“小三陽”組)為HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性，Ⅲ組為抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc陽性，Ⅳ組為HBsAg、抗-HBc陽性；Ⅴ組為抗-HBs陽性。未提及者即為陰性。HBV-DNA≤500 copy/mL為陰性，>500 copy/mL為陽性。并根據HBV-DNA檢測結果分為4個水平。

2 結 果

2.1 HBV血清標志物ELISA檢測結果 Ⅱ組患者例數最多，所占百分率達44.0%(301/684)，其次為Ⅰ組，占30.8%(211/684)，均明顯高于Ⅲ組(12.6%)、Ⅳ組(10.8%)、Ⅴ組(1.8%)，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 HBV-DNA實時熒光定量PCR檢測結果 Ⅰ組患者HBV-DNA陽性檢出率達100.0%，HBV-DNA水平較其他各組明顯增高，比較差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 HBV-DNA實時熒光定量PCR檢測結果

3 討 論

由于肝炎病毒的入侵，急慢性肝炎患者的肝細胞受到嚴重的損害。我國目前約有2億人口感染HBV，給社會造成了很大的負擔[3]。HBV屬于一種部分雙鏈DNA病毒，所有遺傳信息均載于DNA片段上，病毒以此復制、增殖。HBV-DNA為無蛋白質包裹的裸露DNA，具有感染性，可單獨完成對宿主的侵襲，使宿主體內出現完整的HBV顆粒[4]。由于HBV感染早期的臨床表現不典型，大量乙型肝炎患者就診時已出現并發癥，這給乙型肝炎的臨床治療帶來了很大的困難，極大地影響患者預后[5]。因此，早期診斷與預防乙型肝炎至關重要。

HBV-DNA檢測的主要目的是判斷患者的病毒復制量，反映疾病的傳染性，尤其在判斷乙型肝炎的轉歸及用藥前后的療效等方面有重要的參考價值，同時也是重要的抗病毒治療用藥指征之一[6]。本研究采用實時熒光定量PCR對HBV-DNA進行檢測，可以準確地為乙型肝炎的診斷提供依據。實時熒光定時PCR是臨床基因診斷的有力手段，該方法現已采取閉管方式進行擴增和檢測，克服了以往普通 PCR的污染問題，進一步增加了檢測的可信度[7]。此外，熒光探針加強了PCR檢測的特異性，使其能直接定量檢測HBV水平，準確地反映HBV的感染、復制及治療情況[8]。并且，該方法的實際操作過程可設陽性梯度，定量范圍極廣。而ELISA作為臨床診斷HBV感染的傳統方法，與實時熒光定量PCR相比，該方法是一種檢測病毒感染的間接手段，反映了人體對HBV的免疫反應狀態[9]。

本研究684例患者血清均經ELISA檢測乙型肝炎兩對半，結果顯示“小三陽”患者所占百分率最高(44.0%)，其次為“大三陽”患者(30.8%)，均明顯高于其他各組，比較差異有統計學意義(P<0.05)。說明目前乙型肝炎的患病率高，但早期檢出率低。對所有患者行HBV-DNA的實時熒光定量PCR檢測，“大三陽”患者HBV-DNA陽性檢出率達100.0%，平均水平為5.10×107copy/mL，較其他各組明顯增高，比較差異有統計學意義(P<0.05)。而在乙型肝炎兩對半全陰的Ⅴ組，HBV-DNA定量檢測平均水平為1.11×102copy/mL，陽性率為0.0%。HBV-DNA的定量檢測可以作為ELISA的補充，充分反映HBV在體內的感染與復制狀況；并且，在臨床干預后檢測HBV-DNA水平還可以判斷療效，為進一步指導臨床治療提供依據[10]。

綜上所述，單純的ELISA定性檢測乙型肝炎血清標志物對乙型肝炎的診斷具有一定的局限性，輔以HBV-DNA的定量檢測能提高乙型肝炎早期診斷的準確率及靈敏度。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.045

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1672-9455(2015)06-0827-01

2014-07-27

2014-11-22)