3項聯合檢測對手足口病患兒腦神經損傷的診斷價值*

陳 錦，徐紅煒，張 振，胡 波

(1.湖北省咸寧市通城縣人民醫院檢驗科 437400；2.湖北省武漢市婦女兒童醫療保健中心檢驗科 430016；3.廣東省中山大學附屬第三醫院，廣州 510275)

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·臨床研究·

3項聯合檢測對手足口病患兒腦神經損傷的診斷價值*

陳 錦1，徐紅煒1，張 振2△，胡 波3

(1.湖北省咸寧市通城縣人民醫院檢驗科 437400；2.湖北省武漢市婦女兒童醫療保健中心檢驗科 430016；3.廣東省中山大學附屬第三醫院，廣州 510275)

目的 探討聯合檢測血清S100β蛋白(S100β)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)對手足口病(HFMD)患兒腦神經損傷的診斷價值。方法 將246例HFMD患兒按影像學檢測結果分為重型(63例)和輕型(183例)兩組，入院后第1～7天每天上午抽靜脈血后，采用酶聯免疫吸附試驗檢測246例HFMD患兒S100β、NSE和MBP。同時選擇66例健康兒童作為健康對照組。結果 63例重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP結果均顯著升高，其檢測值與183例輕型HFMD患兒及66例健康對照者比較差異有統計學意義；輕型患兒與健康對照組相比S100β差異有統計學意義，而NSE和MBP檢測結果差異無統計學意義。結論 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP存在不同的變化趨勢，聯合檢測S100β、NSE和MBP可提高HFMD患兒腦神經損傷的診斷率、明確療效和監測預后。

S100β蛋白； 神經元特異性烯醇化酶； 髓鞘堿性蛋白； 手足口病

手足口病(HFMD)是由多種腸道病毒感染引起的兒科常見傳染病，以5歲以下兒童多發，臨床主要以口腔、手掌和足趾等部位出現斑丘疹、皰疹為特征。患者病情一般較輕，預后良好，但個別患者可發展為重癥病例，出現腦神經、心肌損傷等并發癥[1-2]。臨床對HFMD患兒是否有腦神經損傷較難診斷，S100β蛋白(S100β)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)水平的變化可反映神經元、膠質細胞、神經髓鞘膜結構損傷嚴重程度的情況[3]。本文通過檢測246例HFMD患兒S100β、NSE和MBP，旨在探討聯合檢測S100β、NSE和MBP對HFMD患兒腦神經損傷的診斷價值和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2014年1月通城縣人民醫院收治的HFMD患兒246例，這些患兒均符合1995年第四屆全國手足口病修訂方案腦血管診斷標準，其中男126例，女120例，年齡0.3～6.0歲。246例HFMD患兒按CT或MRI影像學檢測結果是否有病理性變化分為重型(63例)和輕型(183例)兩組,所有HFMD患兒入院后馬上進行對癥治療。另選擇體檢健康的66例健康兒童作為健康對照組，其中男39例，女27例，年齡0.5～6.0歲，志愿兒童均無心、肝、腎及免疫系統疾病。兩組性別、年齡、體質量等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 標本采集方法 HFMD患兒入院后第1～7天共采集7次患兒標本，每天上午清晨空腹采集患兒外周靜脈血3～5 mL，經1 000 g離心15 min，分離血清(溶血標本丟棄，重新取樣)裝于密封無污染的EP試管中，分離血清后2 h內送檢。健康對照組標本采集和檢測方式與患兒一致。

1.3 NSE、MBP和S100β的檢測 采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行NSE、MBP和S100β測定。NSE和MBP試劑盒購自上海藍基(BlueGene)生物科技有限公司，S100β試劑盒購自美國Uscnlife Science&Technology公司USCNUFETM試劑。酶標儀為美國產Multiskan Fc型酶標儀。實驗操作步驟嚴格按照試劑盒使用說明書進行，試劑在有效期內使用，所有檢測項目保證室內與室間質控均在控。

2 結 果

2.1 重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果 見表1。HFMD患兒入院第1～7天共檢測7次重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP，與健康對照組相比差異均有統計學意義(P<0.01)。

表1 重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果

注：與健康對照組比較，#P<0.01。

2.2 輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果 見表2。HFMD患兒入院第1～7天，共檢測7次輕型HFMD患兒S100β，與健康對照組比較差異有統計學意義(P<0.01)，NSE和MBP檢測結果與健康對照組相比差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果

注：與健康對照組比較，#P<0.01。

2.3 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果 見表3。HFMD患兒入院第1～7天，共檢測7次重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP，與輕型HFMD患兒相比差異均有統計學意義(P<0.01)。

表3 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結果

注：與輕型HFMD患兒比較，#P<0.01。

3 討 論

HFMD根據發病經過、病情特點和病變部位，分為重型和輕型HFMD，二者臨床表現差異不大。對于HFMD等影像學檢測可見的腦部損傷較好判斷，而對于影像學檢測不出的HFMD神經損傷臨床較難判斷，HFMD神經受損后的預后較差，因此監測HFMD患兒的神經受損情況非常重要[4-5]。

S100β是一類鈣離子結合蛋白，相對分子質量較小，但具有廣泛生物學活性，主要存在于中樞神經系統的少突神經膠質細胞和星形細胞中[6]。中樞神經系統細胞損傷后，S100β蛋白首先從胞液進入腦脊液，再經被破壞的血-腦脊液屏障進入血液[7-8]。S100β在正常情況下發揮重要的生理作用，但分泌過高具有神經毒性。因此，S100β蛋白被認為是中樞神經系統損傷較特異和靈敏的標志物，其含量的高低可反映患兒神經元和膠質細胞損害的嚴重程度。研究發現，細胞外高濃度S100β可刺激炎癥因子表達，導致細胞凋亡。在影像學檢查未發現異常前，腦損傷患兒血清S100β已有明顯升高，S100β是早期評價亞臨床腦損傷的有效標志物[9]。本研究結果顯示，重型和輕型HFMD患兒血清S100β含量均明顯高于健康對照者，差異有統計學意義(P<0.05)，重型與輕型HFMD血清S100β含量差異也有統計學意義(P<0.01)。其結果說明S100β可以較敏感地反映HFMD患者神經損傷的程度，可以檢測出無影像學變化的腦神經損傷情況。S100β是HFMD患者腦神經損傷的極敏感指標，對腦出血患兒神經損傷轉歸的判斷具有重要意義。

NSE是主要存在于神經元細胞中的一種可溶性胞漿蛋白，主要參與糖酵解、催化磷酸烯醇化丙酮酸的生成。在顱腦外傷時由于神經元細胞完整性破壞，使大量NSE從細胞內釋放出來，透過破壞的血腦屏障進入血液[10]。正常體液中NSE 含量甚微，但當腦受到損傷時，神經細胞因受損而變性、壞死崩解，該酶可大量進入腦脊液和血液中。因此，血液中NSE含量的高低可反映中樞神經系統受損的程度，是反映神經元細胞受損程度較好的生化指標[10-11]。本研究結果顯示，重型HFMD患兒血清NSE含量明顯高于輕型HFMD患兒和健康對照者，差異有統計學意義(P<0.01)，輕型HFMD患兒血清NSE只稍高于健康對照者，二者差異無統計學意義(P>0.05)，由此說明血清NSE的檢測結果與影像學結果基本一致，可以比較準確地反映HFMD患兒中樞神經系統受損的情況。

文獻[12]顯示NSE可能會發生局限性升高，升高24 h后即會下降。NSE沒有年齡的區別，但需要注意在溶血的情況下，NSE可以發生假陽性反應[13]。有人用不同的S100β和NSE濃度為分界標準評估預后，將所得的真陽性率和假陽性率作圖所得的曲線比較，發現在相同的敏感度下S100β對預后的評估較NSE更特異，在相同的特異度下S100β對預后的評估也較NSE更敏感，由此說明S100β對預后的評估較NSE更敏感、更特異，這與本研究檢測結論一致。由于S100β具有熱穩定性，不受溶血、低溫、肝素等因素影響，并可在室溫或4 ℃全血標本中保存48 h而被認為有較好的敏感性和特異性，故很多學者主張S100β和NSE二者結合更有利于腦損傷的臨床判斷。

MBP是中樞神經系統少突細胞和周圍神經系統雪旺細胞合成的一種強堿性膜蛋白，分為中樞型(A1)和周圍型(P2)兩種類型，A1存在于中樞神經系統，由少突膠質細胞合成和分泌，腦白質含量最高，P2則由雪旺細胞合成和分泌，存在于周圍神經髓鞘膜中[14]。MBP是神經組織所特有的膜蛋白成分，對維持髓鞘結構的完整和功能具有重要作用。當髓鞘破壞時，MBP可釋放入腦脊液和血液，其含量變化是反映中樞神經有無實質性損害，尤其是髓鞘有無脫失的特異性標志物，對判斷病情嚴重程度和預后有重要意義。與S100β比較，作為中樞神經系統生化標志物MBP特異性更強，但敏感性較低[15]。與S100β主要用于疾病診斷和病情評估不同，MBP還用于臨床治療，標志有MBP微基因的雪旺細胞不僅能在宿主脊髓內存活，而且還有非常活躍的功能，如分泌多種神經營養因子維持受損神經元的存活，為再生提供先決條件。本研究結果顯示，重型HFMD患兒血清MBP水平明顯高于輕型HFMD患兒和健康對照者，差異有統計學意義(P<0.01)，而輕型HFMD患兒血清MBP只稍高于健康對照者，二者差異無統計學意義(P>0.05)，由此說明血清MBP的檢測結果與影像學結果也基本一致。

綜上所述，重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP存在不同的變化趨勢，S100β可用于診斷HFMD患兒早期神經損傷，可以反映影像學無病例改變的腦神經損傷，而NSE和MBP則可用于HFMD患兒神經損傷的病情變化觀察，聯合檢測S100β、NSE和MBP可提高HFMD患兒神經損傷的診斷率、明確療效和監測預后。

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教育部第44批留學回國人員科研啟動基金項目(2012-940)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.032

A

1672-9455(2015)03-0368-02

2014-07-19

2014-10-15)

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