高危人群中紅細胞Duffy抗原與HIV感染關系研究*

王勝藍，吳明瞬，魏祿川

(四川省涼山彝族自治州中心血站，四川西昌 615000)

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·論 著·

高危人群中紅細胞Duffy抗原與HIV感染關系研究*

王勝藍，吳明瞬，魏祿川

(四川省涼山彝族自治州中心血站，四川西昌 615000)

目的 探討紅細胞Duffy抗原和人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的關系。方法 2008年在涼山州疾病預防控制中心和涼山州皮膚病性病防治站檢測的高危人群427例，根據HIV-1檢測篩查和確診試驗結果分為試驗組和對照組，兩種試驗結果不一致者不納入該研究。應用血清學方法進行Duffy血型表型鑒定，比較兩組Duffy血型表型分布及其與該地區已知報道的差異，以及不同Duffy血型表型的HIV感染率。結果 共322例高危人群進行Duffy血型抗原鑒定，其中HIV感染156例(試驗組)，未感染166例(對照組)，高危人群Duffy血型表型分布與同地區同民族人群比較差異無統計學意義(P>0.05)。322例高危人群中Fy(a+b-)304例(94.41%)，其中試驗組146例，對照組158例；Fy(a+b+)14例(4.35%)，其中試驗組6例，對照組8例；Fy(a-b+)4例(1.24%)，均在試驗組；兩組均未檢出Fy(a-b-)表型；兩組Duffy血型表型分布比較差異無統計學意義(P>0.05)。Fy(a-)與Fy(a+)高危人群，以及Fy(b+)與Fy(b-)高危人群HIV-1感染率比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論 流行病學調查尚不能認為紅細胞Duffy 抗原與HIV感染相關，需進一步的深入研究。

Duffy抗原/趨化因子受體； 人類免疫缺陷病毒； 血型； 高危人群

Duffy血型是人類紅細胞血型系統中較為重要的血型之一,其表現型由紅細胞表面攜帶的血型抗原蛋白決定，在新生兒溶血病、自身免疫性疾病、移植排斥反應、炎癥及腫瘤等方面有著重要的臨床意義[1]。紅細胞Duffy抗原與人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的關系目前尚存在爭議。本研究應用血清學方法對HIV-1感染者和高危人群中非感染者進行Duffy血型表型檢測,由此調查紅細胞Duffy抗原和HIV感染是否相關。現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 2008年在涼山州疾病預防控制中心、涼山州皮膚病性病防治站檢測者中，經病史詢問有下列高危行為之一者視為HIV高危人群：靜脈吸毒、性工作者及多性伴侶[2]。共427例，其中男304例、女123例；年齡12～63歲，年齡中位數為26歲；均為彝族；互為性伴侶者26例，未見同性伴侶。所有研究對象均采集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝全血5 mL，血樣均經EDTA抗凝后離心，血漿部分用于HIV檢測，紅細胞用于Duffy表現型檢測。

1.2 儀器與試劑 微量移液器(上海百德公司，型號BI0HIT)；洗板機(奧地利安圖斯公司，型號Fluido)；酶標儀(奧地利安圖斯公司，anthos 2010)；孵育箱(天津泰斯特儀器公司，型號IDH4000AB)；酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑(上海梅里埃生物工程有限公司，批號20071205)；全自動免疫印跡儀(美國MP公司，型號AutoBlot System 20)；免疫印跡試劑(上海英旻泰生物技術有限公司，批號IMT0712002)；血清學離心機(日本KuBoTa公司，型號KA-2200)；水浴箱(上海躍進醫療器械廠制造，型號HHW21600s)；IgG型抗-Fya、抗-Fyb單克隆試劑(美國Immucor公司，批號FYA64H-1、6061002280、FYB70H-1、6021004300)；抗球蛋白血清(中國醫學科學院輸血研究所，批號20091012)。所有試劑均在有效期內使用。

1.3 方法

1.3.1 HIV-1檢測和Duffy血型表型鑒定方法 HIV-1檢測篩查試驗為固相ELISA，確認試驗為免疫印跡法(WB)；Duffy血型表型鑒定使用IgG型抗-Fya和抗-Fyb，采用間接抗球蛋白法，根據抗原抗體反應可以鑒定出4種紅細胞表面抗原表型：Fy(a+b-)、Fy(a+b+)、Fy(a-b+)、Fy(a-b-)。所有試驗方法和步驟參考試劑說明書。表型分布結果與本課題前期研究結果[3]、本地區彝族人群Duffy血型表型分布[4]進行比較。

1.3.2 研究分組 HIV-1檢測篩查和確認試驗均為陽性則視為感染者納入試驗組；篩查試驗陰性視為未感染者納入對照組；篩查和確認試驗結果不一致者未納入本研究；為防止窗口期檢測結果干擾研究，對照組于3個月后再次抽取標本進行HIV檢測，并根據結果重新進行分組。

1.4 統計學處理 采用SPSS19.0統計學軟件進行數據處理與統計學分析，計數資料以百分比表示，組間比較采用χ2檢驗；以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HIV篩查、確認試驗及分組結果 427例高危人群中HIV-1篩查試驗陽性者261例，其中經確認試驗重復陽性者156例，篩查試驗陽性而確認試驗陰性者105例未納入本研究，篩查試驗陰性者166例經3個月后復查均仍為陰性。根據分組方法，試驗組156例(48.45%)，對照組166例(51.55%)，共322例進行Duffy血型抗原鑒定。

2.2 血清學Duffy血型抗原鑒定結果 Fy(a+b-)者304例(94.41%)，Fy(a+b+)者14例(4.35%)，Fy(a-b+)者4例(1.24%)，未檢出Fy(a-b-)表型，表型分布結果與本課題前期研究結果比較差異無統計學意義(χ2=8.80，P>0.05),同時與本地區彝族人群Duffy血型表型分布比較，差異無統計學意義(χ2=6.12,P>0.05)。

2.3 Duffy血型表型與HIV-1感染率 322例高危人群中，確認HIV-1感染者156例，每種Duffy血型表型的HIV-1感染者和未感染者例數和百分比，見表1。試驗組與對照組Duffy血型表型比較差異無統計學意義(χ2=4.45，P>0.05)。按照Fya抗原的狀態分為Fy(a+)和Fy(a-)組，Fy(a-)組HIV-1感染率為100.00%(4/4)，Fy(a+)組為47.80%(152/318)，Fy(a-)組比Fy(a+)組的HIV-1感染率高,但組間比較差異無統計學意義(χ2=2.47,P>0.05)；按照Fyb抗原的狀態分為Fy(b+)和Fy(b-)組，Fy(b-)組HIV-1感染率為48.03%(146/304)，Fy(b+)組的HIV-1感染率為55.56%(10/18)，Fy(b+)組比Fy(b-)組的HIV-1感染率高,但組間比較差異無統計學意義(χ2=0.39,P>0.05)。

表1 各Duffy血型表型HIV-1感染率[n(%)]

3 討 論

近年來Duffy抗原在HIV-1感染過程中的作用引起了研究者的關注[5]。He等[6]發現個體對HIV-1的易感性與紅細胞Duffy抗原的表達相關，HIV-1通過Duffy抗原與紅細胞結合，已經感染HIV的個體其Duffy抗原的缺失可減緩疾病的發展進程。而Beck等[7]研究表明，紅細胞Duffy抗原陽性或陰性的個體，其紅細胞在體外均可選擇性地與富集感染性HIV-1病毒顆粒結合，因此推測紅細胞可能并非通過Duffy抗原與HIV-1結合。所以,盡管Duffy抗原/趨化因子受體(DARC)對HIV-1感染性和疾病進展的影響在理論上是完全可能的,但實際情況仍有待于進一步的研究[8]。流行病學研究表明，不同民族、地區的Duffy血型系統分布不同，本研究旨在流行病學調查的基礎上探討Duffy抗原是否與HIV-1感染有關。結果顯示：高危人群的Duffy血型抗原分布與相同地區同一民族比較差異無統計學意義(P>0.05)，高危人群中HIV-1感染者與未感染者的Duffy血型表型分布比較差異無統計學意義(P>0.05)。

Duffy抗原和DARC是同一物質[9]。Duffy血型不同的表現型，決定其紅細胞表面是否表達DARC及其表達量。Fy(a-b-)的個體紅細胞表面沒有DARC，而其他表現型個體的紅細胞膜表面具有不同的DARC配體結合力和DARC結合數量。Fy(a+)個體比Fy(a-)個體表達更多的DARC[10],Fy(a+)個體很可能比Fy(a-)個體具有更強的趨化因子結合能力[9]，這似乎可以推論，就DARC而言Fya-個體更不容易感染HIV-1。但在本研究中，HIV-1感染者中發現了4例Fy(a-)個體，未感染者中卻未發現，雖然比較差異無統計學意義(P>0.05)，尚不能據此認為DARC的數量與HIV-1感染無關，但這至少為紅細胞Duffy 抗原與HIV感染的相關性提供了相反的證據。

綜上所述，本研究顯示流行病學調查尚不能認為紅細胞Duffy抗原與HIV感染相關。這與文獻[6]的結論相反，而與文獻[7，11]的研究結果相似。造成結論不一致的原因可能與試驗設計、樣本量大小、試驗方法的差異等因素有關。

(本研究得到中國醫學科學院輸血研究所宋寧教授、涼山州疾病預防控制中心衛大英教授、涼山州皮膚病性病防治站朱國平主任的大力支持，特此感謝！)

[1]Daniels GL.The molecular genetics of blood group polymorphism[J].Hum Genet,2009,126(2):729-742．

[2]方鵬騫，張佳慧，徐娟．我國艾滋病高危人群定義與范疇的界定[J]．中國艾滋病性病，2006，12(5)：470-471．

[3]王勝藍，吳明瞬，劉紅英，等．涼山地區彝族人群Duffy血型表型、基因型分布[J]．中國輸血雜志，2014，27(2)：158-159． [4]辛友盼，田力，宋寧，等．四川地區彝族ABO等8個血型的分子遺傳學研究[J]．中國輸血雜志，2013，26(1)：41-45．

[5]周昌華．Duffy 抗原的研究進展[J]．國際輸血及血液學雜志，2011，34(5)：246-248．

[6]He W，Neil S，Kulkarni H，et al．Duffy antigen receptor for chemokines mediates trans-infection of HIV-1 from red blood cells to target cells and affects HIV-AIDS susceptibility[J]．Cell Host Microbe，2008，4 (1)：52-62．

[7]Beck Z，Brown BK，Wieczorek L，et al．Human erythrocytes selectively bind and enrich infectious HIV-1 virions[J]．PLoS One，2009，4 (12)：e8297-e8300．

[8]鄭敬民，尹廣．達菲抗原——一個既老又新的多功能分子[J]．醫學研究生學報，2010，23(5)：551-556．

[9]劉小豐，歐周羅，邵志敏．漢族女性乳腺疾病患者的Duffy表型多態性與乳腺癌的關系[J]．中國癌癥雜志，2007，17(12)：935-938．

[10]Woolley IJ，Hotm ire KA，Sramkoski RM，et al． Differential expressionof the Duffy antigen receptor for chemokines according to RBC age and FY genotype[J]．Transfusion，2000，40 (8)：949-953．

[11]Winkler CA，An P，Johnson R，et al．Expression of Duffy antigen receptor for chemokines (DARC) has no effect on HIV-1 acquisition or progression to AIDS in African Americans[J]．Cell Host Microbe，2009，5 (5)：411-413．

Research on relationship between erythrocyte Duffy antigen and HIV infection in high-risk group*

WANGSheng-Lan,WUMing-Shun,WEILu-Chuan

(CentralBloodStationsofLiangshanAutonomousPrefecture,Xichang,Sichuan615000,China)

Objective To investigate the relationship between erythrocyte Duffy antigen and human immunodeficiency virus(HIV) infection.Methods 427 cases of high-risk group in the Liangshan Prefecture Center for Disease Control and Prevention and the Liangshan Prefecture Satation for Dermatosis and Venereal Disease Prevention and Treatment during 2008 were divided into experimental group and control group according to the results of screening and confirming test，and cases with inconsistent results were not enrolled in this study.The serological method was adopted to identify the Duffy blood group phenotype.The difference in the distribution of Duffy blood group phenotype between the two groups,the differences of the distribution between this report and other published reports in this area,and HIV infection rate in different Duffy blood group phenotypes were compared.Results A total of 322 cases were carried out Duffy blood group antigen identification，156 cases were HIV infection(experimental group)and 166 cases were non-HIV infection(control group). The distribution of the Duffy blood group phenotype had no statistical difference between the high-risk population and the population of the same nationality in the same area (P>0.05).Among 322 high-risk cases,304 cases (94.41%) were the phenotype Fy (a+b-),in which the experimental group had 146 cases and the control group had 158 cases;14 cases(4.35%) were the phenotype Fy(a+b+),in which the experimental group had 6 cases and the control group had 8 case;only 4 cases (1.24%) were phenotype Fy(a-b+),which all were in the experimental group;no case of phenotype Fy(a-b-) was detected in the two groups;the distribution of the Duffy blood group phenotype had no statistical difference between the two groups(P>0.05).The HIV infection rate in the high-risk population had no statistical difference between the Fy(a-) and Fy(a+) high-risk populations and between the Fy(b+) and Fy(b-) high-risk populations(P>0.05).Conclusion It may not be considered from the epidemiological investigation that the erythrocyte Duffy antigen is related with the HIV infection,which needs to conduct further deep research.

Duffy antigen/receptor for chemokines； human immunodeficiency virus； blood group； high risk group

四川省衛生廳科研項目(130525)；四川省涼山州科技局科研項目(12YYJS0013)。

王勝藍，男，本科，副主任檢驗師，主要從事輸血檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.002

A

1672-9455(2015)05-0580-02

2014-11-10

2014-12-10)