原發性膽汁性肝硬化自身抗體檢測結果分析及臨床應用

秦 雯，余 俊

(云南省昆明市第一人民醫院檢驗科 650011)

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·論 著·

原發性膽汁性肝硬化自身抗體檢測結果分析及臨床應用

秦 雯，余 俊

(云南省昆明市第一人民醫院檢驗科 650011)

目的 探討自身抗體檢測在原發性膽汁性肝硬化(PBC)患者中的臨床應用價值。 方法 選擇2011年5月至2012年5月在該院住院治療，并接受自身免疫性肝病抗體檢測的39例PBC患者為PBC組；并選擇該院住院治療并接受ENA檢測的患者45例為疾病對照組；另選擇該院體檢中心自身抗體均為陰性的40例體檢人員為健康對照組。采用間接免疫熒光法檢測抗核抗體(AMA)。免疫印跡法檢測自身免疫性肝病抗體，包括抗-AMA-M2抗體、抗-SP100抗體、抗-GP210抗體、抗肝腎微粒體抗體Ⅰ型(LKM-1)、肝細胞溶質抗原Ⅰ型抗體(LC-1)和抗可溶性肝抗原抗體(SLA)。結果 PBC組中有27例AMA抗體陽性，抗體陽性率為69.2%，其中顆粒型16例、著絲點型6例、胞質型5例；抗-AMA-M2抗體陽性率為56.4%，抗-SP100抗體陽性率為41.0%，抗-GP210抗體陽性率為33.3%，LKM-1、LC-1抗體和SLA抗體均陰性。疾病對照組中AMA抗體的陽性率為62.3%，其中均質型4例、胞質型1例、著絲點型7例、顆粒型12例，其他抗體均未檢出。健康對照組自身免疫性肝病抗體均為陰性。PBC組中抗-GP210抗體、抗-SP100抗體、抗-AMA-M2抗體陽性率與疾病對照組及健康對照組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 PBC患者體內可以檢測到多種自身抗體，其中GP210抗體、SP100抗體、抗-AMA-M2抗體檢測對PBC的早期診斷具有重要意義。

原發性膽汁性肝硬化； 自身抗體； 抗核抗體

自身免疫性肝病是一組病因和發病機制尚不完全清楚，但多認為和自身免疫有關的肝臟疾病，臨床多表現為黃疸、發熱、關節炎等癥狀，實驗室檢測可發現自身抗體，有肝酶持續性升高，球蛋白升高，亦可合并其他系統的自身免疫性疾病。根據其臨床表現、影像學改變、組織病理學特點可分為3種類型，包括自身免疫性肝炎(AIH)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)和原發性硬化性膽管炎(PSC)[1]。其中PBC是一種慢性肝內膽汁淤積性疾病，以中老年女性居多，絕大多數患者往往在疾病晚期才得以確診。2000年美國肝病學會(AASLD)制訂的PBC診斷指導中認為[2]，線粒體抗體(AMA)陽性是診斷本病的重要免疫學指標，95%～98%的PBC患者AMA陽性。據國內報道，只要AMA抗體和AMA-M2抗體陽性的患者，即使沒有臨床癥狀，最后都會出現膽汁淤積的生物化學改變和病理改變[3]。由此可見AMA抗體和AMA-M2抗體的出現可早于臨床表現若干年，對PBC有早期診斷價值，本研究目的在于進一步明確PBC患者自身抗體檢測的價值及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年5月至2012年5月在本院住院治療，并接受自身免疫性肝病抗體檢測的39例PBC患者為PBC組，其中女25例，男14例；平均年齡(63.0±12.8)歲。PBC診斷標準采用2000年AASLD的PBC診斷指導建議。選擇同期在本院住院治療并接受ENA檢測的45例患者為疾病對照組，其中男15例，女30例；平均年齡(59.2±22.2)歲。45例疾病對照組患者主要為AIH、干燥綜合征(SS)、系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕關節炎(RA)、MCTC等自身免疫性疾病。選擇同期在本院體檢中心自身抗體均為陰性的40例體檢人員為健康對照組，其中女17 例，男23例，平均年齡(47.9±19.3)歲。3組間一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2 方法 免疫印跡法檢測自身免疫性肝病抗體，包括抗-AMA-M2抗體、抗-SP100抗體、抗-GP210抗體、抗肝腎微粒體抗體Ⅰ型(LKM-1)、肝細胞溶質抗原Ⅰ型抗體(LC-1)和抗可溶性肝抗原抗體(SLA)。將分別包被有多種純化抗原的膜條作為固相，將檢測膜條放置在溫育槽內，室溫加入標本緩沖液在搖床上溫育5 min；血清用標本緩沖液1∶101稀釋后與膜條反應，室溫振蕩孵育30 min；加入已稀釋的酶結合物(堿性磷酸酶標記的抗人IgG)，室溫振蕩孵育30 min，加入底物液振蕩孵育10 min，終止反應，風干后用標準對照膜條圖觀察膜條，清晰顯色判為陽性。試劑盒由IMTEC-LIVER LIAS醫學實驗診斷公司提供，嚴格按試劑說明書進行操作。

1.3 統計學處理 應用SPSS16.0統計軟件包對數據進行統計學處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗；檢驗水準α=0.05，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組自身免疫性肝病抗體檢測結果比較 PBC組中有27例AMA抗體陽性，抗體陽性率為69.2%，其中顆粒型16例、著絲點型6例、胞質型5例；抗-AMA-M2抗體陽性率為56.4%，抗-SP100抗體陽性率為41.0%，抗-GP210抗體陽性率為33.3%，LKM-1、LC-1抗體和SLA抗體均陰性。疾病對照組中AMA抗體的陽性率為62.3%，均質型4例、胞質型1例、著絲點型7例、顆粒型12例，其他抗體均未檢出。健康對照組自身免疫性肝病抗體均為陰性。PBC組中抗-GP210抗體、抗-SP100抗體、抗-AMA-M2抗體陽性率與疾病對照組及健康對照組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。而PBC組中AMA抗體陽性率與疾病對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組自身免疫性肝病抗體檢測結果比較[n(%)]

2.2 抗-AMA-M2陰性患者中自身抗體的分布 39例PBC患者中有17例抗-AMA-M2陰性，而這17例患者都存在1種或2種(抗-GP210抗體、抗-SP100抗體)抗體陽性的組合，17例抗-AMA-M2陰性患者有12例抗-SP100抗體陽性，占70.6%，有4例抗-GP210抗體陽性，占23.5%。

3 討 論

隨著自身免疫性肝病抗體檢測技術的日益提高以及在臨床診斷中的廣泛應用，PBC的發現率有逐漸增高的趨勢[4]。本研究39例PBC患者中女性25例，占64.1%，男14例，占35.9%，平均年齡(63.0±12.8)歲，由此可見PBC以中老年女性居多。AMA抗體在PBC組中的陽性率為69.2%，在疾病對照組中的陽性率為62.3%，兩組比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明AMA抗體對于自身免疫性肝病的分型診斷意義不大。有文獻報道，PBC患者AMA抗體的常見熒光模式為著絲點型、核膜型和核點型，其中核膜型AMA是PBC的一個特異性血清學指標，它們的出現有助于 PBC的診斷[5]，而本研究中PBC組AMA核型分別為顆粒型16例、占59.3%，著絲點型6例、占22.2%，胞質型5例、占18.5%，這與上述報道不相符，分析原因可能為種族、所用試劑不同或操作人員之間的差異所致。

自身免疫性肝病特異性抗體是自身免疫性肝病診斷和分型的主要參考指標。PBC患者體內可出現多種自身抗體，其中最重要的是AMA，其抗體陽性率可高達95%，PBC患者在臨床癥狀、生化和組織學異常表現出現之前，血清中即可出現高滴度的AMA。AMA的靶抗原有M1～M9 9個亞型，其中M2是PBC患者的標志性抗體，敏感性為95%～98%，特異性為86%～97%[6-7]。而本研究中抗-AMA-M2抗體的敏感性為56.4%，比以上報道的結果低，究其原因可能與檢測方法的差異及種族等因素有關。因本院采用單獨天然的M2 抗原檢測方法，比采用天然M2抗原和重組蛋白BPO檢測抗-AMA-M2抗體的靈敏度要低，也可能是在患者資料收集中掌握的診斷標準有差異所致。同時也可能與PBC患者體內的抗體轉為陰性有關，此尚需進行進一步研究。39例PBC患者中有17例抗-AMA-M2陰性，而這17例患者都存在1種或2種(抗-GP210抗體、抗-SP100抗體)抗體陽性的組合，因此抗-GP210抗體、抗-SP100抗體、抗-AMA-M2抗體同時檢測可以更好地輔助PBC的診斷。

抗-SP100抗體靶抗原是相對分子質量為100×103的可溶性酸性磷酸化核蛋白，點狀分布于細胞核內[8]，抗-SP100對于PBC的診斷更具特異性(94%)[9]。本研究中該抗體在PBC中陽性率為41.0%，在其他肝病患者中呈陰性。抗-SP100抗體在AMA陰性的PBC患者中陽性率為60.0%，明顯高于AMA陽性的患者(20.0%)，因而對AMA陰性的PBC患者診斷具有重要意義[10]。抗-GP210 抗體被認為是PBC的高度特異性抗體，其診斷PBC的特異性高達96%～99%，本研究中其陽性率為33.3%，和張洋等[10]文獻報道基本一致，表明PBC患者中抗-GP210抗體陽性率較高，可以作為PBC診斷的初篩試驗。本研究除了檢測AMA、抗-AMA-M2抗體、抗-SP100抗體、抗-GP210抗體外，還檢測了與自身免疫性肝病相關的LKM-1、LC-1抗體、SLA抗體，但在PBC患者中均未檢測到與AIH特異性相關的這幾種抗體。

綜上所述，AMA抗體、抗-GP210抗體、抗-SP100抗體、抗-AMA-M2抗體在PBC患者中有較高的檢出率，同時這幾種抗體在PBC疾病中的表達具有差異性，因而不能忽視任何一個抗體在PBC疾病中的陽性表達，只要有一種抗體陽性，都應進一步檢查其他以明確診斷。臨床應根據自身特異性抗體的聯合檢測結果，及時對PBC做出早期診斷，才能防止PBC的漏診。

[1]Joshi S,Cauch-Dudek K,Heathcote EJ,et al.Antimitochondrial antibody profiles:are they valid prognostic indicators in primary biliary cirrhosis[J].Am J Gastroenterol,2002,97(4):999-1002.

[2]Heathcote EJ.Management of primary biliary cirrhosis.The American Asociation for the Study of Liver Diseases practice guidelines[J].Hepatology,2000,31(4):1005-1013.

[3]許蓓，謝青．自身免疫性肝炎的研究進展[J]．肝臟，2007，6(3)：200-203．

[4]Muratori P,Muratori L,Ferrari R,et al.Characterization and clinical impact of antinuclear antibodies in primary biliary cirrhosis[J].Am J Gastroenterol,2003,98(2):431-437.

[5]Muratori P,Granito A,Pappas G,et al.Autoimmune Liver Disease 2007[J].Mol Aspects Med,2008，29(1/2):96-102.

[6]Qiu DK，Li XM，Wei J，et al.Clinical features of 107 autoimmune hepatitis patients and 30 of them with AIH-primary biliary cirrhosis overlapsyndrome [J].Zhong hua Gan Zang Bing Za Zhi，2008，16(5)：367-371.

[7]Bogdanos DP,Baum H,Butler P,et al.Association between the primary biliary cirrhosis specific anti-sp100 antibodies and recurrent urinary tract infection[J].Dig Liver Dis,2003,35(11):801-805.

[8]Muratori P,Muratori L,Cassani F,et al.Anti-multiple nuclear dots (anti-MND) and anti-SP100 antibodies in hepatic and rheumatological disorders[J].Clin Exp Immunol,2002,127(1):172-175.

[9]Leachier V.Primary billiard cirrhosis-presentation and diagnosis[J].Clin Liver Dis,2003,7(5):741-758.

[10]張洋，李永哲，馮雪，等．原發性膽汁性肝硬化自身抗體譜的檢測及臨床應用[J]．中華檢驗醫學雜志，2009，32(7)：760-763．

Results analysis and clinical application of auto-antibodies detection in primary biliary cirrhosis

QINWen,YUJun

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofKunming，Kunming，Yunnan650011，China)

Objective To investigate the value and clinical significance of auto-antibodies detection in primary biliary cirrhosis (PBC) patients.Methods A total of 39 patients with PBC accepted autoimmune liver disease antibody detection were selected in PBC group from May 2011 to May 2012,45 patients accepted ENA detection were selected in disease control group,other 40 healthy people were selected into health control group.Indirect immunofluorescence assay (IFA) were used to detect antinuclear antibodies(AMA).Western blot method was used to detect antibody of autoimmune liver disease including anti AMA,anti M2 antibodies,SP100 antibody,anti GP210 antibody,liver and kidney microsomal antibody resistance type I (LKM-1),liver cytosol antigen antibody of type Ⅰ (LC-1) and the soluble liver antigen antibody (SLA).Results A total of 27 patients with PBC had positive result of ANA antibodies,16 cases were particle type,6 cases were centromere type,5 cases were cytosolic,In all the 39 patients,ANA antibody positive rate was 69.2%,GP210 antibody positive rate was 33.3%,SP100 antibody positive rate was 41.0%,and AMA-M2 antibody positive rate was 56.4%.LKM-1,LC-1 antibody and SLA antibody were negative.The ANA antibody positive rate in the disease control group was 62.3%,4 cases were homogeneous type,1 case were cytosolic type,7 cases were centromere type and 12 cases were particle type.The autoimmune liver disease antibodies were all negative in the health control group.The positive rate of GP210 antibody,SP100 antibody,AMA-M2 antibodies in the PBC group were significant different with those of the disease control group and health control group,the differences were statistical significant (P<0.05)Conclusion Various autoantibodies could be detected in PBC patients,in which GP210,SP100,AMA-M2 antibody are important for the diagnosis and the differential diagnosis of PBC.

primary biliary cirrhosis; autoantibodies; antinuclear antibodies

秦雯，女，本科，主任技師，主要從事臨床免疫學檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.020

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1672-9455(2015)04-0484-02

2014-05-30

2014-08-27)