基因型檢測對乙型肝炎病毒感染程度的診斷效果

賈冬青

(山東省荷澤市單縣中心醫(yī)院檢驗科 274300)

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·論 著·

基因型檢測對乙型肝炎病毒感染程度的診斷效果

賈冬青

(山東省荷澤市單縣中心醫(yī)院檢驗科 274300)

目的 探討基因型檢測對乙型肝炎病毒(HBV)感染程度的診斷效果。方法 選取2014年1～6月收治的120例HBV感染患者，進(jìn)行HBV DNA載量、基因型分布及E抗原檢測。結(jié)果 B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分別有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者與DNA載量之間無明顯相關(guān)性(P>0.05)。B基因型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；B、C混合基因型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。慢性乙型肝炎以B基因型為主，原發(fā)性肝癌以C基因型為主，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 荷澤地區(qū)HBV基因型以B、C為主，基因型分布與感染嚴(yán)重程度及E抗原陰性率有關(guān)，與DNA表達(dá)載量無關(guān)。

乙型肝炎病毒；基因型；程度；DNA載量

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一個世界性的公共衛(wèi)生問題，其感染引發(fā)的乙型病毒性肝炎是血源傳播性疾病，主要經(jīng)血液傳播、母嬰傳播和性接觸傳播[1]。我國作為乙肝大國，HBV攜帶者人數(shù)近1億，約占7.81%[2]。HBV作為一種雙鏈DNA病毒，其基因型分布存在明顯的地域性[3]。為探討HBV基因型檢測的臨床價值，本文對本院2014年1～6月收治的120例HBV感染患者的HBV基因型進(jìn)行檢測，探討其與感染程度之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1～6月收治的120例HBV感染患者，男76例，女44例；年齡22～82歲，平均(46.9±15.8)歲；慢性乙型肝炎68例，乙型肝炎后肝硬化36例，原發(fā)性肝癌16例。入選標(biāo)準(zhǔn)：符合2000年全國病毒性肝炎學(xué)術(shù)會議所制定的《全國病毒性肝炎防治方案》中有關(guān)乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；血清HBV DNA檢測采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和/或抗-HBV檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)陽性；近6個月內(nèi)無免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用史；知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他病毒性肝炎、自身免疫性疾病等嚴(yán)重疾病；近6個月內(nèi)應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑；長期酗酒者；妊娠期婦女或哺乳者。患者按HBV DNA載量水平分為高載量組(HCV DNA>1×105copy/mL)、中載量組[HCV DNA(1×103～1×105)copy/mL]、低載量組(HCV DNA<1×103copy/mL)。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 PCR儀為Hema 9600基因擴增儀；全自動酶免疫分析儀為瑞士哈數(shù)頓公司產(chǎn)品，雜交爐為深圳亞能生物制品有限公司產(chǎn)品。HBV核酸定量試劑盒由凱杰生物工程(深圳)有限公司提供；HBV E抗原檢測試劑盒購自北京萬泰生物醫(yī)藥有限公司；HBV E抗原檢測試劑購自上海科華生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 HBV DNA載量檢測 按操作步驟，采用實時熒光定量PCR檢測HBV DNA。

1.2.3 HBV基因分型檢測 一步法提取患者血清HBV基因組DNA，進(jìn)行多引物PCR擴增。93 ℃預(yù)變性6 s；93 ℃ 30 s，58 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，10個循環(huán)；93 ℃ 30 s，56 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，10 個循環(huán)；93 ℃ 30 s，55 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，15個循環(huán)；72 ℃ 7 min。PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳：將5 μL PCR產(chǎn)物與1 μL 6×載樣緩沖液混勻后加入瓊脂糖凝膠上樣孔中，同時做DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物和PCR陰性對照。電壓15 V/cm，20 min。結(jié)束后于320 nm紫外燈下觀察，并將圖像保存于Gel-Doc 2000凝膠成像儀[4]。

1.2.4 HBV E抗原檢測 采用雙抗體夾心ELISA檢測HBV E抗原，嚴(yán)格按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析所有資料采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析處理，計數(shù)資料以n(%)表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 基因型分布 B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分別有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 基因型分布與DNA載量的關(guān)系 見表1。B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者與DNA載量之間無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

表1 120例HBV感染者基因型分布與DNA載量的關(guān)系

2.3 基因型分布與HBV E抗原的關(guān)系 見表2。B基因型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；B、C混合基因型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 120例HBV感染者基因型分布與HBV E抗原的關(guān)系[n(%)]

注：與B、C混合基因型比較，*P<0.05；與C基因型比較，#P<0.05。

表3 120例HBV感染者基因型分布與臨床表型的關(guān)系[n(%)]

注：與B、C混合基因型比較，*P<0.05；與C基因型比較，#P<0.05。

2.4 基因型分布與臨床表型的關(guān)系 見表3。慢性乙型肝炎以B基因型為主，原發(fā)性肝癌以C基因型為主，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

我國屬于乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，有1.5億HBV 感染者，其中2 000萬人為慢性乙型肝炎患者，每年因此導(dǎo)致大約50萬人死亡[5]。HBV感染造成的乙型肝炎，以及肝硬化、肝細(xì)胞癌等肝臟疾病，嚴(yán)重威脅著人類的健康。

HBV屬于嗜肝DNA病毒科的一種部分雙鏈環(huán)狀DNA病毒，其感染的流行強度在地域間存在很大差異，不同地區(qū)感染HBV 的基因型亦存在差異。本組數(shù)據(jù)顯示，120例HBV感染者中，B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分別有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示荷澤地區(qū)HBV感染者中主要以B基因型為主，其次是C基因型和B、C混合基因型感染。國外研究表明，HBV感染者B、C基因型主要分布在東亞及東南亞，A、D基因型主要分布在美國和歐洲，E基因型多分布在非洲，這與本文結(jié)果一致[6-7]。潘登[8]在其學(xué)位論文中對來自中國包括香港、臺灣地區(qū)共計1 642例HBV全基因組序列進(jìn)行分析，其中A型8例(0.5%)，B型634例(38.6%)，C型935例(57.0%)，D型30例(1.8%)，I型35例(2.1%)，以C型為主，B型次之。也有研究表明，國內(nèi)南方以B型為主，北方以C型為主[9]。

本組數(shù)據(jù)顯示，B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者與DNA載量之間無明顯相關(guān)性(P>0.05)，提示HBV DNA與DNA載量之間無明顯相關(guān)性。吳意等[3]報道，HBV DNA表達(dá)載量在B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，不同基因型的HBV載量無差異，與本文結(jié)果一致。也有學(xué)者證實，不同基因型HBV感染患者HBV DNA載量存在明顯差異。高海彥等[5]發(fā)現(xiàn)，不同HBV基因型DNA載量存在顯著差異，C基因型HBV DNA載量顯著高于B基因型。本文發(fā)現(xiàn)B基因型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；B、C混合型患者HBV E抗原陰性比例顯著高于C基因型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與徐嚴(yán)等[10]報道一致。

目前普遍認(rèn)為，HBV感染者C基因型引起的炎性壞死及纖維化程度比B基因型更加嚴(yán)重，且C基因型與肝硬化和肝癌有關(guān)，可能與不同基因型某些致癌位點變異發(fā)生情況差異有關(guān)[11]。本組數(shù)據(jù)顯示，慢性乙型肝炎以B基因型為主，原發(fā)性肝癌以C基因型為主，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。隨著病情的加重，C基因型HBV比例增加，B基因型HBV比例降低，原發(fā)性肝癌患者未發(fā)現(xiàn)B、C混合基因型。也有研究認(rèn)為，B、C混合基因型感染與肝病的惡化有關(guān)，如急性肝炎、肝硬化和肝癌等[12]。

綜上所述，荷澤地區(qū)HBV基因型以B、C為主，基因型分布與感染嚴(yán)重程度及E抗原陰性率有關(guān)，與DNA表達(dá)載量無關(guān)。

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Effect of genotype inspection on the diagnosis of the degree of hepatitis B virus infection

JIADong-qing

(DepartmentofClinicalLaboratory,CentralHospitalofShanCounty,Heze,Shandong274300,China)

Objective To investigate the effect of genotype inspection on the diagnosis of the degree of hepatitis B virus (HBV) infection.Methods 120 cases of patients with HBV infection were enrolled from January 2014 to June 2014.The HBV DNA capacity,genotype and HBeAb were inspected.Results There were 82 cases (68.33%) of HBV B genotype,30 cases (25.00%) of HBV C genotype and 8 cases (6.67%) of HBV B/C genotype,with significant difference between groups (P<0.05).There was no significant correlation between HBV B genotype,HBV C genotype,HBV B/C genotype and HBV DNA capacity (P>0.05).The HBeAb negative rate of patients infected by HBV B genotype was significantly higher than that of patients infected by HBV C genotype and HBV B/C genotype (P<0.05).The HBeAb negative rate of patients infected by HBV B/C genotype was significantly higher than that of patients infected by HBV C genotype (P<0.05).HBV B genotype was the main genotype of chronic hepatitis B,and HBV C genotype was the main genotype for primary hepatic carcinoma,with significant difference (P<0.05).Conclusion In Heze area,HBV B genotype,HBV C genotype were the main genotypes for HBV infection.HBV genotype was correlated with infection degree and HBeAb negative rate,while not related with HBV DNA capacity.

hepatitis B virus;genotype;degree;DNA capacity

賈冬青，女，本科，主管技師，主要從事生化、免疫檢測。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.034

A

1672-9455(2015)23-3536-02

2015-04-22

2015-06-22)