拉米夫定和阿德福韋酯抗病毒療效與HBV基因型的關系*

劉 鍵，陸學東，黃 烈，莊 鵬，王 瓊，吳潤香，楊來智

(廣東省深圳市第四人民醫(yī)院：1.檢驗醫(yī)學部;2.感染科 518033)

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·論 著·

拉米夫定和阿德福韋酯抗病毒療效與HBV基因型的關系*

劉 鍵1，陸學東1，黃 烈1，莊 鵬2，王 瓊1，吳潤香1，楊來智1

(廣東省深圳市第四人民醫(yī)院：1.檢驗醫(yī)學部;2.感染科 518033)

目的 探討慢性乙型肝炎患者應用拉米夫定、阿德福韋酯的療效與HBV基因型的關系。方法 選取125例慢性乙型肝炎患者，分別給予拉米夫定(拉米夫定組，n=60)和阿德福韋酯(阿德福韋酯組，n=65)抗病毒治療。觀察2組治療3、6、12個月后的病毒學應答率、血清學應答率及生化學應答率，并于治療12個月后檢測耐藥率及耐藥基因突變位點。結果 拉米夫定組在治療6、12個月后，B基因型HBV感染患者病毒學應答率、血清學應答率明顯高于C基因型HBV感染患者(P<0.05)，但生化學應答率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。阿德福韋酯組在治療期間B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者的病毒學應答率、血清學應答率、生化學應答率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療12個月后，拉米夫定組耐藥率明顯高于阿德福韋酯組(P<0.05)，拉米夫定組和阿德福韋酯組耐藥基因突變位點分別以rt108M、rt236T為主。結論 拉米夫定對B基因型HBV的抑制作用優(yōu)于C基因型HBV；阿德福韋酯的抗病毒療效與HBV基因型無關；在慢性乙肝型炎治療過程中要重視HBV耐藥性發(fā)生，加強療效評估。

乙型肝炎病毒； 基因型； 拉米夫定； 阿德福韋酯

抗HBV治療是慢性乙型肝炎的主要治療手段。研究顯示，慢型乙型肝炎的進展、抗病毒治療的療效與HBV基因型及耐藥基因變異有密切關系[1-2]。 核苷類似物是目前臨床上最常用的抗病毒類藥物。本研究擬探討深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者HBV基因型與核苷類似物抗病毒療效的關系，為不同基因型患者選擇合理有效的抗病毒治療方案提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月至2013年12月本院門診和住院的接受拉米夫定、阿德福韋酯抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者125例，其中男83例，女42例，年齡19～63歲，平均33.55歲，均按慢性乙型肝炎防治指南(2010版)診斷標準確診[3]。納入患者甲、丙、丁、戍、庚等其他類型肝炎病毒檢測均為陰性，并且無拉米夫定或阿德福韋酯治療史，HBV DNA無拉米夫定、阿德福韋酯耐藥基因位點。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 入選者分為拉米夫定組、阿德福韋酯組。拉米夫定組(n=60)中，B基因型HBV感染患者38例，C基因型HBV感染患者22例，給予口服拉米夫定(葛蘭素史克制藥蘇州有限公司，批號H20030581)100 mg/d，1次/天；阿德福韋酯組(n=65)中，B基因型HBV感染患者40例、C基因型HBV感染患者25例，給予口服阿德福韋酯片(上海益生源藥業(yè)有限公司，批號H20070216)10 mg/d，1次/天。每組患者至少用藥12個月，分別在治療前及治療3、6、9、12個月時檢測HBV DNA、HBV血清標志物及肝功能指標，在治療12個月時進行該藥物的耐藥性檢測。

1.2.2 標本采集 靜脈采集慢性乙型肝炎患者不抗凝血3 mL，2 000 r/min離心5 min，分離血清-20 ℃儲存?zhèn)溆茫袠吮緹o溶血、脂血現(xiàn)象。

1.2.3 HBV DNA檢測 采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測HBV DNA，MX-3000P熒光定量PCR儀購自Agilent公司，HBV DNA定量試劑盒由QIAGEN公司提供。

1.2.4 HBV DNA基因型與常見耐藥位點檢測 采用DNA反相斑點雜交芯片技術檢測HBV DNA基因型與常見耐藥基因位點。COMBI-H12型分子雜交儀購自FINEPCR公司，PTC-200型PCR擴增儀購自MJ RESEARCH公司，HBV DNA耐藥基因芯片試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供。

1.2.5 丙氨酸氨基轉移酶(ALT)檢測 采用日本日立7600型全自動生化分析儀檢測ALT，試劑由北京九強生物技術有限公司提供。

1.2.6 乙型肝炎e抗原(HBeAg)相對水平檢測 采用免疫化學發(fā)光法檢測HBeAg的相對水平，Gene-Amp5700型熒光PCR檢測儀購自美國PE公司，病毒核酸定量檢測試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司提供。

1.3 療效評價標準[4]根據(jù)《病毒性肝炎防治方案》確定抗病毒療效評價標準：(1)生化學應答，ALT復常指ALT降至正常范圍之內(nèi)；(2)病毒學應答，HBV 陰轉指HBV DNA低于檢測下限，即HBV DNA<1×103copy/mL；(3)血清學應答，HBeAg陰轉或HBeAg血清學轉換。

2 結 果

2.1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定療效比較 在拉米夫定抗病毒治療3個月時，B、C基因型HBV感染患者的病毒學應答率、血清學應答率及生化學應答率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療6、12個月時，B、C基因型HBV感染患者的病毒學應答率、血清學應答率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但生化學應答率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韋酯療效比較 B、C基因型HBV感染患者應用阿德福韋酯抗病毒治療3、6、12個月，病毒學應答率、血清學應答率及生化學應答率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定療效比較[n(%)]

表2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韋酯療效比較[n(%)]

2.3 耐藥性檢測 治療12個月時，對拉米夫定組和阿德福韋酯組患者進行治療藥物的耐藥性檢測，結果顯示拉米夫定組耐藥率明顯高于阿德福韋酯組(P<0.05)；拉米夫定組中，C基因型HBV感染患者的耐藥率明顯高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)，見表3。耐藥基因位點檢測結果顯示，拉米夫定組耐藥基因位點主要為rt108M，其次為rt204V；阿德福韋酯組耐藥基因位點為rt236T，其次為rt181V。

表3 拉米夫定和阿德福韋酯耐藥性檢測結果

3 討 論

拉米夫定和阿德福韋酯是目前臨床上應用較廣泛的2種核苷類抗HBV藥物。拉米夫定抑制HBV復制的作用機制是藥物在細胞內(nèi)磷酸化后再與脫氧胞嘧啶核苷之間進行競爭，進入合成中的cDNA鏈，逐步終止復制過程，從而阻斷HBV復制中RNA-DNA的反轉錄[5-6]。阿德福韋酯是1種新型腺嘌呤磷酸酯類化合物。口服阿德福韋酯吸收后，經(jīng)水解、磷酸化形成阿德福韋二磷酸酯，與腺苷酸競爭，終止HBV DNA 新鏈合成，抑制HBV復制[7-8]，阿德福韋酯不僅抗HBV效果顯著，在拉米夫定耐藥突變株出現(xiàn)的情況下，還可對其進行有效抑制[9-10]。

有研究顯示，不同基因型的HBV對抗病毒藥物的敏感性有一定差異。核苷類似物的研究主要集中于拉米夫定，關于拉米夫定療效與HBV基因型相關性的報道較多，有學者認為B、C基因型HBV對拉米夫定的療效無影響；也有學者發(fā)現(xiàn)，拉米夫定對C基因型HBV的抑制作用較B基因型HBV差[6]。有研究報道，B基因型HBV感染患者病毒學應答率、血清學應答率及生化學應答率均高于C基因型及B+C基因型HBV感染患者[11]。接受拉米夫定治療的C基因型HBV感染患者的反應性及停藥后的抗病毒持續(xù)時間均低于B基因型HBV感染患者[12]。目前，HBV基因型對阿德福韋酯抗病毒療效是否具有影響尚存在爭議[13-15]。

本研究對深圳地區(qū)125例慢性乙型肝炎患者分別應用拉米夫定或阿德福韋酯進行為期12個月的抗病毒治療，通過對HBV DNA、HBeAg、ALT等指標的檢測分析，發(fā)現(xiàn)B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者在應用拉米夫定6、12個月后的病毒學應答率、血清學應答率存在明顯差異(P<0.05)，但在治療期間生化學應答率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示B基因型HBV對拉米夫定的抗病毒應答率高于C基因型HBV。阿德福韋酯抗病毒治療3、6、12個月后，B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者的病毒學應答率、血清學應答率、生化學應答率均無明顯差異(P>0.05)，說明HBV基因型對阿德福韋酯的療效無明顯影響，與許正鋸等[16]和楊麗敏等[17]報道結果一致。本研究通過對藥物的耐藥性檢測，發(fā)現(xiàn)治療12個月后，拉米夫定組和阿德福韋酯組均有耐藥突變基因出現(xiàn)，拉米夫定組耐藥基因位點主要為rt108M，阿德福韋酯組耐藥基因位點為rt236T。拉米夫定組耐藥率高于阿德福韋酯組(P<0.05)；拉米夫定組中，C基因型HBV感染患者的耐藥率明顯高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)。

綜上所述，在慢性乙肝型炎治療過程中要重視HBV耐藥性的發(fā)生，加強療效評估，一旦發(fā)現(xiàn)耐藥，要及時調(diào)整治療方案，如對拉米夫定耐藥者可更換阿德福韋酯治療或聯(lián)合用藥治療；對阿德福韋酯耐藥者可聯(lián)合應用拉米夫定，或用替比夫定、恩替卡韋聯(lián)合用藥治療[18-19]。建議治療6個月時進行耐藥基因檢測，及早發(fā)現(xiàn)耐藥，及時更換藥物，以保證和提高療效。

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Correlation between HBV genotype and the antiviral efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil*

LIUJian1,LUXue-dong1,HUANGLie1,ZHUANGPeng2,WANGQiong1,WURun-xiang1,YANGLai-zhi1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofInfectiousDisease,theFourthPeople′sHospitalofShenzhen,Shenzhen，Guangdong518033，China)

Objective To explore the relationship between the antiviral therapy efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil with HBV genotypes in chronic hepatitis B(CHB).Methods 125 cases of CHB patients were selected and treated lamivudine (lamivudine group,n=60) and adefovir dipivoxil (adefovir dipivoxil group,n=65).The virus response rates,serological response rates and biochemical response rates of two groups were observed respectively after 3,6,12 months treatment.The drug resistance rates and mutation sites of drug resistance gene were detected after 12 months treatment.Results In lamivudine group,patients infected genotype B HBV had higher virus response rate and serological response rate than patients infected genotype C HBV after 6 and 12 months treatment (P<0.05),while the biochemical response rates had no significant difference between two genotypes (P>0.05).In adefovir dipivoxil group,there were no significant difference of virus response rates,serological response rates and biochemical response rates between patients infected genotype B and genotype C HBV (P>0.05) during treatment.After 12 months treatment,the drug resistance rate of lamivudine group was higher than adefovir dipivoxil group (P<0.05).The main mutation sites of drug resistance gene of lamivudine group and adefovir dipivoxil group were rt108M and rt236T respectively.Conclusion Lamivudine has better antiviral efficacy for genotype B HBV than genotype C HBV,while the antiviral efficacy of adefovir dipivoxil is independent with HBV genotypes.The drug resistance of HBV should be paid attention to during treatment,and the assessment of efficacy should also be strengthened.

hepatitis B virus； genotype； lamivudine； adefovir dipivoxil

廣東省深圳市福田區(qū)公益性科研項目(FTWS081)。

劉鍵，男，本科，主管檢驗師，從事醫(yī)學臨床檢驗研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.033

A

1672-9455(2015)20-3055-03

2015-04-10

2015-07-05)