33例無償獻血者ABO血型正反定型不符原因分析

趙 倩，劉 淼，董 磊，安仕萍，潘 彤

(天津市血液中心 300110)

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·臨床探討·

33例無償獻血者ABO血型正反定型不符原因分析

趙 倩，劉 淼，董 磊，安仕萍，潘 彤

(天津市血液中心 300110)

目的 分析無償獻血者ABO血型正反定型不符的原因。方法 應用血清學方法檢測ABO血型正反定型不符標本，并輔以ABO基因分型方法。結果 205 744例無償獻血者標本，其中33例正反定型不符，經進一步鑒定抗體篩查陽性13例，ABO亞型12例，血型反定型抗體減弱8例。結論 當無償獻血者ABO血型正反定型不符時，應換人多次重檢排除人為因素,同時進一步進行血清學試驗及序列特異引物引導的PCR(PCR-SSP)基因分型，確保無償獻血者的ABO血型鑒定正確，使臨床輸血更加安全和有效。

無償獻血者； ABO亞型; PCR-SSP基因分型

采供血機構對無償獻血者ABO血型的確認主要是通過街頭紙片法正定型及站內微板法正反定型2遍來判定的。正確鑒定無償獻血者ABO血型，進一步保障臨床輸血安全是采供血機構每個人員的責任。由于血清不規(guī)則抗體的出現(xiàn)及存在ABO亞型等原因，使ABO血型正反定型出現(xiàn)不一致，從而給血型確認工作帶來較大的困難。本文分析了本中心檢驗科33例無償獻血者血液標本正反定型不符的原因，進一步進行了血清學試驗及分子生物學試驗,現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年6月天津市血液中心檢測的205 744例無償獻血者標本，其中33例ABO血型正反定型不符。

1.2 試劑 血型正定型試劑：單克隆抗-A，抗-B購自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司；反定型試劑：A細胞、B細胞、O細胞購自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司。人源化抗A、抗B試劑，抗H試劑，抗A1試劑均購自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司?；蚪MDNA提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司，人紅細胞ABO血型基因Ⅱ代檢測試劑盒和人類ABO血型基因CisAB與B(A) Ⅱ代檢測試劑盒購自天津秀鵬生物技術開發(fā)有限公司。

1.3 方法 無償獻血者ABO血型鑒定：(1)體采科與機采科用紙板法進行正定型初檢；(2)檢驗科微板法進行正反定型復檢，凡正反定型不符或凝集明顯較弱的標本，排除試劑配制、加錯等人為因素造成的血型誤判，改變試驗條件(如增加離心及震蕩時間等)，再進行ABO 正反血型鑒定，若結果不一致，進一步進行疑難血型的鑒定工作。

1.3.1 ABO血型鑒定血清學方法 正定型:抗-A、-B、-A1、-H;反定型:Ac、Bc、O c、自身細胞,必要時加做吸收放散試驗、抗體鑒定試驗、庫姆試驗等。

1.3.2 ABO血型鑒定分子生物學方法 提取血樣DNA，采用序列特異引物引導的PCR(PCR-SSP)基因分型方法，按照試劑盒說明書進行操作。PCR擴增體系為：標本DNA 20 μL，循環(huán)參數(shù)為96 ℃預變性 2 min；96 ℃ 20 s，68 ℃ 60 s，5個循環(huán)；96 ℃ 20 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，10個循環(huán)；96 ℃ 20 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，15個循環(huán)；最后72 ℃延伸1 min。10 μL PCR擴增產物經 2%瓊脂糖凝膠電泳，220 V電壓電泳30 min，在紫外燈下觀察電泳結果。

2 結 果

33例正反定型不符的標本,采用試管法正反定型、吸收放散試驗、抗體鑒定試驗及庫姆試驗等血型血清學方法鑒定，其中抗體篩查陽性13例(39.39%)，ABO亞型12例(36.36%)，抗體減弱8例(24.24%)。33例正反定型不符原因分析見表1。

表1 33例無償獻血者ABO血型血清學及基因鑒定結果

注：θ為陰性，W+為弱陽性。-表示無數(shù)據(jù)。

3 討 論

準確鑒定獻血員血型極其重要，正確的ABO血型對于血液的正確發(fā)放，保證臨床輸血安全有效至關重要。當血型鑒定出現(xiàn)正反定型不符時，應立即核查血液標本、試劑、操作是否有誤，并重新進行血型檢測，排除人為因素之外，ABO血型抗體減弱、ABO亞型和不規(guī)則抗體(以鹽水性質的IgM為主)是導致正反定型不符的主要原因[1-2]。2013年1月至2014年6月本中心檢驗科共檢測205 744例無償獻血者標本，其中33例為ABO血型正反定型不符，占0.016%。本研究結果顯示，產生血型正反不符的原因主要有出現(xiàn)特異或非特異抗體，占正反不符標本的39.39%，ABO亞型占36.36%，ABO血型抗體減弱占24.24%。

抗體減弱主要見于兒童和老年人。在本文中，發(fā)現(xiàn)有8例正定型正常血型者，但反定型血型抗體減弱，對于此類可加大血清量來增強抗原抗體反應且以O型紅細胞或自身細胞作為陰性對照[3]，該類獻血員的合格血液可按同型發(fā)放于臨床。

正常ABO血型抗原凝集強度一般呈4+，當抗原凝集強度低于4+或呈現(xiàn)混合凝集外觀時，應該考慮ABO亞型的可能。由于獻血員紅細胞上抗原弱，在采血車或站內初檢時很可能被錯誤定型，在檢驗科復檢時由于是全自動儀讀板抗-A/-B血清的效價低等其他因素的影響也可能無法判定，所以在出現(xiàn)正反定型不符時應進一步通過其他血清學或分子生物學方法鑒定血型。在無償獻血者人群中存在一定比例的ABO亞型，在本文中，共發(fā)現(xiàn)12例亞型，A或B抗原血清學正定型反應呈陰性或弱凝集，通過吸收放散實驗、抗-H、抗-A1鑒定及基因分型鑒定為血型亞型，共占總標本的0.006%，ABO亞型獻血者血液，若其血清中不含有不規(guī)則ABO血型抗體，其血液制品輸注給同型患者一般情況下不會產生溶血性輸血反應，若含有相應額外的血型抗體比如A亞型含有抗-A1、抗-B亞型含有抗-B者，則不能輸注給A型或B型患者，以免發(fā)生溶血反應而影響治療效果。若患者為ABO亞型，有可能多次輸血，若輸注同型的A或B型血應考慮到第1次輸血產生的同種免疫效應。此類患者最好選擇相同的亞型輸注或O型洗滌紅細胞，保障臨床輸血安全有效[4]。

引起ABO血型正反定型不符的同種抗體以天然產生的抗-M為主[5]，當出現(xiàn)O細胞凝集而自身對照陰性時，應考慮到同種抗體的可能，本文共發(fā)現(xiàn)抗體篩查陽性者13例，其中抗-M12例，冷抗體1例。掌握無償獻血者不規(guī)則同種抗體發(fā)生率,有利于發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不完全抗體,正確鑒定血型的同時也避免溶血性輸血反應的發(fā)生。

通過本文的研究分析，提示檢驗科人員在自動化判讀結果前，應進行肉眼觀察，及時發(fā)現(xiàn)“混合視野凝集”或“弱凝集”標本，對發(fā)現(xiàn)的正反定型不符的標本多人多次進行復核，排除因儀器等原因造成的假陰性或假陽性。同時增加其他輔助的血型血清學或分子生物學試驗方法以正確定型，否則可能導致ABO血型誤判。在做 ABO血型鑒定時必須具有高度的責任心,熟練規(guī)范的操作技能,嚴謹細致的分析能力，發(fā)現(xiàn)亞型及不規(guī)則抗體的干擾，做進一步鑒定以確保血液質量及臨床用血安全。

[1]章旭,李劍平.455例ABO正反定型不符原因分析[J].中國輸血雜志,2010,23(8):623-624.

[2]向東.ABO亞型的檢測[J].中國輸血雜志,2010，23(8):577-579.

[3]屈林,劉景和,劉鳳霞.ABO抗原減弱所致疑難血型的原因分析及鑒定方法[J].中國輸血雜志,2010，23(9):706-708

[4]種靖慧,閆莉娜.A201亞型患者輸注A型血致配血不合1例[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013,10(5):1337-1338.

[5]陶翠華,張真路.325例ABO正反定型不一致原因分析及處理措施[J].中國輸血雜志,2012,25(5):484-485.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.051

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1672-9455(2015)20-3097-02

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