不同廠家總蛋白試劑盒測定結果的比較

何樂春，王剛林

(重慶醫療器械質量檢驗中心/重慶市醫療器械質量與安全控制工程技術研究中心 401147)

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不同廠家總蛋白試劑盒測定結果的比較

何樂春，王剛林

(重慶醫療器械質量檢驗中心/重慶市醫療器械質量與安全控制工程技術研究中心 401147)

目的 探討使用不同廠家總蛋白試劑盒所得結果之間的可比性，為不同廠家試劑盒所測結果的互認提供數據支持。方法 實驗采用深圳邁瑞BS-800全自動生化分析儀，以國家標準品作為檢測樣本，選取9個廠家生產的總蛋白試劑盒(均為雙縮脲法)，按各自說明書要求，分別檢測準確性、重復性、線性、線性偏差。結果 9個廠家生產的總蛋白試劑盒的測定結果基本一致，誤差在可接受范圍之內。結論 市場上總蛋白試劑盒的總體質量良好，測定結果可靠；不同廠家所生產的總蛋白檢測試劑盒各性能參數存在一定的差異，與其校準品來源和樣品試劑比例等有關。

總蛋白； 全自動生化分析儀； 重復性； 準確性； 線性偏差

目前，我國共有診斷試劑生產企業400多家[1]，在國家食品藥品監督管理總局的數據庫中，總蛋白檢測試劑盒的有證生產企業為235家。然而現階段，各廠家的生產規模、技術水平和產品質量參差不齊。為了大致了解市場上總蛋白檢測試劑盒的質量情況，探討使用不同廠家總蛋白試劑盒所得結果之間的可比性，為使用不同廠家試劑盒所測結果的互認提供數據支持，本文特選取重慶醫院常用的9個廠家生產的總蛋白檢測試劑盒，利用國家標準品驗證各試劑盒測定結果的可靠性。

1 材料與方法

1.1 儀器 BS-800全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司生產)。

1.2 材料 總蛋白試劑盒：選取目前市場上常用的9個廠家生產的總蛋白測定試劑盒，依次編號為1～9號(見表1)；標準品：凍干人血清[證書編號：GBW(E)090351；定值日期：2011年7月；定值結果：58.3 g/L(1 毫升/支)；生產單位：北京市醫療器械檢驗所]。

1.3 方法 選取的9種試劑盒均采用雙縮脲法測定血清中總蛋白濃度。雙縮脲法測定總蛋白含量的實驗原理為：在堿性條件下，蛋白質多肽鏈中的肽鍵與銅離子反應生成有色的絡合物，總蛋白濃度與顏色的深淺呈正比[2-4]。

表1 不同廠家試劑盒的基本信息

注：2號試劑盒為雙試劑；4號試劑盒沒有配備相應校準品，實驗時選用朗道公司校準品。

1.4 統計學處理[5-6]

1.4.1 準確度和重復性 準確度：取已知濃度的質控品，按試劑盒說明書的規定進行測定，重復3次。計算樣本測定結果均值，用相對偏差表示測定結果的準確度(見公式1)。重復性：取質控品進行檢測，用同一試劑盒重復測定10次，計算測定值的變異系數(CV)，用變異系數表示測定結果的重復性(見公式2)。

1.4.2 線性回歸 取接近試劑盒線性范圍上限的高濃度樣本與0濃度樣本混合成6個稀釋濃度，每個濃度重復測定2次，取平均值，取其理論濃度值為自變量X，對應測定濃度的平均值為因變量Y進行回歸分析求出線性回歸方程，計算線性回歸的相關系數r。

2 結 果

2.1 準確性和重復性 每支標準品用1mL純化水復溶，充分混勻，得到理論濃度為58.3g/L的總蛋白標準品樣本。選取9個廠家生產的總蛋白試劑盒，按各自說明書中要求分別將標準品作為樣品進行準確性和重復性實驗。準確性實驗：每種試劑盒重復測3次，取平均值，計算相對偏差。重復性實驗：每種試劑盒重復測試10次，計算CV，結果見表2。

2.2 線性回歸 每支標準品用0.5mL純化水復溶，充分混勻,得理論濃度為116.6g/L的總蛋白高值樣本。用純化水將高值樣本逐級稀釋成6個濃度梯度，每個濃度測定3次，取平均值。以各濃度梯度的理論濃度為Xi值，以不同廠家試劑盒的測定結果均值為Yi值，進行線性擬合，求出各自的回歸方程。將樣品理論濃度Xi代入回歸方程，計算Yi的估計值及Yi與估計值的相對偏差，結果見表2。

表2 不同廠家試劑盒的性能參數

3 討 論

3.1 準確性和重復性 從表2可見，準確性除4號試劑盒的測定結果>10%以外，其余8個廠家試劑盒均≤5.1%；重復性≤2.5%；查閱4號試劑盒的有效期和使用說明書，試劑盒尚在有效期內，未過期。究其準確性偏差過高的原因，可能為沒有配備相應校準品，且說明書中沒有明確規定用何種校準品；此外，可能與該試劑盒在運輸過程中的貯存條件有關(2～8 ℃密閉避光貯存)。

3.2 線性回歸 線性回歸的相關系數均在0.999 0以上，線性偏差在0.03%～6.81%范圍內，表明所有試劑盒在其線性范圍內的擬合結果良好。但盡管如此，無論是本文還是現行的企業標準，所有的擬合都是以理論濃度為Xi值，以測定結果均值為Yi值，此種擬合缺乏一定的理論基礎。根據朗博比爾定律，A=εbC(其中A為吸光度，ε為摩爾吸光度，b為比色皿厚度，C為溶液濃度)，總蛋白濃度在一定范圍內應與吸光度呈正比。因此，將測定的吸光度與濃度進行線性擬合是否更具合理性有待商榷。

3.3 結論 重慶市場上的總蛋白測定試劑盒總體質量良好，測定結果準確、可靠。校準品是用來校準某特定檢測系統的(儀器、試劑及其測定方法)，是考慮到待測血清具有基質效應的情況下，人為賦予校準品的校準值，它不是一個具體的測定值，僅是糾正的調整值。因此，每種試劑盒都應標明或配備相應的校準品，且校準品必須專用于某一檢測系統，即校準品具有特殊的專用性。從表1可看出，實驗中，9個廠家所用的校準品的來源和賦值均存在差異，同時樣品與試劑的比例也存在差異，由此造成檢測結果之間存在相應的差別。此次實驗所用各廠家的試劑盒反應原理一致，所用樣品相同，實驗過程平行操作，排除儀器自身誤差和人為誤差，各種總蛋白試劑盒的測定結果具有較好的可比性，檢驗結果可以互認。

[1]毛省俠,郭準.淺談體外診斷試劑質量體系中企業參考品的管理[J].中國醫療器械信息，2011,17(10):54-57.

[2]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗手冊[M].3版.南京:東南大學出版社，2006:452-456.

[3]王霞文.臨床生物化學和生物化學檢驗[M].南京大學出版社，1995:180-182.

[4]陸永綏，李清華，張偉民.臨床檢驗自動化分析標準操作規程[M].浙江大學出版社，2006:9.

[5]中華人民共和國衛生部.WS/T 124-1999 臨床化學體外診斷試劑盒質量檢驗總則[S].北京：中華人民共和國衛生部，1999.

[6]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員.GB/T 26124-2011 臨床化學體外診斷試劑(盒)[S].北京：中國標準出版社，2011.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.066

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1672-9455(2015)20-3125-03

2015-03-25

2015-07-20)