核酸檢測應用于獻血者血液篩查的臨床分析

劉 丹

(遼寧省大連市血液中心 116001)

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·臨床探討·

核酸檢測應用于獻血者血液篩查的臨床分析

劉 丹

(遼寧省大連市血液中心 116001)

目的 分析并評價核酸檢測應用于獻血者血液篩查的臨床效果，從而為臨床提供依據和指導。方法 采用Roche Cobas S201系統對28 762名獻血者的血液標本進行篩查，所有血液標本均經常規酶聯免疫吸附試驗檢測，結果一律為陰性，篩查內容包括HBV、HCV和HIV，同時對核酸檢測陽性的標本進行確證試驗。結果 核酸檢測陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測陰性28 736份，陰性檢出率99.91%；確證試驗發現檢測到HBV RNA反應陽性為17份(65.38%)；未檢測到 HBV DNA，HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達65.38%。結論 核酸檢測應用于獻血者血液篩查的效果較佳，既可有效提高獻血者的血液質量，又可提高輸血的安全性，避免重癥血液疾病，顯著提高血液的應用價值和安全性，值得相關采供血機構在血液篩查中推廣使用。

獻血者；血液篩查；核酸檢測；臨床分析

近年來,隨著臨床輸血率增高，血液相關的傳染病發生率也逐漸增高，因此，此類傳染病的預防成為社會各界關注的焦點。雖然，血液相關機構已按照法定要求對獻血者血液樣品進行血清學檢查，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV 和抗-TP采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測，血液傳染病得到極大程度控制和改善，但是因輸液而產生的傳染病仍然不能夠完全避免[1-2]。有研究認為，簡單的血清學檢查存在病毒感染“窗口期”漏檢的現象，因此造成血液傳染病依然居高不下的現象。“窗口期”是指病毒感染后，機體處于產生抗體的階段，普通的血清學檢查無法檢測出病毒抗體，但是機體卻實實在在存在病毒感染[3-4]。核酸檢測是指采用聚合酶鏈反應技術直擊血液標本中病毒的RNA或DNA結構，從而提高檢測的特異性[5]。本研究對核酸檢測應用于獻血者血液篩查的臨床效果進行了分析并評價，以期為獻血者血液標本更有效檢測和篩查提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集大連地區2014年1～10月無償獻血者的全血標本，將其中28 762份經常規ELISA 檢測陰性標本作為研究對象，其中男性16 741名，女性12 021名；獻血者年齡18～58歲，平均(38.5±2.0)歲。

1.2 核酸檢測血液樣品的納入與排除標準[6]對無償獻血者血液標本進行檢測，檢測內容包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV,所有檢測結果均為陰性的標本進行核酸檢測。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本制作 對獻血者進行常規采血后，將血液樣品置入5 mL容積的乙二胺四乙酸抗凝真空試管中，共制作3個真空血液樣品試管。隨后將試管放入冰箱保存,溫度控制在0～6 ℃，血液采集后24 h內對血液進行血漿分離,最后1號試管(不帶分離膠)用于血清學篩查；2號試管(帶分離膠的無酶、無熱源)用于核取(NAT)檢測,3號試管繼續保存。

1.3.2 儀器與試劑 酶聯免疫試劑有HBsAg(廈門新創、美國雅培)，抗-HCV(廈門新創、美國雅培)，抗-HIV(廈門新創)，HIV抗原/抗體(法國伯樂)。核酸檢測試劑為羅氏診斷試劑:HBV、HCV、HIV(1型+2型)核酸聯合檢測試劑(PCR-熒光法)。儀器為AT plus2&FAME24/20(瑞士哈米爾頓)，STAR標本混樣設備(瑞士哈米爾頓)，Cobas S201核酸檢測系統。

1.3.3 核酸檢測 檢測時應用全自動加樣儀和全自動核酸提取、擴增檢測系統將血液樣品混合后進行常規檢測:對每個獻血者取20 mL血漿樣品,將6名獻血者血漿樣品放入一個一級混樣池，放入后進行核酸檢測，利用全自動混樣儀加樣；一級混樣池標本采用核酸定性篩查試劑盒,在全自動核酸提取儀中應用MGP磁珠分離技術原理提取核酸,核酸擴增檢測儀擴增檢測HBV、HCV、HIV靶序列,在PDM服務器中自動判讀結果,每組檢測均設置質控對照,每個一級混樣池均含內對照；全自動核酸提取、擴增檢測系統檢出的陽性一級混樣池拆分為6個組,組成該一級混樣池的原始標本做單標本檢測,單標本檢測陽性判定為NAT陽性,單標本檢測陰性判定為NAT陰性。

1.3.4 陽性確證 對上述核酸檢測結果顯示陽性的血液標本進行單標本檢測，包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc，從而確定結果的準確性。

2 結 果

2.1 核酸檢測情況分析 檢測結果顯示，核酸檢測陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測陰性28 736份，陰性檢出率為99.91%。

2.2 陽性標本分項確證情況 見表1。將核酸檢測檢出的26份血液樣品進行確證試驗和分項鑒別，發現檢測到HBV DNA反應陽性為17份(65.38%)；未檢測到 HBV DNA,HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達65.38%。

表1 陽性標本分項確證情況

續表1 陽性標本分項確證情況

注：R表示反應性，-表示無數據，(+)表示陽性，(-)表示陰性。

3 討 論

早在20世紀末期，一些發達國家就開始將核酸檢測技術應用于血液樣品的檢驗，能夠有效對HIV等病毒進行篩查，顯著提高血液檢測技術的同時大大降低了血液疾病的傳播。近年來，我國逐漸將核酸檢測技術應用于無償獻血者的血液篩選，旨在提高輸血的安全性[7-8]。Cobas S201血液檢測系統是從美國引進的,該系統的應用機制為：利用磁珠捕獲方法提取分離靶核酸片段,并以實時熒光聚合酶鏈反應檢測血液標本的核酸濃度，該系統根據其檢測病毒種類不同，具有不同的工作靈敏度。本研究中利用的是混樣池的模式進行檢測，將多個待檢驗的樣品混合后，對混合樣品管進行檢測[9-10]。由于該系統的靈敏度極高，即使樣品中病毒濃度較低，甚至微量，其依然可以檢測出病毒核酸；此外檢測中一旦出現核酸陽性標本，應該立即利用另一種核酸檢測系統進一步做 HBV、HCV、HIV 分項鑒別試驗和乙肝兩對半檢測[11-12]。

本研究分析并評價核酸檢測應用于獻血者血液篩查的臨床效果。通過對28 762份血液樣品進行篩查后發現，核酸檢測陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測陰性28 736份，陰性檢出率為99.91%；確證試驗發現檢測到HBV RNA反應陽性為17份(65.38%)；未檢測到HBV DNA,HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達65.38%。由此表明本次檢驗中的9份樣品經Cobas S201系統檢測為陽性，經核酸確證試驗檢測為陰性，兩種檢測結果存在不吻合之處，分析原因與兩種檢測系統的病毒檢測譜不同有關，Cobas S201系統能夠檢測出HIV-1-M、HIV-2 型病毒，而核酸確證系統不能夠檢測出，因此9份樣品不排除為HIV-1-M、HIV-2 型病毒的可能。本研究結果與其他研究結果相一致[13-15]。

綜上所述，核酸檢測應用于獻血者血液篩查的效果較佳，既可有效提高獻血者的血液質量，又可提高輸血的安全性，避免重癥血液疾病，顯著提高血液的應用價值和安全性，值得相關采供血機構在血液篩查中推廣使用。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.055

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1672-9455(2015)23-3578-03

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