三種HIV 抗原/抗體檢測方法對HIV 早期感染檢測的診斷研究

常俊峰 (天水四〇七醫(yī)院，天水 741000)

艾滋病是一種全球性的嚴(yán)重危害人類健康的傳染病，其主要通過輸血、性接觸、吸毒等途徑傳播，由于艾滋病會造成全身免疫力的下降，從而引發(fā)多種并發(fā)癥而死亡，目前臨床多用抗原抗體檢查方法對HIV 病毒進(jìn)行篩查，具有敏感性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，但是第三代HIV 抗體檢測試劑對HIV 抗體產(chǎn)生前的感染無法診斷［1，2］，第四代HIV 檢測試劑檢測HIV p24 抗原和抗體，大大地提高了檢測的效能，不同試劑盒有不同的檢測效果，本研究分別使用兩個(gè)第四代HIV 檢測試劑盒對檢驗(yàn)中心懷疑HIV 感染的血液樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010 年1 月至2013 年8 月送至本實(shí)驗(yàn)中心共采集吸毒人員及性服務(wù)工作者的血液標(biāo)本3 863 份，血液標(biāo)本的分離、保存、離心均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室相關(guān)規(guī)范進(jìn)行操作。BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤(購自美國的BBI 公司)4 套，每套含有4～8 份系列樣品。分別使用兩種第4 代HIV 試劑盒(英國Abbott公司生產(chǎn)的Murex HIV Ag/Ab 檢測試劑:編號為A;荷蘭Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 檢測試劑:編號為B)，一種第3 代HIV 試劑盒［英國Abbott 公司生產(chǎn)的Murex HIV-1.2.O 試劑:(編號為C)］及HIV 間接熒光抗體試驗(yàn)試劑盒［普瑞麥迪(北京)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司］對上述血液樣本和BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤進(jìn)行檢測。

1.2 試劑與儀器 羅氏ELECSYS 2010 變色龍酶免儀，雅培Axsym 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，Bio-Rad MODEL1575 型洗板機(jī)，法國梅里埃公司(bioMerieux)mini-VIDAS 分析儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 對所有的血液樣本分別使用兩種試劑盒通過快速法與ELISA 法平行檢測HIV，檢測結(jié)果如果不同，將血液標(biāo)本及陽性血樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，確定HIV 的感染狀態(tài)。檢測完成后，所有樣品使用間接熒光抗體試驗(yàn)法重新確認(rèn)，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。對初次檢測出陽性樣本的采樣時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，比較兩種試劑盒檢測的窗口期的差異，并對BBI 轉(zhuǎn)陽血清盤檢測結(jié)果進(jìn)行描述。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 在SPSS10.0 中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料建立四格表并采用χ2檢驗(yàn)比較幾種試劑盒檢測結(jié)果是否存在差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。靈敏度=篩檢試驗(yàn)陽性人數(shù)/確診陽性人數(shù)×100%，特異度=篩檢試驗(yàn)陰性人數(shù)/確診陰性人數(shù)×100%，誤診率=1 -特異度，漏診率=1-靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 試劑盒A 和B 檢測HIV 的診斷學(xué)評價(jià)指標(biāo) P24 檢測3 863 份血液樣本共確診54 份HIV 感染陽性樣本，試劑盒A 和B 對3 863 份樣本進(jìn)行同步檢測，結(jié)果:試劑盒A、B 均完全檢出54 例HIV 感染陽性的血液樣本，試劑A 檢出的靈敏度=100%，特異度=99.61%，漏診率=0，誤診率=0.39%;試劑盒B 檢出的靈敏度=100%，特異度=99.37%，漏診率=0，誤診率=0.63%。詳見表1、2。

2.2 兩種第4 代試劑檢出結(jié)果比較 試劑A 和試劑B 檢出結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果差異不顯著(P ＞0.05)。詳見表3。

2.3 不同試劑對不同BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤檢出窗口期的情況 分別對4 套BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤采用A、B、C、P24 進(jìn)行檢測，不同廠家生產(chǎn)的第4 代HIV 抗體試劑盒A、B，第三代試劑盒C 檢測早期HIV 感染的窗口期存在差別，A 試劑、B 試劑分別較C 試劑的檢測窗口期提前5.5 和3.7 d，但是與P24 抗原試劑盒的檢出窗口期卻滯后4.25 至6.05 d。各種試劑盒檢測HIV 感染的窗口期詳見表4。

表1 試劑A 與P24 檢出結(jié)果的比較Tab.1 Comparison of results of A and P24

表2 試劑B 與P24 檢出結(jié)果的比較Tab.2 Comparison of results of B and P24

表3 兩種第4 代試劑檢出結(jié)果比較Tab.3 Comparison of detection results of fourth two generation reagents

表4 各種試劑盒檢測HIV 感染的窗口期Tab.4 All kits window period of HIV infection

3 討論

艾滋病，又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是反轉(zhuǎn)錄病毒HIV 感染導(dǎo)致全身免疫系統(tǒng)的破壞，促成很多疾病的發(fā)生，可以通過接觸黏膜組織的口腔、生殖器、肛門等或者接觸帶有病毒的血液、精液等分泌物物而傳染。艾滋病累及消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等全身多個(gè)器官，并且造成病毒、細(xì)菌、真菌等多種感染和惡性腫瘤，很多患者因?yàn)榈貌坏郊皶r(shí)的治療而死亡或者殘疾，病毒感染者不僅自身受到社會的歧視，還可能會造成病毒的繼續(xù)傳播，因此對病毒感染者進(jìn)行早期診斷是治療和防護(hù)艾滋病的重要手段。

1985 年針對艾滋病病毒(HIV)抗體的診斷試劑問世，經(jīng)過不斷的改進(jìn)已經(jīng)發(fā)展至第四代，診斷試劑的敏感性和特異性不斷提高［3］。涉及的檢測方法主要為HIV 抗體檢測、HIV 抗原抗體聯(lián)合檢測、HIV 核酸檢測等［4］，HIV 檢測的窗口問題依然是技術(shù)人員面臨的難題，也是HIV 早期診斷的難題［5］。第三代試劑使用ELISA 檢測，敏感性和特異性較第一代和第二代有所提高，由于抗體的產(chǎn)生需要有一定的過程，無法檢測到抗體產(chǎn)生前的早期HIV 感染［6］。第四代試劑盒在第三代的基礎(chǔ)上，可以同時(shí)檢測抗體和P24 抗原，大大縮短了窗口期，檢測時(shí)間較第三代診斷試劑提前了8～10 d［7］。但是不同的公司的診斷試劑的靈敏度和特異性是否存在差別，選擇合適的診斷試劑對患者至關(guān)重要。

目前市場上第四代檢測試劑主要由法國BioMerieux 公司、美國Abbott 公司、荷蘭Organon 公司等生產(chǎn)，在本研究中分別使用英國Abbott 公司生產(chǎn)的Murex HIV Ag/Ab 檢測試劑和荷蘭Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 檢測試劑對血清樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示3 863 份血清樣本，A 試劑、B 試劑和P24 抗原檢測都檢出了54 份陽性血清樣本，A、B 試劑盒檢測的靈敏度都是100%，顯示第四代試劑靈敏度很高，可能原因?yàn)?第四代試劑不是抗原和抗體檢測的簡單相加，而是將HIV-1/2 抗體檢測和P24 抗原檢測兩個(gè)反應(yīng)集于一個(gè)微孔內(nèi)同時(shí)反應(yīng)，使得一次實(shí)驗(yàn)可以檢測兩種標(biāo)志物，同時(shí)在P24 抗原檢測系統(tǒng)中加入了生物素-鏈親和素放大系統(tǒng)，使得ELISA 的反應(yīng)靈敏度進(jìn)一步加大，同時(shí)不影響P24 抗原的檢測［8］。本研究中顯示B 試劑的漏診率為0.63%，高于A 試劑的漏診率0.39%，但是兩者比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這種情況可能與第四代試劑盒本身將兩種檢測中和在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中的設(shè)計(jì)有關(guān)，同一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)合兩類不同的成分，比單獨(dú)檢測抗原或者抗體增加了非特異反應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)，從而影響了檢測的特異性，不同的公司對抗原-抗體兩種成分的結(jié)合可能存在不同，導(dǎo)致兩者檢測結(jié)果的差異［9］。

HIV 陽轉(zhuǎn)血清盤是評價(jià)HIV 早期感染檢測方法的有效工具，可以反映各種試劑檢測的窗口期［10］。本研究結(jié)果顯示第四代試劑盒A、B 的窗口期較第三代試劑盒明顯縮短，卻較P24 抗原檢測延遲4.25～6.0 d，因此說明對于HIV 患者的早期診斷，第四代試劑盒可以檢測到艾滋病毒的早期感染，雖然二者沒有顯著的差異，A 試劑的窗口期較B 試劑的窗口期短，可能A 試劑的檢測效果較好。

綜上所述，采用第四代HIV 檢測試劑盒對早期HIV 感染進(jìn)行診斷是行之有效的策略，但是隨著艾滋病疫情的蔓延，處于感染早期的被檢者將增多，若此類病例漏檢，將會因?yàn)榈貌坏郊皶r(shí)的管理而造成二代傳播，因此使用檢測效果好的第四代試劑同時(shí)對檢測陰性的患者進(jìn)行免疫印跡確認(rèn)是防止漏檢的重要策略。

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