血管生成因子在惡性胸膜間皮瘤中的表達①

謝曉潔 江 杰 韓 丹 何 波 吳 莉 (昆明醫科大學第一附屬醫院醫學影像科，昆明 650032)

惡性胸膜間皮瘤 (Malignant pleural mesothelioma，MPM)是發生于胸膜間皮細胞的一種少見惡性腫瘤，接觸石棉是MPM 的主要致病原因，云南省大姚縣二十分之一地表覆蓋青石棉［1］，是世界上少有環境致MPM 高發區。目前認為腫瘤的生長、發展和轉移均呈血管依賴性［2］，本研究通過免疫組織化學法評估MPM 患者腫瘤組織中微血管密度及相關血管生成因子的表達情況，進一步揭示MPM 與血管生成之間的關系。

1 材料與方法

1.1 病例收集 收集1990 年至2013 年間經病理確診的MPM 患者32 例，所有患者均為云南楚雄大姚籍，男女比例為2.2 ∶1，年齡范圍28～77 歲，平均(51.23±24.34)歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 蘇木精(Hematoxylin，H)和伊紅(Eosin，E)染色 對32 例蠟塊行HE 染色后于偏光顯微鏡(Olympus，BX51，Japan)下觀片，按組織病理學分為上皮、纖維肉瘤及混合型。

1.2.2 免疫組織化學測定 鼠抗人CD34 及血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)單克隆抗體工作液均購自福州邁新生物技術公司，兔抗人αvβ3 單克隆抗體濃縮液購自英國Abcam 公司，稀釋濃度為1 ∶100，二抗檢測試劑盒(K500711)購于DAKO 公司，標記物為辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，DAB 顯色。采用免疫組化S-P 法測定32 例蠟塊。

1.3 免疫組化染色陽性結果判定 CD34:表達在血管內皮細胞中，顯示小血管輪廓，陽性部位呈棕黃色。腫瘤內微血管密度(Microvessel density，MVD)判定方法:以CD34 標記MVD，參照Weidner［3］方法:先在低倍鏡下(×100)確定腫瘤血管密度最高處，再在高倍鏡下(×400)計數5 個視野內的血管數，求平均值作為MVD。VGEF:免疫反應陽性物主要位于腫瘤細胞質，呈棕黃色。整合素αvβ3:免疫組化反應受體在細胞膜和細胞質，呈棕褐色。

1.4 統計學分析 采用SPSS17.0 軟件，不同病理類型MVD 組間比較用單因素方差分析;CD34、VEGF、αvβ3 陽性率組間比較采用χ2檢驗;VEGF 與αvβ3 表達的一致性采用Kappa 檢驗，VEGF 表達與腫瘤MVD 的相關性分析采用Spearman 等級相關分析。P＜0.05 有統計學差異。

2 結果

2.1 組織病理學分型 以上皮型居多，占40.63%(13/32)，纖維肉瘤型(28.13%)和混合型(31.25%)所占比例相當。

2.2 CD34 及MVD 值測定 32 例MPM 患者中CD34 陽性27 例，陽性率為84.38%。三種病理類型比較，CD34 在混合型中表達最高，為90% (9/10)，其次為纖維肉瘤型88.89% (8/9)及上皮型76.92%(10/13)，三者表達情況差異無統計學意義(χ2值=0.927，P=0.629 ＞0.05)。以CD34 標記MVD，MVD 值:上皮細胞型20.94，肉瘤樣型22.02，混合型28.40，差異無統計學意義(F=0.328，P=0.723＞0.05)。見圖1。

2.3 VEGF 測定 VEGF 免疫組化染色陽性表達率為53.13%(17/32)，其在纖維肉瘤型中表達最高，為66.67%(6/9)，其次為混合型60.00%(6/10)及上皮型38.46%(5/13)，三者表達情況差異無統計學意義(χ2=1.975，P=0.373 ＞0.05)。見圖2。

2.4 整合素αvβ3 測定 其免疫組化染色陽性表達率為28.13%(9/32)，以纖維肉瘤型中表達最高，為44.44%(4/9)，其次為混合型30.00%(3/10)及上皮型15.38%(2/13)，三者表達情況差異無統計學意義(χ2=2.247，P=0.325 ＞0.05)。見圖3。

2.5 VEGF 與αvβ3 表達的一 致性和VEGF 及αvβ3 表達與腫瘤MVD 的相關性分析 MPM 中VEGF 與αvβ3 表達兩者呈中度一致性，Kappa 值=0.513，P=0.001＜0.05。VEGF 表達與腫瘤MVD 相關性分析表明兩者呈中度正相關(P=0.003，r=0.490)。αvβ3 表達與腫瘤MVD 相關性分析表明兩者呈中度正相關(P=0.008，r=0.559)。

圖1 CD34 陽性表達(×400)Fig.1 CD34 positive expression(×400)

圖2 VEGF 陽性表達(×400)Fig.2 VEGF positive expression(×400)

圖3 αvβ3 陽性表達(×400)Fig.3 αvβ3 positive expression(×400)

3 討論

CD34 主要標記造血干細胞髓樣細胞和血管內皮細胞，可以識別內皮細胞分化，但識別血管的敏感性與腫瘤分級無關。本組CD34 陽性表達率為84.38%，雖略低于高杰［4］報道的表達率(100%)，但均表明MPM 在各種病理類型中均存在較豐富的新生腫瘤血管。本組MVD 值測定結果與趙鶯［5］及Kaira［6］的研究結果相似，進一步證實了CD34 抗原廣泛表達于組織血管內皮細胞中。

腫瘤血管生成受多種因素的影響，其中功能最強、作用最直接的是VEGF［7］。本研究結果顯示VEGF 陽性表達率為53.13%，與國內新近研究［4］55.7%類似(44/ 79)，低于國外［8］報道75.9%(41/54)。本組中VEGF 表達與腫瘤MVD 兩者呈中度正相關，說明VEGF 的陽性表達與MVD 關系密切，VEGF 對腫瘤新生血管的生成起著重要作用。

在新生血管形成過程中，血管內皮細胞必須在整合素的介導下互相黏附并與細胞外基質黏附以形成新的血管團，其中整合素αVβ3 的作用尤為重要［9］。但其在MPM 組織中是否表達尚未見報道，本研究得到整合素αvβ3 在MPM 中的陽性表達率為28.13%，與VEGF 的表達呈中度一致性，與腫瘤MVD 呈中度正相關。表明αvβ3 與CD34 及VEGF一起，可作為反映MPM 腫瘤血管生成的指標，但其陽性表達率本組較低，需在今后的實驗中收集新鮮標本，改進實驗方法來獲得進一步的證實。

［1］羋 靜，賈賢杰，楊林生，等.大姚縣青石棉污染區惡性腫瘤死亡27 年回顧性隊列研究［J］.腫瘤，2012，32(7):516-521.

［2］Ceresoli GL，Zucali PA.Anti-angiogenic therapies for malignant pleural mesothelioma［J］.Expert Opin Investig Drugs，2012，21(6):833-844.

［3］Weidner N.Current pathologic methods for measuring intratumoral micro-vessel density within breast carcinoma and other solid tumor［J］.Br east Cancer Res Treat，1995，36(2):169-180.

［4］高 杰，于 國，王殿軍，等.惡性間皮瘤微血管密度與血管內皮生長因子的表達［J］.解放軍醫學雜志，2007，32(12):1291-1292.

［5］趙 鶯，張繼賢，黃麗麗，等.惡性間皮瘤微血管CD105 和CD34 表達及其與VEGF 關系的研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2011，18(2):124-127.

［6］Kaira K，Oriuchi N，Takahashi T，et al.L-type amino acid transporter 1 (LAT1) expression in malignant pleural mesothelioma［J］.Anticancer Res，2011，31(12):4075-4082.

［7］Rini BI.The context of blood vessels and response to VEGFtargeted therapy［J］.Clin Cancer Res，2013，19 (24):6647-6649.

［8］Ohta Y，Shridhar V，Bright RK，et al.VEGF，VEGF type C and their receptors play an important role in angiogenesis and lymphangiogensis in human malignant mesothelioma tumors［J］.Br J Cancer，1999，81(1):54-61.

［9］潘有東，張 坤，岳 姣.整合素親和力調控的機制［J］.中國細胞生物學學報，2011，33(5):457-465.