血清VEGF、IL-6、Cys-C水平與2型糖尿病腎病的關系研究

李星軍，王哲敏，郭友成，許正敏(.上海交通大學醫學院附屬新華醫院崇明分院，上海 050；.湖北省襄陽職業技術學院附屬醫院，湖北襄陽 440)

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·論 著·

血清VEGF、IL-6、Cys-C水平與2型糖尿病腎病的關系研究

李星軍1，王哲敏1，郭友成2，許正敏2
(1.上海交通大學醫學院附屬新華醫院崇明分院，上海 202150；2.湖北省襄陽職業技術學院附屬醫院，湖北襄陽 441021)

目的 研究血清血管內皮生長因子(VEGF)、白細胞介素-6(IL-6)、胱抑素C(Cys-C)水平與2型糖尿病腎病的關系。方法 選擇2型糖尿病患者100例，分為單純糖尿病(DM)組33例和糖尿病腎病67例。其中糖尿病腎病又分為早期糖尿病腎病(EDN)組35例，臨床糖尿病腎病(DN)組32例。另外選擇體檢健康者30例作為健康對照(NC)組。分別測定各組研究對象血清VEGF、IL-6和Cys-C水平，并進行相互比較。結果 單純糖尿病組、早期糖尿病腎病組、臨床糖尿病腎病組血清VEGF、IL-6和Cys-C水平依次上升(P<0.05)，VEGF與尿微量清蛋白(mALB)、IL-6和Cys-C呈明顯正相關(P<0.05)，血清IL-6水平與VEGF水平呈明顯正相關(P<0.05)。mALB與Cys-C水平呈明顯正相關(P<0.01)。結論 糖尿病腎病患者血清促炎因子IL-6、VEGF水平升高，與血清Cys-C水平、尿蛋白排泄率呈明顯正相關。血清VEGF、IL-6、Cys-C的測定可作為判斷2型糖尿病腎損害程度及預后的指標。

糖尿病； 糖尿病腎病； 血管內皮生長因子； 白細胞介素-6； 胱抑素C

糖尿病腎病(DN)是糖尿病最常見、最嚴重的慢性并發癥，隨著糖尿病發病率的逐年提高，DN已成為導致慢性腎衰竭的主要病因之一。糖尿病腎病(DN)是在糖尿病病程中出現的以蛋白尿、血尿、高血壓、水腫、腎功能不全等腎臟病變為特征的總稱[1-2]。其主要病理變化表現為腎小球、腎小管肥大，腎小球、腎小管基膜增厚、腎小球系膜區細胞外基質堆積以及腎小球硬化。本研究檢測了糖尿病及糖尿病腎病患者尿微量清蛋白(mALB)、血清胱抑素C(Cys-C)、全血糖化血紅蛋白(HbA1c)及血清中促炎因子血管內皮生長因子(VEGF)、白細胞介素6(IL-6)的水平，旨在探討促炎因子與糖尿病腎病之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1～6月湖北省襄陽職業技術學院附屬醫院體檢中心篩選的健康人30例，其中男16例，女14例，為健康對照組(NC組)。選擇同期該院腎內科確診的糖尿病患者100例，糖尿病的診斷符合1999年WHO糖尿病診斷和分類專家委員會制定的標準，糖尿病腎病的診斷參照Mogenson DN標準。根據24 h mALB水平將糖尿病患者分為3個組：單純糖尿病組(DM組，mALB<30 mg/24 h)33例,男16例、女17例，年齡(54.62±6.78)歲,病程3～18年、平均(13.3±2.4)年；早期糖尿病腎病組(EDN組，mALB 30～300 mg/24 h)35例，男19例、女16例，年齡(50.12±9.21)歲，病程4～22年、平均(14.2±3.2)年；臨床糖尿病腎病組(DN組，mALB>300 mg/24h)32例，男15例、女17例，年齡(57.61±11.23)歲,病程3～24年、平均(15.1±2.9)年。排除妊娠、腫瘤、外傷、急慢性感染、心肝及免疫性疾病。以上各組研究對象的年齡、性別比例、病程等差異無統計學意義(P>0.05)，存在可比性，所有患者均符合臨床診斷標準。

1.2 檢測方法 所有對象均空腹12 h后清晨肘靜脈采血4 mL，分離血清分裝凍存管密閉，貯存于-30 ℃冰箱中保存待測。于采血前1 d收集24 h尿液混勻后,記錄尿總量并取5 mL尿液檢查mALB。Cys-C由全自動生化分析儀檢測；HbA1c采用高效液相色譜法檢測；IL-6、VEGF采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)定量測定，試劑盒為德國IBL公司產品。

2 結 果

2.1 各組生化指標、IL-6、VEGF的比較 各組生化指標、IL-6、VEGF水平比較見表1。各組糖尿病患者HbA1c、IL-6、VEGF水平與健康對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05)。各組糖尿病患者間HbA1c水平差異無統計學意義(P>0.05)。早期糖尿病腎病組mALB、Cys-C水平與健康對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，但糖尿病各組間mALB、Cys-C、IL-6、VEGF水平差異均有統計學意義(P<0.05)。

表1 各組HbA1c、mALB、Cys-C、IL-6、VEGF水平的比較±s)

注:與健康對照組比較，aP<0.05；與單純糖尿病組比較，bP<0.05；與早期糖尿病腎病組比較，cP<0.05。

2.2 糖尿病各組Cys-C、IL-6、VEGF與生化指標HbA1c、mALB的相關分析 尿mALB水平與血清Cys-C、IL-6、VEGF水平呈顯著正相關；Cys-C水平與IL-6、VEGF水平顯著正相關；IL-6為自變量，以VEGF為因變量，Pearson相關分析表明，血清IL-6水平與VEGF水平顯著正相關(r=0.934,P<0.01)，見表2。

表2 糖尿病各組Cys-C、IL-6、VEGF與生化指標HbA1c、mALB相關性分析

注：*在α=0.01水平(雙側)上顯著相關，差異有統計學意義。

3 討 論

糖尿病腎病是糖尿病常見的微血管病變并發癥，其發病機制尚不清楚。IL-6作為一種多功能的細胞因子，可通過旁分泌或自分泌形式與腎小球系膜細胞上的IL-6受體結合，刺激腎小球系膜的增殖和細胞外基質的產生[3]；還可以作用于血管內皮細胞，誘導其表達黏附因子黏附炎癥細胞和促凝血因子促進血管內血栓的形成，增加毛細血管的通透性，從而促進糖尿病腎病的發生、發展[4]。國外Cahoon等[5]體外試驗也表明，腫瘤壞死因子(TNF)-α與糖化蛋白終末產物(AGEs)能協同刺激血管內皮細胞分泌IL-6，而葡萄糖對內皮細胞無刺激作用。本研究的相關性分析顯示，各組IL-6的水平與mALB、Cys-C、VEGF水平呈明顯正相關(P<0.01)。糖尿病腎病患者腎組織表達高水平的IL-6可能參與了糖尿病腎病發生、發展的病理生理過程，IL-6水平可作為臨床觀察糖尿病腎病病情的一項參考指標[6]。

Cys-C是腎小球濾過率的內源性標志物之一。Cys-C不受炎性反應、性別、肌肉以及年齡變化的影響，其濃度主要由腎小球濾過率決定，所以Cys-C是一個非常穩定的反映腎小球濾過率的指標，且具有較高的敏感性和特異性，是近年來發現的能夠理想反映腎小球濾過率的內源性標志物。當腎小球有輕微受損時，Cys-C的濃度會迅速升高，并且隨著病情加重而逐漸增高[7]。本研究中發現，Cys-C與mALB呈很好的相關性(r=0.912,P<0.01)，尿mALB的測定需要留取24 h尿量，標本留取較麻煩且需要防腐和記錄總尿量，檢驗前標本留取質量很難控制好，而Cys-C的檢測具有敏感性、特異性和穩定性好的特點，是一種能較好地反映腎小球濾過率的標志物，不失為一個替代尿mALB檢測的指標。

VEGF是血管內皮細胞特異的促有絲分裂素，VEGF是當前最強有力的血管生成的強烈刺激因子。欒健等[8]的動物模型研究表明糖尿病腎病腎小球VEGF表達增強，與糖尿病腎臟新生血管生成有關。正常腎組織中主要由腎小球臟層足細胞產生VEGF，因此，VEGF在微血管病變中的作用備受關注。VEGF又稱血管調理素，是作用于內皮細胞的特異性因子，具有增強血管通透性，增加微血管特別是毛細血管后靜脈和小靜脈的滲透度，誘導內皮細胞增殖，促進新生血管形成，增加黏附分子和細胞外基質產生的作用。本研究中亦發現單純糖尿病組VEGF水平高于健康對照組,VEGF在糖尿病繼發腎病的患者血清中的表達明顯升高(P<0.01)，并且糖尿病微血管病變組間比較顯示，VEGF水平在單純糖尿病組、早期糖尿病組、臨床糖尿病腎病組隨著腎病的進展逐漸升高，證明VEGF與糖尿病腎病相關，與文獻[9]報道一致,提示VEGF的高表達與尿清蛋白排泄率呈正相關。表明VEGF水平能影響糖尿病患者腎臟功能，參與糖尿病腎病的發生、發展，血清VEGF是糖尿病腎病的重要相關因子。相關分析顯示：VEGF與IL-6、mALB、Cys-C呈明顯正相關，提示VEGF在糖尿病腎病患者血清中的表達及相互影響參與疾病的進程。

總之，糖尿病腎病的進展是各種機制相互作用而形成的,本研究中血清IL-6和VEGF水平在糖尿病腎病患者中明顯升高且有明顯的相關性。Cys-C、IL-6和VEGF三者在微血管損害中可能存在協同作用，這與高濃度的VEGF可促進腎小球毛細血管內皮細胞分裂，同時促進內皮細胞釋放炎性反應因子有關，說明炎性反應因子間的相互作用在糖尿病腎病的發生、發展過程中起重要作用。臨床上可參考血清IL-6和VEGF來判斷糖尿病腎臟的損傷程度。血清Cys-C與mALB有明顯的相關性，Cys-C的檢測具有敏感性、特異性和穩定性好的特點，是一種較好的反映腎小球濾過率的標志物。

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[2]萬長春,孟澤.糖尿病腎病早期診斷的實驗室研究進展[J].臨床檢驗雜志,1998,16(3):186-187.

[3]孫林，曾麗霞，王斌,等．白細胞介素6反義RNA對腎小球系膜細胞的影響[J]．中華腎臟病雜志，1997,13(1)：6.

[4]MantovaniA，bussolinoF，IntranoM．Cytokineregulationofendothdialcellfunctionfrommolecularleveltothebedside[J]．ImmunolToday，1997,18(5):231-240.

[5]CahoonS，VinesA，SaxenaU,etal．SynergisticinductionofendothelialIL-6bydiabeticstimuliandinitiatingeventindiabeticnephropathy[J].Diabetes，2001,50(suppl2)：A153.

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[7]李春北,張燕燕．胱抑素C與超敏C-反應蛋白對2型糖尿病早期腎損害的診斷意義[J]．檢驗醫學與臨床，2011，8(4)：639-640．

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Relationship between serum levels of VEGF,IL-6 and Cys-C with type 2 diabetic nephropathy

LIXing-jun1,WANGZhe-min1,GUOYou-cheng2,XUZheng-min2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongmingBranchHospital,AffiliatedXinhuaHospital,SchoolofMedicine,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai202150,China;2.AffiliatedHospitalofXiangyangVocationalandTechnicalCollege,XiangyangHubei441021,China)

Objective To investigate the relationship between serum inflammatory factors VEGF,IL-6,Cys-C levels with type 2 diabetic nephropathy (T2DN).Methods Total 100 patients with type 2 diabetes mellitus(T2DM) were selected and divided into the early stage of diabetic nephropathy(EDN) group(35 cases) and the clinical diabetic nephropathy (DN) group(32 cases).30 healthy individuals of physical examination were selected as the normal control 30 group (NC).The serum levels of VEGF,IL-6 and Cys-C were detected and the results were compared.Results The serum levels of VEGF,IL-6 and Cys-C in the simple diabetic group,EDN group and DN group were increased in turn(P<0.05).VEGF with urinary albumin,IL-6 and Cys-C showed a obviously positive correlation (P<0.05).The serum IL-6 level was positively correlated with the serum VEGF level (P<0.05).mALB was positively correlated with Cys-C level(P<0.01).Conclusion In the patients with diabetic nephropathy,serum pro-inflammatory cytokines levels of IL-6 and VEGF are increased,serum serum Cys-C level has a significantly positive correlation with urinary protein excretion rate.Serum VEGF,IL-6 and Cys-C can serve as the indicators for judging the renal injury degree and prognosis in the patients with T2D.

diabetes mellitus; diabetic nephropathy; vascular endothelial growth factor(VEGF)； interleukin-6； cystatin C

李星軍，男，碩士，副主任技師，主要從事臨床實驗診斷學研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.21.029

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1672-9455(2015)21-3207-02

2015-03-17

2015-08-17)