615例門診就診者HPV基因檢測結(jié)果分析

林麗華，鐘 娜，喬 鳳，張麗芬

(海南省皮膚性病防治中心，海南 海口 570206)

615例門診就診者HPV基因檢測結(jié)果分析

林麗華，鐘 娜，喬 鳳，張麗芬

(海南省皮膚性病防治中心，海南 海口 570206)

目的 了解海口地區(qū)人乳頭瘤病毒(HPV)感染的情況，為HPV感染患者的治療及監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)。方法采用實時熒光定量PCR方法(FQ-PCR)對海口地區(qū)615例性病門診就診者泌尿系分泌物標(biāo)本的HPV6，11型和HR-HPV(8個型)進行檢測。結(jié)果615例樣本中檢出HPV陽性者302例，感染率為49.11% (302/615)，其中HPV6，11-DNA陽性130例，陽性率為21.14%(130/615)，HR-HPV-DNA陽性126例，陽性率為20.49%(126/615)，HPV6，11型合并HR-HPV陽性46例，占7.48%(46/615)。HPV6，11低危型與HR-HPV混合高危型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。302例HPV感染者中尖銳濕疣(CA)患者187例，占61.92%(187/302)，檢出HPV6,11-DNA陽性126例，占67.38%(126/187)，HR-HPV-DNA陽性19例，占10.16%(19/187)，HPV6,11型和HR-HPV混合感染42例，占22.46%(42/187)。CA患者感染以HPV6，11低危型為主，HPV6，11/HR-HPV次之，少部分為高危混合型HR-HPV感染，各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論尖銳濕疣主要的基因型感染是低危型HPV6,11，高危型HPV感染多以混合感染形式存在。熒光定量PCR方法檢測尖銳濕疣患者HPV基因型具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點，是臨床HPV感染分型檢測的有效方法。

人乳頭瘤病毒；FQ-PCR；感染率；尖銳濕疣

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種小分子雙鏈DNA病毒，對人皮膚、黏膜有高度親嗜性，根據(jù)其基因序列多態(tài)性，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)200余種亞型，約有40種涉及生殖道感染[1]。根據(jù)不同基因型與癌發(fā)生危險性的高低分為高危型和低危型，高危型HPV與宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變有關(guān)，包括16、18、31、33型等；低危型HPV與外生殖器尖銳濕疣等良性病變有關(guān)，包括6、11、42、43型等[2-3]。為了解海口地區(qū)HPV感染的情況，我們采用實時熒光定量-PCR法對615例性病門診就診者進行HPV6，11-DNA和HR-HPV-DNA檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取我院2012年3月至2015年2月性病門診就診者615例，男性396例，女性219例。其中尖銳濕疣(CA)患者187例。

1.2 標(biāo)本采集 男性尿道分泌物的采集用無菌棉拭子插入尿道2～3 cm輕輕轉(zhuǎn)動后取出立即置于采集官中；女性按常規(guī)消毒采集宮頸脫落細胞，置無菌采集管立即送檢。尖銳濕疣患者標(biāo)本的采集用無菌棉拭子刮取包皮、尿道口、大小陰唇、陰道口和肛周贅生物組織液，密閉送檢。

1.3 儀器與試劑 使用羅氏公司生產(chǎn)的LightCycler2.0基因擴增儀；HPV6,11型核酸檢測試劑盒，HR-HPV(8個型)核酸檢測試劑盒(包含16、18、31、33、45、52、56、58型)。試劑盒與質(zhì)控品均為中山大學(xué)達安基因股份有限公司產(chǎn)品。

1.4 DNA提取及檢測 將標(biāo)本洗脫在1 ml滅菌生理鹽水的1.5 ml離心管中，12 000次/min離心5 min，棄去上清液，于沉淀物中加入50μl DNA提取液充分混勻，100℃恒溫水浴中處理10 min，12 000次/min離心5 min，吸取上清液2μl加入毛細反應(yīng)管中進行PCR反應(yīng)。擴增參數(shù)及結(jié)果判定嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 615例性病門診就診者HPV-DNA檢測結(jié)果 615例樣本共檢出HPV陽性302例，感染率為49.11%(302/615)，其中HPV6，11型陽性130例，陽性率為21.14%(130/615)，HR-HPV混合型陽性126例，陽性率為20.49%(126/615)，HPV6，11型合并HR-HPV陽性46例，占7.48%(46/615)。HPV6，11低危型與HR-HPV混合高危型感染率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.08，P>0.05)。

2.2187 例CA患者HPV-DNA檢測結(jié)果 302例HPV感染者中CA患者187例，占61.92%(187/302)，其中檢出HPV6，11型陽性126例，占67.38%(126/187)，HR-HPV混合型陽性19例，占10.16%(19/187)，HPV6，11型和HR-HPV混合感染42例，占22.46% (42/187)。CA患者感染以HPV6，11低危型為主，HPV6，11/HR-HPV次之，少部分為高危混合型HR-HPV感染，各類型HPV-DNA檢測結(jié)果比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=128.95，P＜0.01)。

3 討 論

HPV是一種小分子雙鏈DNA病毒，對人體的皮膚和黏膜具有高度親和力[4]。按其致癌性可分為高危型和低危型兩大類，流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染型別與地區(qū)和人群差異有關(guān)，分析感染情況以及基因型分布可以有效判斷患者預(yù)后，具有十分重要的臨床價值[5]。本文通過對615例海口地區(qū)性病門診就診者的泌尿系分泌物樣本，用熒光定量PCR技術(shù)進行HPV6， 11-DNA和HR-HPV(8個型)DNA檢測，共檢出HPV陽性302例，感染率為49.11%，其中HPV6，11-DNA陽性130例，陽性率為21.14%，HR-HPV-DNA陽性126例，陽性率為20.49%，明顯高于王小倫等[6]報道的江西萍鄉(xiāng)HPV感染率(29.6%)。這可能與檢測的對象、采用的檢測技術(shù)不同有關(guān)，臨床上應(yīng)給予重視。

CA是HPV引起的一種性傳播疾病(STD)，以瘤樣增生性皮損為主要臨床表現(xiàn)。海口地區(qū)302例HPV感染者中有187例為CA患者，發(fā)病率高達67.36%，其中121例為男性，經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)男男同性戀者占30%，相關(guān)部門須引起重視，加強宣傳教育，制訂科學(xué)的干預(yù)措施，阻斷HPV感染途徑，降低CA發(fā)病率。

目前HPV檢測方法有聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、實時熒光PCR、PCR-反向定點雜交法、導(dǎo)流雜交法、流式熒光雜交法，我們采用了實時熒光定量-PCR方法，該法是一種較簡單的分子生物學(xué)技術(shù)，具有特異性強、敏感度高、步驟簡單、自動化程度高、操作快速、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點[7]，為臨床早期提供可靠的診斷依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。

本文結(jié)果初步反映了性病門診就診者HPV感染的情況，為臨床對HPV感染患者的治療監(jiān)測及預(yù)后判斷等提供重要的科學(xué)依據(jù)。

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[3]Lee CB,Choe HS,Hwang SJ,et al.Epidemiological characeristics of genital herpes and condyloma acuminate in patients presenting to urologic and gynecologic clinics in Korea[J].J Infect Chemother, 2011,17(3):351-357.

[4]Scherpenisse M,Mollers M,Schepp RM,et al.Detection of systemic and mucosal HPV-specific IgG antibodies in adolescent girls one and two years after HPV vaccination[J].Hum Vaccin Immunother, 2012,9(2):543-546.

[5]Giuliano AR,Lazcano Ponce E,Villa LL,et al.The human papillomavirus infection in men study:human papillomavirus prevalence and type distribution among men residing in Brazil,Mexico,and the United States[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prey,2008,17 (8):2036-2043.

[6]王小倫,譚亞林,許 琦.人乳頭瘤病毒檢測篩查早期宮頸癌的意義[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(33):191-192.

[7]賴迪輝,朱 威,連 石.單純皰疹病毒實驗室檢測方法的研究進展[J].中國計劃生育學(xué)雜志,2010,6(177):380-381.

Human papillomavirus gene analysis of 615 out-patients.

LIN Li-hua,ZHONG Na,QIAO Feng,ZHANG Li-fen. Hainan Provincial Center for STD/Skin Disease Control and Prevention,Haikou 570206,Hainan,CHINA

ObjectiveTo explore human papillomavirus(HPV)infection in people in Haikou,China,and provide a basis for the treatment and monitoring of HPV-infected patients.MethodsThe urinary secretion specimens of 615 patients from Out-patient Department of Venereal Diseases were analyzed with real-time fluorescent quantitation PCR(FQ-PCR)for HPV6,11 and HR-HPV(8 types).ResultsOf the 615 specimens,302(49.11%,302/ 615)were positive of HPV,including 130(21.14%,130/302)positive of HPV6,11 DNA,126(20.49%,126/302)positive of HR-HPV DNA,and 46(7.48%,46/302)positive of both HPV6,11 and HR-HPV DNA.There was no statistically significant difference between the low-risk group(HPV6,11)and the high-risk group(HPV6,11 combined with HR-HPV),P>0.05.Of the 302 HPV-infected patients,187(61.92%,187/302)had condyloma acuminata(CA),out of which 126(67.38%,126/187)were positive for HPV6,11 DNA,19(10.16%,19/187)positive for HR-HPV DNA and 42(22.46%,42/187)positive for both HPV6,11 and HR-HPV DNA.Infection with low-risk HPV6,11 was mostly seen in these CA patients,followed by mixed infection with both HPV6,11 and HR-HPV and then by high-risk infection with HR-HPV,where the differences among groups were significant(P＜0.01).ConclusionThe main genotype of CA is low-risk HPV6,11,while the high-risk genotype of HPV often exists in a mixed status.Being rapid and precise in the determination of HPV genotype in CA patients,fluorescent quantitation PCR is an effective clinical method for classifying HPV infection.

Human papillomavivus;Fluorescent quantitation PCR;Infection rate;Condyloma acuminata

R373

A

1003—6350（2015）18—2723—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.18.0988

2015-05-10)

林麗華。E-mail：59940784@qq.com