醫療器械的微生物學檢驗過程以及方法探究

王亞棋 蔡玉龍

摘要：本文對醫療器械當中的微生物學檢驗的過程還有微生物學檢驗方法等方面進行了具體的闡述，利用對檢驗樣品進行隨機抽樣的檢驗方法，對樣品進行隨機抽取，根據法定以及檢驗的標準進行微生物學檢驗。這對于醫療器械的安全使用以及器械的質量保障等方面來講是十分重要的。

關鍵詞：醫療器械 ?微生物學檢驗 ?過程 ?方法

0 引言

我國醫療器械行業伴隨著國家對此的大力支持還有科技的不斷進步而快速發展著，醫療器械在診斷疾病和治療疾病等方面都得到了廣泛的應用。應用的廣泛使得人們也提出了這樣的問題：醫療器械的衛生以及安全方面是否合格和達標？會不會對人產生負面的影響？

現代科學技術在不斷地向前發展著，這也必將帶動醫療方法的進步，而越來越多的醫療器械為我們指明了一個新的且十分重要的研究方向——醫療器械的微生物檢驗。

1 微生物的概念

用人的肉眼無法分別的微小生物統稱為微生物。微生物的結構十分簡單，且活性極強，數目龐大。在二十世紀中后期，一套包括顯微技術以及純培養技術和培養皿等在內的微生物學檢驗成為了一個獨立學科。

2 采集檢驗樣品

筆者隨機對十家生產醫療器械的企業進行了樣品的隨機抽取，并對樣品進行了調查以及分析，為的是對于一次性使用醫療器械產品的微生物學指標的檢驗現狀予以較為精確的把握。

首先，以隨機抽樣作為樣品的選取辦法，盡力保證選取的樣品可以代表被檢驗的物質。其次，在進行采樣環節的時候，筆者先對這些企業的生產流程以及周圍的環境等基本的情況加以了解和把握。對其可能存在的污染源等等進行初步審視和檢查。這樣做也可以對這些樣本的衛生狀況及其質量等方面進行初步的反映。

對樣品的選取必須要依照無菌操作的程序要求，要對樣品進行滅菌處理，將環境當中的微生物污染等進行避免，為了免除殺掉樣品中的微生物這一隱患，包括所用的用具在內，一定不可以用酒精等等來進行處理。要使樣品當中的微生物狀況保持原來的樣子，在檢驗進行之前一定不能發生變動。要對項目和分析方法還有被檢驗物的均勻程度等要求為參照進行分析，以此為依據來確定采樣的數量。為檢驗和復檢以及留樣，樣品需要一式三份。

3 檢驗樣品管理程序

迄今為止，判定某種產品的質量主要是通過檢驗該產品的樣品實現的，如果樣品檢驗合格就推斷所檢批次的產品合格，反之就不合格。樣品在這個推理鏈中起著紐帶的作用，應確保其可信度或可靠度。樣品從采集到檢驗以及最后的處置，經歷了多個環節，如果失控，隨時都能改變其可信度或可靠度。因此，必須對樣品進行規范、科學和嚴格的管理。規范的樣品管理程序一般包括采樣管理、運送過程管理，輸入管理（接收、標識、貯存）輸出管理（確認、準備、流轉）等環節。

根據ISO/IEC-17025實驗室國家認可對樣品管理的要求，實驗室（特別是第三方實驗室）在本單位的質量管理體系中，應根據上述環節建立如下的樣品管理程序：委托書→任務單→采樣→標識→運送→接收→唯一性標識→貯存、準備、確認→流轉→處置。

需要注意的是：在對樣品進行檢驗的過程當中所使用的一切器皿和試劑還有溶液是必須要經過滅菌處理的;在檢驗實驗室當中可能會使用到的一切設備都應當對其進行校正和檢查;在采集選取完樣品之后，要以國家的標準檢驗方法為參照，保持負責和認真的態度來對樣品檢驗外觀，一定要注意，樣品不要受到環境中的微生物的污染;必須選用被玻璃器皿蒸餾過的蒸餾水抑或是無離子水來供培養基以及試劑所用;在結束對選取的樣本的檢驗工作之后，要立即清洗攜帶細菌的器皿等。

4 醫療器械的微生物學檢驗方法

細胞以及分子等等都已經被微生物學檢驗所深入，在對醫療器械進行的微生物學檢驗中已經利用了不少新的方法以及技術。在微生物學檢驗的項目當中，當數細菌學檢驗為推廣廣度最廣的項目了。細菌檢驗的最為重要的方法就是細菌形態學檢查了。該檢查可以以其形態一級結構還有染色反應為參照根據，也是細菌的分類以及鑒定的基本。

4.1 顯微鏡檢查 顯微鏡可以觀察到人類肉眼無法分辨的個體及其微小的細菌。一般由兩部分組成，一是光學顯微鏡;二是電子顯微鏡，其中光學顯微鏡是用來觀察一般的形態以及結構的，只用使用電子顯微鏡才可以觀察到新的內部結構。另外，光學顯微鏡主要包括普通光學顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡等，電子顯微鏡主要包括透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡等。

4.2 染色標本檢查 細菌和周圍的環境在經過染色之后會產生比較鮮明的對比，細菌的大小以及排列等特征以及其特殊的結構會經由光學顯微鏡觀察到。細菌染色的程序大多是：干燥-固定-媒染-脫色-復染。

染色標本檢查常用的方法為以下幾種：

4.2.1 單染色法。用一種染料將細菌和周圍物體染成同一種顏色。細菌經單染色法處理后，可觀察其形態、排列、大小及簡單的結構，但不能顯示各種細菌染色性的差異。

4.2.2 復染色法。用兩種或以上的染料染色的方法。常用的包括革蘭染色法以及抗酸染色法。

革蘭染色是細菌學中最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數標本外，絕大多數標本在分離培養之前都要進行革蘭染色、鏡檢。 進行革蘭染色可鑒別細菌，初步識別細菌，縮小范圍，有助于進一步鑒定。

抗酸染色分為抗酸性細菌和非抗酸性細菌兩類。

4.2.3 熒光染色。熒光染色法敏感性強，效率高而且容易觀察結果，有很大的實用價值。

除以上所述染色方法外，還有鞭毛染色、異染顆粒染色等等幾種。

4.3 不染色標本檢查 細菌標本不經染色直接鏡檢，可觀察生活狀態下細菌的形態及其運動情況，一般常有懸滴法、壓滴法。懸滴法是在凹型載玻片的凹窩周圍涂上少量的凡士林，同時在干凈的蓋玻片的中間用接種環點少量無菌水，在其中再點上少許培養好的細菌。如果液體培養物就直接將培養液滴一小滴在蓋玻片上。然后，將此蓋玻片翻過來，使液滴下懸，正好使液滴容納在凹型載玻片的凹窩中，輕輕地按一下，使其和凡士林粘緊。而壓滴法是用接種環挑取細菌培養液或細菌生理鹽水懸液兩環，置于潔凈載玻片中央，覆以蓋玻片。制片時，菌液要適量，不可外溢，并避免產生氣泡。

4.4 基因探針技術 基因探針技術的作用原理是同源序列的核酸鏈在一定條件下能夠形成穩定的互補DNA、RNA或DNA、DNA鏈條，此時可以利用具備高度特異性片段制成的基因探針來對不同細菌進行識別。基因探針具有減少因基因片段長度的多態性導致的分析條帶數的增多，例如法國生物一梅里埃公司的GEN、PROBE基因探針檢測系統，對特定菌落進行分離并進行確證試驗僅需要30分鐘。這項技術的缺點是對目標菌以外的細菌無法檢測識別。

4.5 細菌直接計數法 這種方法主要包括流式細胞儀（flow cytometry，FCM）和固相細胞計數（solid phase cytometry，SPC）法。這種方法的原理就是利用激光作為發光源，光束在聚焦、調整后對樣品流進行垂直照射，這樣被熒光染色的細胞就能夠產生散色光和激發熒光。光散射的信號能夠標志細胞體積的大小，信號強度則是細胞膜表面抗原的輕度或者核內物質濃度的反應，基于此散射光信號和熒光信號就能夠對微生物的大小、數量、形狀進行預估。這種方法的優點是靈敏度高，且可以對細菌的性質與數量同時鑒定。目前這項技術可以對細菌總數、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等進行檢測。對特定細胞進行技術統計，就能夠對不同細胞進行精確度較高的檢測。進行過濾樣品的操作之后，實驗者可以存留的微生物進行熒光標記，用激光掃描儀就可以對其鑒別。這種方法的優點就是對生長速度慢的微生物能夠進行快速檢測，其檢測速度能夠遠高于傳統的平板計數法，缺點是成本較高，因此推廣使用具有一定困難。

另外，除了上述醫療器械的微生物學檢驗方法外，還存在一些準確、省時、省力和省成本的快速檢驗方法，比如即用型紙片法、生物化學技術、選擇鑒定用培養基法、免疫學技術、全自動微生物分析系統等。

5 結束語

在醫療器械的微生物學檢驗當中，以法定的標準以及方法為參照是十分重要的。在這些微生物學檢驗方法當中，應用最廣泛的當屬細菌學檢驗。不久的將來，在對于醫療器械的微生物學檢驗領域，更多的方法會被研究。微生物學檢驗也會更加被應用以及推廣。

參考文獻：

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