宮頸病變組織中 USP22、HIF-1α表達變化

摘要:目的　觀察宮頸病變組織中泛素特異性肽酶22(USP22)、缺氧誘導因子1α(HIF-1α)表達變化。方法選擇15例正常宮頸(對照組)、25例CIN(CIN組)、45例宮頸癌(宮頸癌組)患者的宮頸組織，分別用免疫組化法、RT-PCR法檢測各組宮頸標本中的USP22、HIF-1α蛋白及mRNA。結果　對照組、CIN組、宮頸癌組USP22蛋白陽性表達率分別為0、32．0%、57．8%，HIF-1α蛋白陽性表達率分別為20．0%、56．0%、82．2%。各組USP22、HIF-1α蛋白陽性表達率比較，P均＜0．05。對照組、CIN組、宮頸癌組USP22 mRNA相對表達量分別為1．047±0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相對表達量分別為1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122，各組USP22、HIF-1α mRNA相對表達量比較，P均＜0．05。結論　宮頸組織USP22、HIF-1α表達隨宮頸病變惡性程度提高而升高，二者共同參與宮頸惡性病變的發生發展過程。

doi: 10．3969/j．issn．1002-266X．2015．38．022

文獻標志碼: B

文章編號: 1002-266X(2015)38-0056-02

通信作者:孔紅霞

宮頸癌是全球最常見的婦科惡性腫瘤之一。從宮頸上皮內瘤變(CIN)演變成宮頸癌一般歷時數年，其間適當干預可阻止惡變。泛素特異性肽酶22 (USP22)是一種特異性較高的去泛素化酶，在多種惡性腫瘤中普遍高表達，也是腫瘤干細胞標志物之一 ［1～3］，但在宮頸疾病的表達國內尚未見報道。缺氧誘導因子1α(HIF-1α)是組織細胞在缺氧狀態下最主要的轉錄因子，在腫瘤的血管形成、能量代謝、侵襲轉移等方面起著關鍵作用 ［4］。2014年1～10月，我們檢測比較了正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中USP22、HIF-1α蛋白及mRNA表達，探討二者在宮頸癌和CIN診斷、治療及預后判斷中的臨床價值。現報告如下。

1材料與方法

1．1臨床資料　宮頸癌組織45例(宮頸癌組)，取自行子宮全切術治療的宮頸癌患者，年齡29～65 歲;腺癌2例，鱗癌43例;臨床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期20例，Ⅲ期及以上7例;病理分級G 1級20例，G 2級14例，G 3級11例;術前均未接受放化療。CIN標本25例，取自行宮頸錐切術或子宮全切術的CIN患者，年齡24～55歲;正常宮頸組織標本15例(對照組)，取自子宮肌瘤行子宮全切術患者，年齡40～59歲。

1．2 USP22、HIF-1α蛋白檢測方法　采用免疫組化法。取各組宮頸組織標本，甲醛固定，石蠟包埋。免疫組化染色試劑盒購于武漢三鷹生物技術有限公司，嚴格按說明書操作。USP22以細胞核中出現棕黃色顆粒為陽性，HIF-1α以細胞核和細胞質中均出現棕色顆粒為陽性。高倍鏡下取10個視野，每個視野至少計數100個細胞。陽性細胞數＜5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，51%～75% 為3分，≥75%為4分;陽性細胞染色強度，細胞無顯色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，黃棕色為3分。2項評分乘積＜1為陰性，≥1為陽性。

1．3 USP22、HIF-1α mRNA檢測方法　采用RTPCR法，嚴格按照試劑盒說明書操作，以GAPDH作為內參。ΔCT = CT(目的基因)－CT(內參基因)，以ΔCT值代表宮頸組織目的基因的表達情況，以2 －ΔΔCT代表各組宮頸組織目的基因表達相對于內參的變化倍數。

1．4統計學方法　采用SPSS 16．0統計軟件。組間比較采用χ 2檢驗和方差分析。P＜0．05為差異有統計學意義。

2　結果

2．1 USP22、HIF-1α蛋白　對照組、CIN組、宮頸癌組USP22蛋白陽性表達率分別為0、32．0%(8/25)、57．8% (26/45)，HIF-1α蛋白陽性表達率分別為20．0% (3/15)、56．0% (14/25)、82．2% (37/45)。各組USP22、HIF-1α蛋白陽性表達率比較，P均＜0．05。。

2．2 USP22、HIF-1α mRNA對照組、CIN組、宮頸癌組USP22 mRNA相對表達量分別為1．047± 0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相對表達量分別為1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122;各組USP22、HIF-1α mRNA相對表達量比較，P均＜0．05。

3　討論

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，分子靶向治療已經成為近年來宮頸癌研究的熱點 ［5］。USP22是泛素特異性水解酶家族成員之一，在各種惡性腫瘤中高度表達。其基因位于人類第17號染色體上，編碼的蛋白質主要通過去泛素化的作用，調節修飾細胞內一系列的生物化學反應，如細胞的生長分化、控制細胞周期、激活轉錄因子、調控信號轉導通路等。研究 ［6］認為，USP22可作為腫瘤干細胞新標簽，有望成為控制腫瘤的關鍵點。其作用機制可能是USP22將組蛋白H2A、H2B泛素化作用降解，從而控制基因復制和表達，以此調節細胞周期 ［7］。鄧美洲等 ［8～10］采用RNA干擾技術有效沉默USP22基因表達，明顯抑制了腫瘤細胞生長，但具體機制仍不明確。胡晶等 ［10］報道，USP22表達與小細胞肺癌病理分級、臨床分期、淋巴轉移等密切相關。近年來有學者報道，USP22在直腸癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、口腔鱗癌、食管鱗癌中高表達，但在宮頸癌中的表達國內尚無報道。本研究結果顯示，USP22蛋白、mRNA在宮頸癌組織中同樣高表達，提示USP22在宮頸癌的發生發展中起著關鍵作用。

HIF-1α是與腫瘤缺氧微環境有關的核心轉錄因子 ［11］。正常組織中HIF-1α主要通過泛素化作用降解，若過表達則會導致下游的靶基因高表達。例如，HIF-1α作用于糖酵解關鍵酶為腫瘤的生長提供能量，或作用于血管內皮生長因子(VEGF) ［12］等，從而為腫瘤血行轉移和淋巴轉移提供了保障。文獻 ［13］報道，宮頸癌組織中HIF-1α表達與組織病理分級、分期等相關，可作為早期宮頸癌和宮頸癌預后的判斷指標。尤其是HIF-1α、VEGF在宮頸癌中的表達高度相關 ［13，14］，更進一步證實，HIF-1α為宮頸癌腫瘤細胞生長提供了血供，為腫瘤細胞轉移開辟了道路。本研究結果與之相符。本研究結果顯示，宮頸病變組織中USP22、HIF-1α表達變化趨勢一致。這可能是由于USP22去除了與HIF-1α結合的泛素，使HIF-1α高表達; HIF-1α作用于下游VEGF促使血管生成，為淋巴結轉移開辟道路，同時激活糖酵解的關鍵酶為腫瘤提供能量。USP22過表達可調節細胞周期，使腫瘤細胞無限增殖，無限增殖的腫瘤細胞就會形成缺氧微環境;這一方面誘導了HIF-1α的高表達，另一方面又可反過來影響機體泛素—去泛素化的平衡，激發USP22高表達。有研究 ［15］表明，當細胞處于氧飽和度相對較高的狀態下，HIF-1α幾乎不表達。是否可以通過調節氧濃度來調控USP22的表達從而控制腫瘤發展，有待進一步研究。