外陰鱗狀上皮增生皮損組織中K17、IFN-γ、PCNA的表達變化及意義

李娟，李宗恒，唐利，李燕，陳莊

(1瀘州醫學院附屬醫院，四川瀘州 646000；2瀘州醫學院)

外陰鱗狀上皮增生皮損組織中K17、IFN-γ、PCNA的表達變化及意義

李娟1，李宗恒1，唐利2，李燕2，陳莊2

(1瀘州醫學院附屬醫院，四川瀘州 646000；2瀘州醫學院)

目的 觀察外陰鱗狀上皮增生皮損組織中角蛋白17(K17)、干擾素γ(IFN-γ)、增殖細胞核抗原(PCNA)的表達變化，并探討其意義。方法 外陰鱗狀上皮增生患者27例，取其皮損組織作為A組，取病灶周圍正常皮膚組織作為B組。采用免疫組化SP法檢測兩組PCNA、K17和IFN-γ的表達，并分析其相關性。結果 A組增殖指數26.24%±6.60%，B組10.47%±4.77%，P<0.01。A組K17、IFN-γ的光密度值均高于B組(P均<0.01)。B組K17與IFN-γ的表達無相關性(r=0.122，P>0.05)，A組K17與IFN-γ表達呈正相關(r=0.607，P<0.01)。結論 外陰鱗狀上皮增生可能與皮損組織中PCNA、K17、IFN-γ表達增加有關。

外陰鱗狀上皮增生；角蛋白17；干擾素γ；增殖細胞核抗原；免疫組織化學

外陰鱗狀上皮增生屬于外陰白色病變的一種類型，迄今發病機制尚未闡明。研究認為，T細胞介導的局部免疫失調在外陰白色病變的發病中可能發揮一定作用[1]。由Th1細胞分泌的細胞因子如白細胞介素12(IL-12)、干擾素γ(IFN-γ)在外陰白色病變組織中表達明顯高于正常皮膚組織[2]。研究發現，IFN-γ通過促進角蛋白17(K17)表達及K17和T細胞之間形成互相促進的環路，在銀屑病的發病、加重、慢性化及復發過程中發揮關鍵作用[3]；此外，在表皮角質形成細胞出現異常增殖、分化時，都可出現K17的異常表達[4]。增殖細胞核抗原(PCNA)是細胞周期相關蛋白，參與DNA的合成，是反映細胞增殖活性的常用指標。本研究觀察外陰鱗狀上皮增生皮損組織PCNA、K17、IFN-γ的表達情況，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2010年3月～2013年9月瀘州醫學院附屬醫院收治外陰鱗狀上皮增生患者27例，均經臨床及病理確診，年齡40～60歲、平均46歲，2個月內均未接受局部皮損治療及服用皮質類固醇激素、免疫抑制劑，分別取其外陰鱗狀上皮增生皮損組織作為A組，病灶周圍正常皮膚組織作為B組。

1.2 方法

1.2.1 病理觀察 采用HE染色。將A、B組標本常規用4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋、切片、脫蠟至水，常規HE染色，乙醇梯度脫水后二甲苯透明，中性樹膠封片。光鏡下觀察組織及細胞形態。

1.2.2 皮膚組織PCNA、K17、IFN-γ檢測 采用免疫組化SP法。分別將A、B組皮膚組織進行石蠟切片，常規脫蠟至水，放入檸檬酸修復液內修復，3% H2O2封閉阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS反復清洗，加入PCNA、K17、IFN-γ一抗(工作液濃度均為1∶100)，4 ℃過夜；加入二抗，37 ℃孵育30 min；DAB顯色。增殖指數：隨機選擇5個高倍視野(Olympus顯微鏡，CX-31型，物鏡400倍)，計算PCNA陽性細胞所占百分數，計數3次取平均值即為增殖指數。K17、IFN-γ：采用Motic Med6.0數碼醫學圖像分析系統，在相同的放大倍數下每個切片計數10個視野，以陽性細胞染色的光密度值(OD值)表示表達量。

2 結果

2.1 兩組HE染色結果 A組表皮角化過度，棘層肥厚，上皮嵴不同程度向下延伸，真皮淺層有不同程度淋巴細胞和少量漿細胞；B組無上述病理表現，顯示正常皮膚組織。

2.2 兩組增殖指數比較 A組增殖指數為26.24%±6.60%，B組為10.47%±4.77%，P<0.01。兩組PCNA免疫組化染色結果見插頁Ⅰ圖2。

2.3 兩組K17、IFN-γ陽性染色細胞定位及定量結果比較 A組K17、IFN-γ的OD值分別為0.198 9±0.043 9、0.212 3±0.042 7，B組分別為0.115 4±0.038 4、0.069 6±0.058 8，兩組比較P均<0.01。兩組K17、IFN-γ陽性染色細胞定位見表1，免疫組化染色結果見插頁Ⅰ圖2。

2.4 相關性分析結果 B組K17與IFN-γ無相關性(r=0.122，P>0.05)。A組K17和IFN-γ呈正相關(r=0.607，P<0.01)。

3 討論

外陰鱗狀上皮增生是以外陰鱗狀上皮細胞良性增生為主要病理改變的外陰疾病，并出現外陰皮膚和黏膜色素改變和變性，是常見女性外陰慢性疾病[1]。

PCNA是細胞周期相關蛋白，從G1后期PCNA表達就開始增加，S期持續在高水平[5,6]，其表達水平能夠較準確地反映細胞的生長速度，與細胞增殖狀態密切相關，是反映細胞增殖活性的常用指標。本研究結果顯示，外陰鱗狀上皮增生皮損組織增殖指數明顯高于正常皮膚組織；說明外陰鱗狀上皮增生皮損組織的細胞增殖活性強，處于增殖狀態。

角蛋白是一種廣泛存在于表皮角質形成細胞內的蛋白，具有顯著多樣性[7]，具有維持細胞分化、參與細胞定位等功能[8]。角蛋白的特異性表達依賴于細胞類型、組織類型、發展階段、分化狀況及疾病的影響等[9,10]。在生理情況下，K17主要在汗腺基底細胞、外毛根鞘及皮膚基底細胞表達[11]；在病理情況下，如創面愈合的表皮、炎癥性皮膚病、某些皮膚腫瘤及病理性或轉化型增生組織K17常過度表達[12]。在本研究中，K17主要表達于正常皮膚組織的基底層、外陰鱗狀上皮增生皮損組織的全層，且外陰鱗狀上皮增生皮損組織中K17表達較正常皮膚組織明顯增多；說明K17異常過多表達可能是表皮增殖過度、生長速度明顯快于正常皮膚的原因之一。

研究發現，外陰鱗狀上皮增生皮損組織IL-12、IFN-γ的表達明顯高于正常對照皮膚組織[2]。本研究發現，IFN-γ主要表達于外陰鱗狀上皮增生皮損組織的全層，表達強度明顯高于正常皮膚組織；說明IFN-γ參與外陰鱗狀上皮增生的發病，其異常增多可能是表皮從正常發展為外陰鱗狀上皮增生的重要原因之一。

本研究相關性分析結果顯示，正常皮膚組織中IFN-γ和K17無相關性，外陰鱗狀上皮增生皮損組織中IFN-γ與K17呈正相關。機制可能為，病理情況下角質形成細胞主要對淋巴細胞產生的細胞因子起反應，細胞因子IFN-γ可以激活STAT1特異的轉錄因子，進而促進表皮細胞K17基因表達[13]。體外研究證實，IFN-γ可以誘導K17表達，K17是迄今為止報道的IFN-γ能惟一誘導表達的一種角蛋白[14]。

綜上推測，各種內外因素刺激外陰皮膚，使外陰真皮中的慢性炎細胞釋放以Th1型細胞為主的細胞因子，其中 IFN-γ為主的細胞因子被激活，使STAT1誘導K17基因大量表達，導致表皮組織中K17大量表達[15]，角質形成細胞大量增生，促進棘層肥厚、表皮增生[16]、過度角化等改變，導致炎因子持續存在，最終導致外陰鱗狀上皮增生的發生、發展。

文中針對傳統空時結構對時變干擾應對能力較差的問題，提出了空時頻抗干擾結構，不僅能夠有效地抑制大量寬帶干擾和窄帶干擾[19-20]，同時改進的子空間估計算法能快速的估計時變的干擾子空間以及信號子空間，估計誤差大大降低，從而提高了PASTd算法的魯棒性，對于干擾源實時變化和高動態環境下的抗干擾技術研究，有著較高的實際應用價值和意義。

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Expression and significance of K17, IFN-γ and PCNA in skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva

LIJuan1,LIZong-heng,TANGLi,LIYan,CHENZhuang

( 1TheAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege,Luzhou646000,China)

Objective To observe the expression levels of the keratin 17 (K17), interferon-γ (IFN-γ) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva, and to explore their significance. Methods Twenty-seven patients with squamous hyperplasia of vulva, the lesions were taken as group A and the normal epidermis surrounding the lesions as the group B. The expression levels of PCNA, K17 and IFN- γ were detected by the immunohistochemical SP method, and the correlations with the squamous hyperplasia of vulva were analyzed. Results The proliferation indexes of group A and group B were 26.24%±6.60% and 10.47%±4.77%, respectively (P<0.01). The average optical density of K17 and IFN- γ in the group A was significantly higher than that in the group B (allP<0.01). In the group B, the expression of K17 was not related with the IFN-γ expression (r=0.122，P>0.05). In the group A, the expression of K17 was positively correlated with the IFN-γ expression (r=0.607，P<0.01). Conclusion The increased expression levels of K17, IFN-γ and PNCA in the skin lesions of patients with squamous hyperplasia of vulva has significantly relevance to its pathogenesis.

squamous hyperplasia of vulva; keratin 17; interferon-γ; proliferating cell nuclear antigen; immunohistochemistry

瀘州醫學院附屬醫院研究項目(09053)。

李娟(1984-)，女，碩士研究生，主要從事皮膚免疫病理學及小兒疾病研究。E-mail: lijuanyoyo@foxmail.com

陳莊(1954-)，男，博士，研究員，主要從事免疫病理學研究。E-mail: 917744799@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.12.007

R751；R36

A

1002-266X(2015)12-0024-03

2014-05-16)